COX-2、VEGF及miRNA表達(dá)水平與食管鱗狀細(xì)胞癌患者的臨床療效及預(yù)后的關(guān)系

呂 歆

食管癌是一種嚴(yán)重的消化道惡性腫瘤，組織病理學(xué)分型主要為食管鱗狀細(xì)胞癌[1]。目前，食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制尚不清晰，因此對(duì)該疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中關(guān)鍵因子進(jìn)行研究，為食管癌的診斷和治療提供新的方向。研究表明，VEGF是調(diào)節(jié)淋巴管形成轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵信號(hào)通路[2]。另外COX-2的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來(lái)，分子生物學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與COX-2表達(dá)量的改變與miRNA的表達(dá)量有相關(guān)性，其促進(jìn)了癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[3]。為了進(jìn)一步了解COX-2、VEGF及miRNA的表達(dá)水平與食管鱗狀細(xì)胞癌患者的臨床療效及預(yù)后的關(guān)系，我院選擇了120例患者進(jìn)行相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2014年1月至2016年1月我院收治確診的120例臨床資料完整的食管鱗狀細(xì)胞癌患者作為觀察組；并選擇同期來(lái)醫(yī)院體檢的120例正常人為對(duì)照組。對(duì)照組男性67例，女性53例，年齡31～72歲，平均年齡(51.79±5.21)歲；觀察組男性65例，女性55例，年齡32～73歲，平均年齡(52.06±5.17)歲。2組患者的平均年齡、性別比例無(wú)明顯差異(P>0.05)。觀察組患者均為初治患者，并在全麻下行食管癌根治術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為鱗癌，組織分化程度：低分化35例、中分化61例、高分化24例，按照1997年UICC分期標(biāo)準(zhǔn)，T1期26例，T2期45例，T3期37例，T4期12例。該研究符合醫(yī)院倫理會(huì)研究標(biāo)準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者參照我國(guó)衛(wèi)生部2015年《原發(fā)性食管癌診療規(guī)范》[4]的診斷標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)為食管鱗狀細(xì)胞癌；預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月；自愿入組且簽署了知情同意書；患者接受手術(shù)治療均不同意采取其他治療方案。

排除標(biāo)準(zhǔn)：5年內(nèi)患有其他腫瘤史的患者；哺乳期或妊娠期患者；有精神病史的患者。

1.2 方法

食管鱗狀細(xì)胞癌患者均采用單純根治性切除術(shù)治療，并按患者治療效果分為有效組和無(wú)效組。

采集患者病理組織標(biāo)本，用甲醛固定，經(jīng)過(guò)脫水，浸蠟，石蠟包埋等制作切邊，厚度為4 μm。脫蠟，然后經(jīng)水化，采用EDTA抗原修復(fù)COX-2、VEGF。最后，通用型免疫組化染色SP試劑盒，設(shè)置合適的COX-2和VEGF的工作濃度。將食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞組織培養(yǎng)，利用Trizol試劑裂解提取癌組織RNA，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作，利用紫外分光光度計(jì)滴定RNA濃度(主要測(cè)定的是miRNA-21的濃度)。原發(fā)病灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶取自同一人進(jìn)行對(duì)比。所有患者的基因檢測(cè)均為病理。

1.3 觀察指標(biāo)

COX-2結(jié)果判斷：COX-2陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色彌散性分布，觀察核膜著色情況。用半定量法以腫瘤細(xì)胞的染色陽(yáng)性率表示腫瘤的表達(dá)情況，以比例積分75%～100%計(jì)4分，50%～74%計(jì)3分，25%～49%計(jì)2分，<25%計(jì)0分。染色強(qiáng)度用0(陰性)，1(弱陽(yáng)性)，2(陽(yáng)性)表示。COX-2的表達(dá)水平用染色陽(yáng)性率與染色強(qiáng)度乘積表示0～1分為(-)，2～3分為(+),4～6分為(++)，>6分為(+++)。

VEGF結(jié)果判斷：按照文獻(xiàn)方法，免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜染成棕黃色為陽(yáng)性。選擇染色均勻的癌間質(zhì)區(qū)，在400倍視野下，按著色細(xì)胞數(shù)占視野細(xì)胞數(shù)的百分比，未見陽(yáng)性細(xì)胞為(-)，陽(yáng)性細(xì)胞<30%為(+)，≥30%為(++)。(-)在數(shù)據(jù)處理中認(rèn)為是陰性，(+)(++)(+++)在數(shù)據(jù)處理中為陽(yáng)性。

臨床療效評(píng)價(jià)[5]：按照WHO制定的實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，將療效分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、無(wú)變化(NC)、進(jìn)展(PD)。有效組為完全緩解與部分緩解的患者；無(wú)效組為無(wú)變化和進(jìn)展的患者。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比2組參試者入院檢查時(shí)的COX-2、VEGF與miRNA的表達(dá)含量

觀察組患者的COX-2、VEGF、miRNA表達(dá)量高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)比2組參試者入院檢查時(shí)的COX-2、VEGF與miRNA的表達(dá)含量

