晚期血吸蟲病患者外周血中Vα24自然殺傷T細胞水平觀察

周亞軍 丁園

【摘要】 目的：分析晚期血吸蟲病患者外周血中Vα24自然殺傷T細胞水平。方法：選取筆者所在醫院45例健康體檢者設為對照組，45例晚期血吸蟲病患者設為觀察組。采用流式細胞術檢測患者外周血細胞中的Vα24 NKT細胞在T淋巴細胞中的比例。檢測兩組肝功能指標，分析Vα24 NKT與肝功能的相關性。結果：觀察組患者NKT細胞水平為（0.15±0.01）%，顯著低于對照組的（0.84±0.21）%，差異有統計學意義（P<0.01）。兩組各肝功能指標比較，差異均有統計學意義（P<0.01）。相關性分析顯示，NKT細胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24中與γ-GT呈正相關（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT細胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB、A/G無相關性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）。結論：晚期血吸蟲患者外圍血中Vα24 NKT細胞明顯減少，Vα24 NKT細胞與γ-GT呈正相關，與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關性。

【關鍵詞】 晚期血吸蟲病 流式細胞術 Vα24 自然殺傷T細胞

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.29.027 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2019）29-00-02

[Abstract] Objective： To analyze the level of Vα24 natural killer T cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis. Method： A total of 45 healthy subjects in our hospital were selected as the control group， and 45 advanced schistosomiasis patients were selected as the observation group. Flow cytometry was used to determine the proportion of Vα24 NKT cells in T lymphocytes. The liver function indexes of the two groups were detected and the correlation between Vα24 NKT and liver function was analyzed. Result： The level of NKT cells in the observation group was （0.15±0.01） %， which was significantly lower than （0.84±0.21） % in the control group， the difference was statistically significant （P<0.01）. There were significant differences in liver function between the two groups （P<0.01）. Correlation analysis showed that NKT cells were positively correlated with γ-GT in peripheral blood Vα24 of patients with advanced schistosomiasis（r=0.371， P<0.05）， while Vα24 NKT cells were not correlated with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G （r=-0.001， -0.178， 0.023， -0.101， 0.026， 0.031， P>0.05）. Conclusion： The number of Vα24 NKT cells in peripheral blood of patients with advanced schistosomiasis are significantly decrease. Vα24 NKT cells are positively correlate with gamma GT， but not with ALT， AST， ALP， TBIL， ALB and A/G.

[Key words] Advanced schistosomiasis Flow cytometry Vα24 Natural killer T cells

First-authors address： Clinical Diagnosis and Treatment Center for Schistosomiasis in Hubei， Jingzhou 434001， China

自然殺傷性T細胞（NKT）是一類特殊性質的免疫細胞，其與先天免疫和后天免疫有關[1]。在微生物感染、自身免疫性疾病、抗腫瘤轉移和移植物存活方面影響顯著，其作用日益得到承認[2]。血吸蟲病是一種嚴重危害人類健康的寄生蟲病。文獻報道其參與了血吸蟲病小鼠的致病過程。本次探究采用流式細胞術分析檢測晚期血吸蟲病患者外周血NKT細胞的水平變化[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇筆者所在醫院2016年6月-2018年6月在筆者所在醫院住院治療的晚期血吸蟲病患者45例，設為觀察組，其中男20例，女25例;年齡41～77歲，平均（62.1±10.3）歲。根據衛生部2006年發布的《血吸蟲病診斷標準》，排除自身免疫性疾病、病毒性肝炎、酒精性肝臟疾病，所有患者入院前接受血吸蟲免疫學檢查。選取筆者所在醫院門診健康體檢者45例為對照組，其中男17例，女28例;年齡40～78歲，平均（63.1±11.5）歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義（P>0.05），有可比性。

1.2 方法

1.2.1 NKT細胞檢測 所有患者均于入院后第2天空腹狀態下采集2 ml全血抗凝EDTA-K2。收集100 μl血液加入標記后的單克隆抗體CD3-FITC 5 μl與TCR Vα24-PE 5 μl并充分混合。在避光狀態下4 ℃孵育30 min，加入500 μl紅細胞裂解液混合。室溫避光10 min，進行PBS洗滌，1 500 r/min離心，棄上清液體，加入500 μl固定劑拌勻。并快速由流式細胞術檢測，使用Expo32軟件進行檢測分析，檢測時每個通道由相應的IgG細胞作為陰性對照。

1.2.2 肝功能檢測 取全血抗凝2 ml，室溫靜置30 min后，1 800×g離心5 min，分離血清。采用全自動生化分析儀檢測肝功能指標，包括丙氨酸轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、天門冬氨酸轉氨酶（AST）、谷酰轉肽酶（γ-GT）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、白蛋白/球蛋白（A/G）等。

