用于富集磷酸化合物的溫度敏感親和色譜材料的制備及其應用

戴國鑫, 王 迪, 王 彥, 曹之涵, 戴榮繼

(北京理工大學生命學院, 北京 100081)

蛋白質的可逆磷酸化,是一種極為重要且廣泛存在的蛋白質翻譯后修飾方式[1-5]。蛋白質的可逆磷酸化是受蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶共同作用的結果。這一過程參與調控了包括細胞信號轉導、酶活性調節、分子間相互識別和作用、細胞分裂和凋亡等幾乎所有重要的生命過程[6-9]。

異常的磷酸化過程會直接影響蛋白質的諸多特性,包括蛋白質間的作用機制、空間結構和亞細胞定位等,進而導致一些惡性疾病的發生,包括阿爾茨海默氏病、心血管疾病、糖尿病和癌癥等[10-14]。因此,對磷酸化蛋白質進行高效的分離鑒定,有助于全面深入地研究與思考,有利于更深層次地理解復雜的生命活動,闡明生理病理變化機理。

磷酸化蛋白質的豐度往往很低,離子化程度小,其質譜信號經常被一些高豐度蛋白質和大量非磷酸化蛋白質掩蓋,導致無法分析鑒定。因此需要將低豐度的磷酸化蛋白質富集后分析。目前,常用來富集和分離磷酸化蛋白質的方法有免疫親和沉淀法、色譜法和化學修飾磷酸基團法。其中方法最成熟、應用最廣泛的是固定金屬離子親和色譜法和金屬氧化物親和色譜法[15-18]。但這兩種方法往往需要以切換流動相的方式達到富集目的,而且流動相通常為濃度較高的鹽溶液或是有機溶劑占比較高的混合液,這些條件均會對磷酸化蛋白質的結構和功能造成影響。……