發酵中草藥復方制劑對種公豬疫病防控中的應用研究

余剛/河南省正陽縣動物衛生監督所

王艷*/河南省駐馬店市動物疫病預防控制中心

以種公豬為對象，投喂添加不同水平復方中草藥復方制劑，研究中草藥復方制劑對種公豬血液生理生化指標、疫苗抗體水平的影響。試驗共分10個小組分別為1個對照組和9個試驗組，每個小組各有6頭種公豬。共三個中草藥組方，每個組方設置3個不同比例中草藥復方制劑（分別為0.25%、0.5%、1%），分圈飼養，后抽血進行血液細胞分析、免疫抗體水平檢測。本試驗結果表明，在飼料中添加中草藥復方制劑能改變種公豬的血液生理生化指標、提高免疫抗體水平。

目前，在畜牧業的研究中，中草藥以它獨特的作用方式、良好的治療效果、無抗藥性、無殘留以及無污染而受到廣大科研人員和生產人員的青睞。中草藥具有營養性、維生素樣、激素樣、增強機體免疫力、抗微生物、抗應激和抗寄生蟲等作用，并且不容易產生抗藥性和耐藥性。因此，中草藥不僅可以治療個體而且可以進行群體防治。大力開發中草藥復方制劑不僅能夠解決動物疫病長期困擾畜牧業發展的問題，還能夠解決抗生素殘留問題及滿足人們對食品安全的需求，具有重要的經濟效益和社會效應。

本研究主要依據中獸醫理論，圍繞中草藥調動自身抵抗力抵御外來疾病入侵這一主要法則，針對種公豬在生產上的應用目的，優化中草藥配方組合以及制作工藝所研發的一種發酵中草藥復方制劑對種公豬疫病防控的研究，以充分發揮中草藥扶正祛邪、標本兼顧的特色和優勢，使中草藥的組合效應達到最優。

一、材料和方法

1.試驗動物。隨機抽取15月齡左右、體重180±10 kg、身體健康、繁殖性能相近的（某品種）種公豬60頭，對照組和9個試驗組各6頭。

2.試劑與儀器。

（1）儀器。全自動血液細胞分析儀（型號BC－5300Vet），購自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；全自動酶標儀（型號ELX800），購自美國伯騰儀器有限公司；一次性注射器；無菌離心管；微量移液器等。

（2）試劑?？谔阋呖贵w檢測ELISA試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司；豬瘟、藍耳、偽狂犬抗體檢測ELISA試劑盒均購自愛德士生物科技有限公司。

3.發酵中草藥復方制劑的組方與配制。發酵中草藥復方制劑組方：

方一組成及比例：當歸、黃芪、淫羊藿、桑椹、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方二組成及比例：當歸、黃芪、淫羊藿、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶2∶2∶2∶1）。

方三組成及比例：當歸、黃芪、淫羊藿、菟絲子、桑椹、山茱萸、枸杞、甘草（1∶4∶1∶1∶1∶1∶1∶1）。

組方中各個藥材干燥粉碎后，噴灑乳酸菌，置于固態發酵裝置中發酵72 h，與日糧混合后按照試驗設計飼喂。

4.試驗設計。本次試驗在某豬場進行，其品種為某品種種公豬60頭，試驗共分10個小組分別為1個對照組和9個試驗組，每個小組各有6頭種公豬。具體試驗分組見表1，試驗種公豬分別飼喂基礎日糧（對照組）；混合0.25%方一發酵中草藥的基礎日糧（試驗1組）；混合0.5%方一發酵中草藥的基礎日糧（試驗2組）；混合1%方一發酵中草藥的基礎日糧（試驗3組）；混合0.25%方二發酵中草藥的基礎日糧（試驗4組）；混合0.5%方二發酵中草藥的基礎日糧（試驗5組）；混合1%方二發酵中草藥的基礎日糧（試驗6組）；混合0.25%方三發酵中草藥的基礎日糧（試驗7組）；混合0.5%方三發酵中草藥的基礎日糧（試驗8組）；混合1%方三發酵中草藥的基礎日糧（試驗9組）。10個組的基礎日糧完全一致，由某公司提供。日糧組成見表2。

5.飼喂管理。為保證試驗數據的準確可靠，對種公豬的飼養應保證在同一飼養水平下：每天投料2次，自由采食并保證充足飲水，每小組的試驗豬在一個圈舍飼養，每日打掃圈舍2次，圈舍每周沖欄消毒2次。整個試驗期間，有專人飼喂，專人管理，保持種公豬每天運動 2 h。