1.3 統計學處理

本研究數據采用SPSS 20.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，采用Pearson相關系數分析相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組NKT細胞水平比較

觀察組患者NKT細胞水平為（0.15±0.01）%，顯著低于對照組的（0.84±0.21）%，差異有統計學意義（P<0.01）。

2.2 兩組肝功能水平對比

兩組ALT、TBIL、γ-GT、ALB、A/G、AST、ALP水平比較，差異均有統計學意義（P<0.01），見表1。

2.3 NKT細胞與肝功能的相關性

NKT細胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24中與γ-GT呈正相關（r=0.371，P<0.05），而Vα24 NKT細胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關性（r=-0.001、-0.178、0.023、-0.101、0.026、0.031，P>0.05）

3 討論

慢性血吸蟲病是一種慢性免疫疾病[4]，其基礎是由血吸蟲病宿主抗原成分引起的局部或全身過敏，其代謝產物或蠕蟲病死亡在急性感染血吸蟲病中以TH1誘導細胞應答[5]，成年細胞反應為主[6]。在感染后期，蟲體成熟排卵，而卵子則沉積在血液、肝臟等，導致在肝臟等部位引起TH2細胞應答的IV超敏反應，卵肉芽腫繼發，導致肝硬化，并且出現靜脈高壓等并發癥[7]。此外，Th細胞和NKT細胞占肝臟T淋巴細胞的20%～30%，在肝臟局部免疫應答中發揮重要作用[8]。NKT細胞在晚期血吸蟲病患者外周血Vα24與γ-GT呈正相關，而Vα24 NKT細胞與ALT、AST、ALP、TBIL、ALB及A/G無相關性[9]。

晚期血吸蟲病患者外周血NKT細胞能識別血吸蟲卵內的特異性抗原[10]。淋巴細胞的富集引起過度的炎癥反應，導致患者肝功能受損[11]。在硫代乙酰胺和四氯化碳誘導下能引起CD1d基因顯著減少野生型小鼠的肝臟炎癥和纖維化程度，平滑肌肌動蛋白和轉化生長因子β的表達也顯著降低，表明NKT細胞在小鼠體內會導致肝細胞的損傷[12]。

本次研究初步表明晚期血吸蟲病患者外周血NKT細胞的變化及其與肝功能的相關關系，對進一步探究NKT細胞數量對治療晚期血吸蟲病有重要意義。

參考文獻

[1]姜鵬月，潘衛慶.血吸蟲病肝纖維化及其致病機制研究進展[J].中國熱帶醫學，2018，18（8）：847-852.

[2]王英.肝纖維四項診斷晚期血吸蟲病肝纖維化的價值[J].中國繼續醫學教育，2018，10（27）：41-43.

[3]牛雪花，華海涌，郭文建，等.晚期血吸蟲病抗肝纖維化治療臨床路徑的實施效果觀察[J].中國血吸蟲病防治雜志，2017，29（4）：475-477.

[4]凌莉.晚期血吸蟲病肝纖維化血清學指標與超聲檢查的相關性[J].影像研究與醫學應用，2017，1（9）：163-164.

[5]鄭力.日本血吸蟲感染小鼠γδT細胞對中性粒細胞及肝纖維化作用的研究[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，2017，35（3）：218-223.

[6] Yamagiwa S，Sato Y，Ichida T，et al.Imbalance between CD56+bright and CD56+dim natural killer cell subsets in the liver of patients with recurrent hepatitis C after liver transplantation[J].Biomed Res，2014，35（3）：177-184.

[7] Ishikawa S，Ikejima K，Yamagata H，et al.CD1d-restricted natural killer T cells contribute to hepatic inflammation and fibrogenesis in mice[J].J Hepatol，2011，54（6）：1195-1204.

[8] Xie H，Chen D，Luo X，et al.Some characteristics of IL-5-producing T cells in mouse liver induced by Schistosoma japonicum infection[J].Parasitol Res，2013，112（5）：1945-1951.

[9] Luo X，Xie H，Chen D，et al.Changes in NK and NKT cells in mesenteric lymph nodes after a Schistosoma japonicum infection[J].Parasitol Res，2014，113（3）：1001-1109.

[10]武其文，朱翔，付夏，等.晚期血吸蟲病患者外周血NK細胞Tim-3分子的表達及其與肝纖維化指標的關系[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，2015，33（5）：346-350.

[11]夏國新，胡玲娟，劉燕婕.晚期血吸蟲病肝纖維化中Th17/Treg失衡及其作用[J].公共衛生與預防醫學，2015，26（5）：64-66.

[12]武其文，朱翔，王玉萍，等.晚期血吸蟲病患者外周血CD4+T細胞Tim-3分子表達及與肝功能損傷指標的相關性[J].中國血吸蟲病防治雜志，2015，27（5）：470-473，496.

（收稿日期：2019-05-23） （本文編輯：桑茹南）