葉下珠薄層鑒別方法研究

陳舒憶 李美位 唐藝

【摘 要】目的：采用薄層色譜法，建立葉下珠的薄層鑒別方法，為其質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：以甲醇為提取溶劑，葉下珠為對(duì)照藥材，沒(méi)食子酸為對(duì)照品，醋酸為展開(kāi)劑在聚酰胺薄膜上展開(kāi)，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液顯色，對(duì)葉下珠進(jìn)行薄層色譜鑒別研究。結(jié)果： 供試品溶液在與對(duì)照藥材和對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的清晰斑點(diǎn)。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快捷，重現(xiàn)性好，檢出斑點(diǎn)清晰，可作為葉下珠的薄層鑒別方法。

【關(guān)鍵詞】葉下珠;薄層鑒別;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中圖分類(lèi)號(hào)： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A文章編號(hào)： 2095-2457（2019）03-0035-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.03.011

Thin layer chromatography identification of Phyllanthus urinaria Linnaeus

CHEN Shu-yi LI Mei-wei TANG Yi*

（Guiyang Inspection Center for Food and Drug，Guiyang Guizhou 550081，China）

【Abstract】Objective To establish a thin layer chromatography identification method of Phyllanthus urinaria Linnaeus，and to provide experimental basis for quality control standard. Method Methanol was used as extracting solvent. Phyllanthi urinariae herba was used as contrast material， gallic acid was used as the reference material. Phyllanthus urinaria Linnaeus was identified with acetic acid as mobile phase， polyamide film as stationary phase and chloride ferric （1%） as color developing reagent. Result The test solution showed clear spots of the same color at the corresponding positions with the contrast material and the reference material. Conclusion The method was simple， rapid， and reproducible， the spots were clear and easy to be identified. It can be used for TLC identification of Phyllanthus urinaria Linnaeus.

【Key words】Phyllanthus urinaria Linnaeus; TLC; Quality standard

葉下珠為大戟科植物葉下珠 Phyllanthus urinaria Linnaeus 的干燥全草，為民間習(xí)用中藥材，全草藥用，有瀉火明目、清熱，利濕，解毒，消腫等功效，在臨床上用于慢性乙型病毒性肝炎的治療[1]。葉下珠的活性成分中，沒(méi)食子酸含量最高，有抗病毒作用[2]。葉下珠已被多省收載為中藥材地方標(biāo)準(zhǔn)，但薄層鑒別的研究較少。薄層鑒別是快速、靈敏、高效地鑒別中藥材真?zhèn)蔚姆椒ǎ时疚膶?duì)葉下珠的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究，進(jìn)一步完善了葉下珠的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

賽多利斯BSA224S電子天平;超聲波清洗器;微量毛細(xì)管;聚酰胺薄膜（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）;硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）;雙槽玻璃層析缸。

葉下珠對(duì)照藥材（批號(hào)：121374-201802，中國(guó)食品藥品檢定研究院），沒(méi)食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201605，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。甲醇、乙醇、醋酸、丙酮、三氯化鐵、乙醚、石油醚、氯仿、硫酸、乙酸乙酯、甲酸均為分析純。

樣品采至于貴州各個(gè)縣市及周邊省份。樣品來(lái)源有銅仁思南、凱里麻江、凱里平茶、畢節(jié)威寧、四川瀘州、福建泉州、四川成都、云南昭通、廣西欽州、廣東梅州。

2 方法與結(jié)果

稱(chēng)取葉下珠0.5g，加甲醇5ml，超聲處理10分鐘，振搖10分鐘，離心，取上清液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。稱(chēng)取葉下珠對(duì)照藥材0.5g，按供試品制備方法制得對(duì)照藥材溶液。另取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

參照《中國(guó)藥典》（2015年版）薄層色譜法，分別吸取供試品、對(duì)照藥材溶液3μL，點(diǎn)樣于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開(kāi)劑展開(kāi)，晾干后噴以1%三氯化鐵乙醇溶液顯色，日光下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖1。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 討論