2.2 對(duì)比COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

對(duì)比發(fā)現(xiàn)，食管鱗狀細(xì)胞癌COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量與患者的年齡，性別及組織分化程度有輕微關(guān)系，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3 對(duì)比治療后有效組和無(wú)效組患者COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量

無(wú)效組的COX-2、VEGF、miRNA表達(dá)量明顯高于有效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 對(duì)比食管鱗狀細(xì)胞癌COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量與臨床病理特征的關(guān)系

表3 對(duì)比治療后有效組和無(wú)效組患者COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量

2.4 對(duì)比原發(fā)病灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶間COX-2、VEGF與miRNA陽(yáng)性表達(dá)率

對(duì)比食管鱗狀細(xì)胞癌患者原發(fā)病灶的COX-2、VEGF與miRNA陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶患者，對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 對(duì)比原發(fā)病灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶間COX-2、VEGF與miRNA陽(yáng)性表達(dá)率(例，%)

3 討論

食管癌是食管腺體或黏膜上皮發(fā)生的惡性腫瘤，其發(fā)病率隨年齡的增長(zhǎng)而增加[5]。根據(jù)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，食管癌在我國(guó)的發(fā)病類型主要是食管鱗狀細(xì)胞癌[4]。腫瘤細(xì)胞通過(guò)對(duì)周圍組織的直接浸潤(rùn)淋巴道、血道等途徑轉(zhuǎn)移。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步及研究的深入，食管癌根治性切除術(shù)能有效地改善患者的治療效果，但由于淋巴結(jié)清除的局限性和隱匿性轉(zhuǎn)移的存在，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是患者手術(shù)治療失敗的主要原因[6]。臨床上，為了尋找較好的監(jiān)測(cè)患者治療效果及預(yù)后的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，分子生物學(xué)的發(fā)展提出對(duì)血清中COX-2、VEGF等物質(zhì)的含量變化作為評(píng)價(jià)患者預(yù)后的標(biāo)準(zhǔn)[7]。

COX-2基因定位于1號(hào)染色體的lq25，由10個(gè)外顯子和9個(gè)內(nèi)含子構(gòu)成，全長(zhǎng)8.3 kb，由604個(gè)氨基酸縮合而成的多肽。COX-2是誘生型花生四烯酸的環(huán)氧酶代謝途徑的限速酶，催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素[8-9]。正常狀態(tài)下，COX-2在外界因素的刺激下會(huì)提升其表達(dá)量。近期研究證實(shí)，COX-2能通過(guò)加速細(xì)胞增殖，阻止細(xì)胞凋亡，增加生成新生血管，抑制患者免疫機(jī)制，加快腫瘤的增生和轉(zhuǎn)移，也就是說(shuō)COX-2在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用[10]。VEGF基因位于染色體6p21，由7個(gè)內(nèi)含子和8個(gè)外顯子組成。VEGF由于其外顯子剪切的不同而形成5種異構(gòu)體。VEGF是腫瘤組織中最重要的促血管生成因子，參與腫瘤的生長(zhǎng)增殖、分化及轉(zhuǎn)移過(guò)程[11]。mi-RNA通過(guò)完全或部分與靶向mRNA的3'非翻譯通過(guò)堿基對(duì)不完全或完全結(jié)合，抑制mRNA的翻譯或切割降解，從而在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)[12]。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在外周血腫能穩(wěn)定存在，患者在不同時(shí)期、不同部位需要不同的蛋白發(fā)揮作用，一部分miRNA通過(guò)轉(zhuǎn)錄后誘導(dǎo)癌基因的過(guò)度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移。因此，一系列的mi-RNA在癌組織中的異常表達(dá)，使其成為診斷和評(píng)價(jià)臨床療效及預(yù)后的重要指標(biāo)[13]。mi-RNA-21是miRNA的成員，其在多種腫瘤中異常表達(dá)，并參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究顯示，mi-RNA-21在食管癌中表達(dá)水平升高，抑制食管癌患者正常細(xì)胞代謝，進(jìn)而阻礙AKT和ERK信號(hào)通路的暢通[14]。

研究表明，觀察組患者的COX-2、VEGF、miRNA表達(dá)量高于對(duì)照組。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，食管鱗狀細(xì)胞癌COX-2、VEGF與miRNA表達(dá)量與患者的年齡，性別及組織分化程度有輕微關(guān)系，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[15]。有效組患者的COX-2、VEGF、miRNA表達(dá)量低于無(wú)效組。對(duì)比食管鱗狀細(xì)胞癌患者原發(fā)病灶的COX-2、VEGF與miRNA陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶患者。這表明，食管癌原發(fā)病灶和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶之間存在這變化，表明COX-2、VEGF及miRNA在食管癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

綜上所述，監(jiān)測(cè)COX-2、VEGF聯(lián)合miRNA表達(dá)水平，能有效預(yù)測(cè)食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床療效及預(yù)后情況，值得臨床借鑒。