不同抗凝劑對ADP誘導血小板活化影響的比較

稅鳳春，華曉東，徐 琳，芮 菁

(天津市藥品檢驗研究院，天津 300070)

近年來，在血小板功能評價中，采用流式細胞術檢測血小板活化生物標志物-膜糖蛋白的方法成為主流，與血小板聚集率檢測等傳統方法相比，該方法具有操作易規范化、過程簡單、無需制備富血小板血漿、快速準確、更易量化等優點。但由于血小板在體外非常活躍，影響因素較多，如采血環節、抗凝劑使用不當等易造成自發活化率升高，然而目前國內有關血小板活化生物標志物檢測影響因素研究報道少見。本文研究了不同抗凝劑對其影響作用，以期確定一個較好的標本抗凝方法。

1 材料與儀器

1.1受試物 五水枸櫞酸鈉(Na3C6H5O7·5H2O)，天津市贏達稀貴化學試劑廠，臨用前用純化水配制成3.8%濃度的溶液備用。EDTAK2采血管，批號 20160502，規格 0.5 ml，山東省成武縣華博醫療器械有限公司；肝素鈉采血管，批號 20170112，規格 1 ml，蘇州靈巖醫療器械有限公司；3.2%枸櫞酸鈉采血管(1∶9)，批號 20170324，規格 1 ml，蘇州靈巖醫療器械有限公司。

1.2試劑 Anti-Mouse/Rat CD62p PE/Cy7(P-selectin)，批號 B223759； Anti-Mouse/Rat CD61 PE，批號 B216420，均購自Biolegend。Rat IgG2a-PE/Cy7，批號 4290714；Rat IgG-PE，批號 4281135，均購自eBioscience。ADP，批號 SLBP6247V，SIGMA。 鞘液(Focusing Fluid)，批號 0316C225，Life Technologies Corporation。4%多聚甲醛，批號 6119851，Biolegend公司。多聚甲醛，批號 SZBG1160V，SIGMA。稀釋液(Flow Cytometry Staining Buffer)，批號 6111151，聯科生物。補償微球(UltraComp eBeads)，批號 4312694，ThermoFisher。PBS (pH 7.2-7.4)，批號 16052302，無錫傲銳東源生物科技有限公司。

1.3實驗動物 SD大鼠，SPF級，體重 200～300 g，雌雄兼用，雌鼠無孕。北京維通利華實驗動物技術有限公司購進，許可證號：SCXK(京)2016-0001。在實驗期間按國家對實驗動物飼養條件要求進行飼養。

1.4儀器 流式細胞儀Attune NxT，ThermoFisher SCIENTIFIC；XS-205DU電子天平，精度0.1 mg，試劑稱量用；XP2001S電子天平，精度 1 g，動物稱量用； 5 ml、1 ml、200 μl、1～10 μl移液器及相應規格吸頭；37 ℃恒溫水浴、具塞小瓶、5 ml塑料流式管、1.5 ml EP管、玻璃毛細采血管、計時器、試管架等。……