不同產地燈盞細辛藥材中焦袂康酸的限量檢查

1.云南中醫藥大學，云南 昆明 650500；2.云南省食品藥品監督檢驗研究院，云南 昆明 650011

燈盞細辛(燈盞花)為菊科植物短葶飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.) Hand.-Mazz.的干燥全草。燈盞細辛具有活血通絡止痛、祛風散寒的作用、用于中風偏癱、胸痹心痛、風濕痹痛、頭痛、牙痛[1]。燈盞細辛(燈盞花)中的焦袂康酸具有降壓、鎮靜的作用[2]，還具有顯著增加腦血管流量，改善腦血循環，降低腦血管阻力，提高血腦屏障的通透性，增加心肌營養回流的作用，同時具備提高機體巨噬細胞免疫功能和較強的抑制內凝血等作用[3]。但焦袂康酸具有肝毒性[4-5]，長期服用可能會對患者肝臟有較大的損傷。為了保證本藥材臨床用藥的安全性，本研究建立了用高效液相法測定燈盞細辛中焦袂康酸的限量檢查方法。為焦袂康酸的限量檢查提供了更為準確可靠的方法。

1 儀器與試藥

Waters 2695 液相色譜儀，Waters 2996(PDA)檢測器；萬分之一Sartorius BS224S型電子分析天平(Sartorius公司，美國)；十萬分之一 DENVER TB-215D型電子分析天平(DENVER公司，美國)；AS7240A超聲清洗儀(天津奧特賽斯儀器有限公司)。焦袂康酸(上海源葉生物科技有限公司，批號：B20618，≥98%)。實驗用水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。19批燈盞花藥材均收集于云南省和四川省，經云南中醫學院中藥學院中藥資源教研室李國棟副教授鑒定為燈盞花Erigeronbreviscapus(Vant.) Hand-Mazz.見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 取焦袂康酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.202 8 mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取本品0.5 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇40 mL，超聲處理(300 W，25 kHz)20 min，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱為JADE-PAK ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈―水(5∶95)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為270 nm，進樣量10 μL。在上述色譜條件下，取對照品溶液、供試品溶液、進樣測定。結果如圖1所示。

2.3 線性關系的考察 分別精密吸取焦袂康酸對照品溶液1、2、4、6、8、10、20 μL，按上述色譜條件，測定焦袂康酸峰面積。分別以焦袂康酸進樣量為橫坐標(X)，以峰面積積分值A為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得線性方程為：Y=57 802X-2721.3(r=0.999 9)，表明焦袂康酸在0.202 8～4.056 0 mg范圍內呈現良好的線性。

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，連續進樣5次，記錄峰面積。RSD為0.2%，結果表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗 取S1樣品，按“2.1.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行含量測定，結果焦袂康酸的含量為20.1 320 mg/g；RSD分別為1.2%，說明測量方法的重復性良好。

2.6 穩定性試驗 按“2.1.2”項下方法制備一份供試溶液，精密吸取10 μL，分別于0、4、8、12和24 h各測定1次，結果5次測定所得的峰面積值的RSD為0.3%。結果表明，室溫條件下，供試品溶液中的焦袂康酸在24 h內穩定。

2.7 加樣回收試驗 分別精密稱取6份已知含量的樣品S1每份約0.25 g，精密稱定。 精密加入1 mL濃度為4.998 mg/mL焦袂康酸對照品溶液，按“2.1.2”項下的方法制備供試溶液，進樣分析，計算焦袂康酸平均回收率(n=6)為99.60%，RSD為0.8%。表明試驗方法準確度好。結果見表2。

表2 焦袂康酸加樣回收率測定結果 (n=6)

2.8 樣品中焦袂康酸含量測定 分別稱取19批燈盞花藥材，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，以外標法計算含量，結果見表3。

表3 含量測定結果 (mg/g，n=2)

3 討論

本實驗通過對提取方法，提取溶劑，提取時間，檢測波長分別進行了考察及參照相關文獻資料中的有焦袂康酸的含量測定方法[7-9]后進行改進，最后確定了以乙腈-水(5∶95)為流動相，檢測波長為270 nm，流速1 mL/min，樣品超聲處理(功率300 W，頻率25 kHz)20 min對樣品中焦袂康酸的含量進行測定, 試驗結果表明,樣品分離效果好。經方法學考察,本含量測定方法結果較好,方法可行。

在《中國藥典》2015年版一部中僅有燈盞生脈膠囊中對焦袂康酸進行了檢查，但僅為化學反應，不能進行定量且專屬性較差，故本研究采用高效液相色譜法進行焦袂康酸的限量檢查。結果表明采用高效液相色譜法進行限量檢查更為準確且靈敏度高。

文獻報道中[5-6]焦袂康酸被用作小鼠慢性肝炎病理研究的工具藥，在該實驗中小鼠每日攝入量為18.6 mg。目前暫時缺少該成分對人體產生傷害的最低限量的報道，其具體限量要求還需要進一步藥理和臨床研究后再要求。