多種常見鮮中草藥抑菌效果測(cè)定

為了研究新鮮中草藥對(duì)細(xì)菌的抑制作用，選取了常見的8種鮮中草藥獲取藥汁并且運(yùn)用煮沸和低溫超速離心進(jìn)行處理，采用體外抑菌的打孔法和牛津杯法對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌的敏感性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示：新鮮酢漿草對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌都具有抑制作用，新鮮金銀花等7種中草藥對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌的生長(zhǎng)沒有抑制作用。

一、材料與方法

1.主要藥品。苦賣菜、酢漿草、車前草、金銀花、蒲公英、板藍(lán)根、魚腥草、蒼耳子

2.主要儀器。BCD-555WKM華凌電冰箱、GNP-9160型隔水式恒溫培養(yǎng)箱、GZX-9140 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器。

3.試驗(yàn)菌株。大腸桿菌和葡萄球菌

4.試驗(yàn)方法。（1）干品中藥提取物的制備。每種中藥均采用水煎法制備水提物。苦賣菜、車前草、金銀花、板藍(lán)根、蒼耳子、酢漿草、魚腥草、蒲公英各稱取50 g，分別置于 500 mL 燒杯中，加蒸餾水 300 mL 浸泡30 min，加熱至沸騰，然后改用文火繼續(xù)煎煮，30 min后趁熱過濾(4層紗布)，收集濾液。藥渣中再加蒸餾水200 mL，同法煎煮、過濾。將兩次濾液相混，水浴濃縮后涼至室溫，用100 mL容量瓶定容后進(jìn)行高壓滅菌，制得各濃度為0.5 g/mL的水煎液，4℃保存，備用，并測(cè)定其pH值。

（2）鮮中草藥原液的稀釋。制備的干品水煎液的濃度為0.5 g/mL，根據(jù)每種鮮中草的折干率（酢漿草、金銀花和蒲公英的折干率約為5∶1，魚腥草和車前草的折干率約為4∶1，苦荬菜和板藍(lán)根的折干率約為3∶1，蒼耳子的折干率約為2∶1）將鮮中草藥物原液用滅菌蒸餾水進(jìn)行稀釋，使終濃度與干品水煎液濃度一致，4℃?zhèn)溆谩?/p>

（3）試驗(yàn)菌液的制備。將大腸桿菌和葡萄球菌的純培養(yǎng)物接種于含5.0 mL的血清肉湯培養(yǎng)基的試管中，37℃培養(yǎng)24 h，用滅菌生理鹽水稀釋至其濁度0.5麥?zhǔn)蠁挝唬藭r(shí)肉湯中細(xì)菌數(shù)約1.5×l08CFU/mL。并且將兩種細(xì)菌接種于pH為1.7和4.5的普通營養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng) 24 h。

（4） 鮮中草藥藥敏試驗(yàn)。打孔法：以無菌操作用無菌棉簽蘸取稀釋好的菌液，在普通瓊脂平扳表面涂布均勻。在已涂布細(xì)菌的普通瓊脂平板培養(yǎng)基表面用打孔，打孔后用酒精燈封底，在孔中加入各藥液80μL勿使其外溢，每種藥汁做3個(gè)平行，置恒溫箱37℃培養(yǎng)24 h，取出觀察，使用游標(biāo)卡尺用十字交叉法量取抑菌圈的直徑。重復(fù)測(cè)量三次取平均值。根據(jù)藥敏試驗(yàn)抑菌圈直徑(mm)標(biāo)準(zhǔn)判斷其對(duì)藥物的敏感性。抑菌圈小于10 mm的為不敏感，11～15 mm之間的為中度敏感，大于15 mm的為高度敏感。

二、試驗(yàn)結(jié)果

1.中藥藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。

（1）鮮中草打孔法藥敏試驗(yàn)結(jié)果。平皿恒溫37℃培養(yǎng)24h后，通過測(cè)量抑菌圈直徑可判定，試驗(yàn)所用的葡萄球菌對(duì)酢漿草高度敏感，對(duì)苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英不敏感；大腸桿菌對(duì)酢漿草中度敏感，對(duì)苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英均不敏感(如圖1和圖2)。表1顯示酢漿草對(duì)大腸桿菌抑菌圈直徑約為14.16 mm，判定為中度敏感；表2顯示酢漿草對(duì)葡萄球菌抑菌圈直徑約為20.16 mm，判定為高度敏感。

圖1 鮮中藥大腸桿菌（L）和葡萄球菌（R）藥敏試驗(yàn)

圖2 鮮中藥大腸桿菌（L）和葡萄球菌（R）藥敏試驗(yàn)

表1 大腸桿菌的鮮中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表2 葡萄球菌的鮮中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

（2）干中草打孔法藥敏試驗(yàn)結(jié)果。平皿恒溫37℃培養(yǎng)24h后，觀察發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)用葡萄球菌對(duì)干品酢漿草、金銀花和蒲公英高度敏感，對(duì)苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、蒼耳子和魚腥草不敏感(如圖3，并且表3顯示，酢漿草對(duì)葡萄球菌抑菌圈直徑約為18.41 mm，判定為高度敏感；金銀花對(duì)葡萄球菌抑菌圈直徑約為17.12 mm，判定為高度敏感；蒲公英對(duì)葡萄球菌抑菌圈直徑約為17.50 mm，判定為高度敏感)；大腸桿菌對(duì)干品酢漿草、苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英不敏感。

圖3 干中藥葡萄球菌藥敏試驗(yàn)

表3 葡萄球菌的干品中草藥藥敏試驗(yàn)結(jié)果

三、結(jié)論

鮮中草藥藥敏試驗(yàn)：新鮮酢漿草藥物原液對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌均有較強(qiáng)的抑制作用，但對(duì)葡萄球菌的抑制作用更為顯著；新鮮苦荬菜、車前草、板藍(lán)根、金銀花、蒼耳子、魚腥草和蒲公英的藥物原液對(duì)葡萄球菌和大腸桿菌均沒有抑制作用。

參考文獻(xiàn)（略）