本文考察了不同的提取方法、展開(kāi)體系、點(diǎn)樣量、環(huán)境條件等因素對(duì)薄層色譜結(jié)果的影響。

3.1 不同提取方法的比較

試驗(yàn)比較了4種溶劑提取方法，（1）取樣品加50%甲醇超聲提取，離心，上清液濃縮作為供試品溶液[3-4]。（2）取樣品加甲醇超聲提取，離心，上清液濃縮作為供試品溶液。（3）取樣品加乙醇振搖提取，濾過(guò)，濾液濃縮，加硅膠裝柱，棄去乙醚洗脫液，收集乙醇洗脫液，濃縮作為供試品溶液[5]。（4）取樣品加無(wú)水乙醇超聲提取，離心，上清液蒸干，石油醚浸泡后棄去，殘?jiān)右掖甲鳛楣┰嚻啡芤篬6]。綜合考慮提取效果及操作便捷等因素，在相同薄層條件下，選取方法（2）作為葉下珠薄層鑒別的提取方法。

3.2 不同展開(kāi)體系比較

綜合文獻(xiàn)研究，本文實(shí)驗(yàn)考察了（1）聚酰胺薄膜為載體，醋酸為展開(kāi)劑，1%三氯化鐵乙醇溶液顯色的展開(kāi)體系[3];（2）硅膠G薄層板為載體，氯仿-甲醇（7.5∶1）為展開(kāi)劑，10%硫酸乙醇溶液加熱顯色的展開(kāi)體系[5];（3）硅膠G薄層板為載體，正己烷-乙酸乙酯（2：1）為展開(kāi)劑，10%硫酸乙醇溶液加熱顯色，紫外光燈365nm下檢視的展開(kāi)體系;（4）聚酰胺薄膜為載體，乙醇為展開(kāi)劑，1%三氯化鐵乙醇溶液顯色的展開(kāi)體系[6];（5）硅膠G薄層板為載體，氯仿-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶1）為展開(kāi)劑，2%三氯化鐵乙醇加熱顯色的展開(kāi)體系[4]等。結(jié)果表明，以聚酰胺薄膜為載體，醋酸為展開(kāi)劑，1%三氯化鐵乙醇溶液顯色的展開(kāi)體系分離效果最好，斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好。

3.3 不同點(diǎn)樣量的比較

試驗(yàn)分別對(duì)1μL、2μL、3μL、5μL點(diǎn)樣量進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，當(dāng)點(diǎn)樣量過(guò)小時(shí)，沒(méi)食子酸檢出斑點(diǎn)不清晰，選擇3μL為最佳點(diǎn)樣量。

3.3 不同環(huán)境條件的比較

分別考察不同溫度和濕度對(duì)薄層鑒別結(jié)果的影響。溫度考察40℃，25℃，10℃;濕度考察80%，60%，40%。結(jié)果顯示，不同的溫濕度條件對(duì)結(jié)果影響很小，斑點(diǎn)穩(wěn)定性和重現(xiàn)性強(qiáng)。

薄層色譜作為一種專(zhuān)屬性高、便捷高效的鑒別方法，在中藥分析中應(yīng)用非常廣泛。綜上，本文研究建立了葉下珠的薄層鑒別方法，為葉下珠的定性鑒別提供參考，對(duì)葉下珠標(biāo)準(zhǔn)的完善和提高具有一定的指導(dǎo)意義。

【參考文獻(xiàn)】

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[2]楊琳媛，趙燕，呂卓.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地葉下珠中沒(méi)食子酸的含量[J].陜西中醫(yī).2014，35（10）：1416-1417.

[3]冀德富，郭東艷，裴妙榮，崔春利.葉下珠的薄層鑒別及其多酚類(lèi)成分的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志.2009，15（11）：14-16.

[4]徐曉梅，譚本仁，朱興保等.復(fù)方葉下珠滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性研究[J].中藥新藥與臨床藥理.2014，25（4）：483-487.

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[6]河北省食品藥品監(jiān)督管理局.河北省中藥材炮制規(guī)范[S].北京：學(xué)苑出版社，2003：44.