血清異常凝血酶原、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、甲胎蛋白聯合檢測對HBV相關HCC的診斷價值分析

田江川

(四川大學華西廣安醫院檢驗科，四川 廣安 638000)

肝細胞癌(HCC)為消化系統常見惡性腫瘤，其早期診斷與治療難度大，疾病進展快，死亡率高，而乙型肝炎病毒(HBV)感染是我國HCC發病的最常見原因[1]。甲胎蛋白(AFP)為診斷肝癌常用腫瘤標志物，但其靈敏度與特異度有待提高，而異常凝血酶原(DCP)為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導的蛋白質，是伴隨HCC特異產生的異常凝血酶原，磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)則是蛋白聚糖家族成員，在細胞生長、分化及遷移方面發揮重要作用，其蛋白水平在大多數HCC組織中呈高表達[2，3]。然而單項血清標志物檢測極易出現假陽性及假陰性，使靈敏度、特異度偏低，因此常聯合檢測多項血清標志物提高疾病檢出率[4，5]。本文分析血清DCP、GPC3、AFP聯合檢測在診斷HBV相關HCV中的臨床價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料2017年1月至2018年6月我院收治的80例HBV相關HCC患者(HBV+HCC組)，另選擇同期無HBV感染或攜帶史的HCC患者40例(HCC組)及30例健康體檢者(對照組)，納入標準：①所有肝癌患者均符合2017年版《原發性肝癌診療規范》[6]中HBV相關HCC診斷標準，有明確的HBV感染病史，抗丙型肝炎病毒(HCV)陰性，肝硬化患者也經臨床診斷及影像學確診；②健康體檢者心、肺、肝、腎功能正常，無腫瘤或腫瘤家族史；③所有患者均在告知本研究后簽署知情同意書，自愿配合參與本研究。排除標準：①肝癌患者發生全身轉移或伴惡液質；②肝癌患者或肝硬化患者抗HCV陽性，臨床資料記錄不完整；③有重要臟器功能異常、腫瘤家族史的健康體檢者。HBV+HCC組男52例，女28例；年齡28～63歲[(45.18±4.63)歲]；Child肝功能分級：A級43例，B級37例，HCC組男27例，女13例；年齡29～62歲[(45.14±4.68)歲]；Child肝功能分級：A級21例，B級19例，對照組男16例，女14例；年齡27～63歲[(45.06±4.71)歲]，三組性別、年齡等基線資料比較差異無統計學意義(P> 0.05)，HBV+HCC組、HCC組的Child肝功能分級比較差異也無統計學意義(P> 0.05)，有可比性。

1.2方法均在入院后清晨取空腹靜脈血4 ml，于4 ℃、3000 r/min速率下離心10 min，分離得血清，保存于-20 ℃冰箱待檢。以酶聯免疫吸附試驗測定血清DCP、GPC3水平，試劑盒分別由上海通蔚試劑公司、武漢優爾生科技股份有限公司提供，檢驗方法：準備試劑、樣品及標準品，加入準備好的樣品與標準品，在37 ℃反應30 min，后洗板5次，加入酶標試劑，37 ℃反應30 min，再次洗板5次，加入顯色液A、B，37 ℃反應30 min，加入終止液，15 min內讀取OD值，計算出DCP、GPC3含量。采用羅氏E601電化學發光檢測系統與配套試劑測定AFP水平，具體檢驗方法參照試劑盒說明書進行，試劑盒內有質控血清及質控標準品，所有操作嚴格依據說明書進行。正常參考值：GPC3≤0.3 μg/L，DCP≤40 mAU/ml，AFP≤7 ng/ml，超出相應范圍均記為陽性。

1.3觀察指標三組血清DCP、GPC3、AFP水平及陽性率；以病理結果為準，應用受試者工作特征曲線(ROC)分析血清DCP、GPC3、AFP聯合檢測診斷HBV相關HCC的價值，計算約登指數(約登指數=靈敏度+特異度-1)；依據6個月后預后情況分為存活組、死亡組，比較其入院時的血清DCP、GPC3、AFP水平。

1.4統計學方法采用SPSS 19.0軟件處理數據。計數資料比較采用χ2檢驗，計量資料比較采用方差分析及LSD-t檢驗，應用ROC曲線、kappa一致性檢驗分析血清DCP、GPC3、AFP聯合檢測診斷HBV相關HCC的價值。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1三組血清DCP、GPC3、AFP水平比較HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP水平高于HCC組和對照組，HCC組高于對照組(P< 0.05)。見表1。

表1 三組血清DCP、GPC3、AFP水平比較

*與對照組比較，P< 0.05；#與HCC組比較，P< 0.05

2.2三組血清DCP、GPC3、AFP陽性率比較HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP陽性率高于HCC組和對照組，HCC組血清DCP、GPC3陽性率高于對照組(P< 0.05)，兩組血清AFP陽性率比較差異無統計學意義(P> 0.05)。見表2。

表2 三組血清DCP、GPC3、AFP陽性率比較 [n(%)]

*與對照組比較，P< 0.05；#與HCC組比較，P< 0.05

2.3血清DCP、GPC3、AFP單項、兩項及三項聯合檢測的診斷價值血清DCP、GPC3、AFP單獨診斷HBV相關HCC時，以GPC3診斷靈敏度、特異度、準確度最高。三項聯合檢測診斷靈敏度高于AFP、DCP+AFP診斷，特異度高于DCP、AFP診斷，準確度高于DCP、AFP、DCP+AFP診斷(P< 0.05)，三項聯合診斷時kappa值、約登指數、曲線下面積(AUC)分別為0.675、0.700、0.843。見表3、表4、圖1。