6.樣品采集。

（1）每天有專人負責觀察實驗動物的健康狀況，并做好詳細記錄。

表1 試驗設計

表2 基礎日糧的組成

（2）使用發酵中草藥復方制劑之前通過前腔靜脈（或耳緣靜脈）采血，采集所有的實驗組和對照組動物全血各兩份，2 ml/份。

（3）使用發酵中草藥復方制劑之后每間隔15 d通過前腔靜脈（或耳緣靜脈）采集所有的實驗組和對照組動物全血各兩份2 ml/份，連續采取6次。

7.樣品處理與檢測。

（1）采集全血樣品中的其中1份4℃保存，利用全自動血液細胞分析儀進行血液白細胞、中性粒細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞等計數分析。

（2）采集全血樣品中的另外1份室溫靜置30 ～ 50 min，以 3 000 r/min 離心 20 min，取血清待檢。利用ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟、藍耳病、偽狂犬、口蹄疫的抗體水平。

表3 發酵中草藥復方制劑對種公豬免疫細胞數量的影響

二、結果與分析

1.發酵中草藥復方制劑對種公豬血液中免疫細胞數量的影響。見表3。

從試驗組和對照組血細胞的檢測分析比較，由表1得知，飼喂組方三（試驗7、試驗8、試驗9）復方中草藥制劑的種公豬所檢測各項血細胞數目均處在正常范圍值內，而組方一（試驗1、試驗2、試驗3）和組方二（試驗4、試驗5、試驗6）的各項細胞檢測值普遍偏高，接近于對照組的檢測值。

2.發酵中草藥復方制劑對種公豬抗體水平的影響。見表4。

表4 發酵中草藥復方制劑對種公豬抗體水平（平均值）的影響

由表2可見：在豬瘟、豬藍耳、豬O型口蹄疫、豬偽狂犬抗體方面，從各試驗組的ELISA檢測值顯示得出組方一（試驗1組、試驗2組、試驗3組）和組方三（試驗7組、試驗8組、試驗9組）的抗體水平均較高，而組方二（試驗4組、試驗5組、試驗6組）的抗體水平相對低些，通過組方一和組方三的試驗檢測數據比較分析得知組方三的的免疫抗體水平相對較高些；在組方間的中草藥投飼混合比例方面，混合1%比例組方的試驗組ELISA檢測值顯示以上四種抗體水平均高于0.25%和0.5%的比例；而對照組的ELISA檢測值均基本接近臨界值，疫苗抗體一般，不具有很好的保護率。本試驗最終得出飼喂組方三1%比例的復方中草藥制劑其疫苗免疫抗體水平最高，具有很高的免疫效力。

三、討論與結論

白細胞是動物機體內主要免疫活性細胞之一，在正常生理條件下，白細胞數量決定機體免疫能力的高低。在白細胞分類中，當血清與病原菌（抗原）相互作用產生趨化因子時，機體內的中性粒細胞被吸引并用于殺死細菌；單核細胞通過血液進入組織轉變為巨噬細胞并吞噬各種異物，調節免疫反應、白細胞生成等；嗜酸性粒細胞具有吞噬能力，參與非特異性免疫及中和組胺保護機體；嗜堿性粒細胞的顆粒內含有組織胺、肝素及過敏性慢反應物質等，參與炎癥反應和速發型的過敏反應，調節微血管張力或者血液凝固性；淋巴細胞參與機體的細胞和體液免疫，調節其反應。機體內白細胞數目往往維持在相對恒定狀態，盡管在不同生理或時間白細胞分裂指數出現一定的波動，但是死亡與生成的白細胞實際處于一個動態平衡；相對于白細胞分類百分比，白細胞分類數更能反映外周血白細胞對機體防御和保護的狀態。

血細胞數量及其相關成分可因家畜種類、品種和性別等因素而發生變動，其生理生化值在一定程度上反映家畜新陳代謝及生理機能狀況。特定血液生理指標是品種特征之一，并且與經濟性狀存在一定相關性。在臨床上，由于血細胞參與機體免疫反應，具有防御和保護作用，因此成為疾病診斷及其病理過程監測的主要依據之一。

本研究結果表明，飼料中添加復方中草藥制劑（1%組方三）能顯著改善種公豬體內部分血液生理生化指標，使種公豬長期處于健康狀態；并能顯著提高豬體內疫苗免疫抗體水平，使疫苗充分發揮其作用對種公豬具有很好的保護。從飼料工業的長遠發展來看，通過對中草藥作用機理、檢測標準的進一步研究，必將促進天然中草藥飼料添加劑在種公豬飼料中的廣泛應用。在飼料中添加中草藥對種公豬生長、免疫和消化機能的影響，有待于進一步做深層次的研究。