表3 血清DCP、GPC3、AFP單項、兩項及三項聯合檢測診斷結果

圖1 血清DCP、GPC3、AFP單項、兩項及三項聯合檢測的ROC曲線

2.4血清DCP、GPC3、AFP對HBV相關HCC預后的評估價值HBV相關HCC患者中6個月后死亡20例，存活60例，死亡組入院時的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活組(P< 0.05)。見表5。

表4 診斷效能分析

*與DCP+GPC3+AFP比較，P< 0.05

表5 血清DCP、GPC3、AFP對HBV相關HCC預后的評估價值

3 討論

HCC發病率位居所有腫瘤第五位，其癌癥相關死亡率居于第三位，而研究表明，80%原發性肝癌患者有HBV感染或肝硬化疾病基礎，HCC惡性程度高，病程進展快，早發現及治療對延長患者生命與改善生活質量有重要意義，肝硬化患者的定期篩查有利于原發性肝癌的早期診斷[7]。對于HCC高危人群，最常用的監測方法是定期檢測血清AFP水平及影像學手段如腹部彩超等，但敏感性與特異性不佳，近年來隨蛋白組學技術發展，篩選新的腫瘤標志物成為可能，各種有希望的腫瘤標志物相繼發現[8]，其中DCP已失去正常凝血酶原功能，可產生與肝臟惡性癌變相關的生物學效應，而GPC3是在胎盤及胎肝等組織高表達的蛋白聚糖，而在正常成人肝組織中基本無表達[9]，因此考慮DCP、GPC3、AFP聯合檢測在HBV相關HCC中有較一定診斷價值。

本研究結果顯示，HBV+HCC組的血清DCP、GPC3、AFP水平明顯高于HCC組、對照組，且HCC組、對照組血清DCP、GPC3、AFP水平也存在統計學差異，這與費樂學等[10]的研究結果相近，表明DCP、GPC3、AFP參與HBV相關HCC的發生發展，DCP為近年來研究較熱的肝癌腫瘤標志物，其表達水平主要與肝細胞缺氧及低維生素K濃度引起凝血酶原合成異常有關，與正常凝血酶原相比，DCP結構特點為谷氨酸區中一個或多個谷氨酸殘基無法被羧化為γ羧基谷氨酸，繼而失去凝血功能，可促進血管內皮細胞異常增殖及遷移[11]，因此在HBV相關HCC中患者中DCP出現異常升高，GPC3則是1996年Pilia等在研究過度生長綜合征中發現的膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白，可結合多種生長因子并調節其活性，影響多種生物效應分子，在細胞生長發育與癌變過程中起著關鍵作用[12]。AFP雖然是檢測HCC常用腫瘤標志物，但在分化程度好或退行發育的HCC中可能僅有輕度或沒有AFP升高，對于腫瘤直徑小的微小病灶檢出率仍不高，而良性或特殊疾病等情況下AFP也可為陽性，本研究中發現，HBV+HCC組血清DCP、GPC3、AFP陽性率明顯高于HCC組、對照組，HCC組血清DCP、GPC3陽性率也較對照組高，而HCC組、對照組的AFP陽性率對比差異無統計學意義，因此在常規AFP基礎上，聯合DCP及GPC3可能有助于提高HBV相關HCC檢出率，陳妙等[13]的研究也發現，血清DCP、GPC3檢測可提高對AFP陰性的原發性肝癌檢出率。盧凌鵬等[14]的研究顯示，AFP、GPC3、DCP及血管內皮生長因子(VEGF)四項聯合診斷原發性肝癌的靈敏度、特異度、AUC分別為0.852、0.800、0.818，均高于任何一種標志物單獨檢測。本研究中kappa一致性檢驗及ROC曲線分析結果顯示，血清DCP、GPC3、AFP聯合檢測診斷HBV相關HCC的靈敏度、特異度、準確度均較三項指標單項診斷或兩兩聯合診斷更高，其中三項聯合檢測診斷靈敏度高于AFP、DCP+AFP診斷，特異度高于DCP、AFP單獨診斷，準確度高于DCP、AFP、DCP+AFP診斷，差異有統計學意義，而三項聯合診斷時kappa、約登指數、AUC最高，分別為0.675、0.700、0.843，這與上述研究結果相近，提示DCP、GPC3、AFP具有廣譜性，單一檢測時診斷效能低，如AFP作為常見HCC腫瘤標志物，診斷靈敏度、特異度、準確度均在60%以下，而AFP聯合DCP、GPC3后可互為補充、互為印證，有助于提高診斷效能，使診斷HBV相關HCC的靈敏度、特異度、準確度提高至80%以上，有一定應用價值[15]。同時本研究也發現死亡組入院時的血清DCP、GPC3、AFP水平高于存活組，表明入院時血清DCP、GPC3、AFP對HBV相關HCC患者預后也有一定評估價值。

綜上所述，血清DCP、GPC3、AFP聯合檢測診斷HBV相關HCC的效能較好，有助于提高診斷靈敏度、特異度、準確度，且對患者預后有一定評估價值，值得在臨床推廣實踐。