維藥巴那都克布祖熱顆粒中京尼平苷酸含量測定*

關(guān)永強(qiáng)，古麗娜·沙比爾△，阿迪力·艾斯托拉，凱撒·蘇萊曼，石磊嶺

(1.新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830001； 2.新疆維吾爾自治區(qū)和田地區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆 和田 848000)

巴那都克布祖熱處方乃維吾爾族沿襲至今的經(jīng)典用藥成方，記錄在維吾爾醫(yī)藥古籍文獻(xiàn)《卡拉巴丁·卡地丁》中[1]，具有清熱利尿、消腫止痛、止咳化痰、退熱解渴等功效[2]，用于治療前列腺炎、膀胱炎、尿道感染等泌尿系統(tǒng)疾病[3]。該處方由車前子、葫蘆巴、菊苣子等8味藥材組方，車前子作為清除劑[4]，起到軟堅散結(jié)、清除膿性體液及廢物、清理尿路、滲濕通淋、止咳平喘等作用[5－6]。京尼平苷酸為車前子中的主要藥用成分，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定巴那都克布祖熱顆粒劑中京尼平苷酸的含量[7－14]，為控制其內(nèi)在質(zhì)量提供依據(jù)，也為后續(xù)產(chǎn)業(yè)化標(biāo)準(zhǔn)的建立打下基礎(chǔ)[15]。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－2010HT型高效液相色譜儀，LC－2010HT紫外檢測器(日本島津公司);Mettler Toledo AB265－S型分析天平（瑞士梅特勒 －托利多公司）；UPT－1－5型超純水機(jī)（四川優(yōu)普超純科技有限公司）；超聲清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

京尼平苷酸對照品（供含量測定用，純度97.4%，批號為111828－201604，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher Scientific公司）；冰乙酸(分析純，天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠）；水為超純水；所有藥材均購自新疆安薩爾維吾爾藥業(yè)有限公司；巴那都克布祖熱顆粒(實驗室自制，批號分別為20160714，20160715，20140718）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：GEMINI C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm，廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司）；檢測波長：254 nm；流速：1 mL ／min；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇（A）－0.5%冰醋酸溶液（B），過 0.22 μm 微孔濾膜并超聲脫氣，梯度洗脫（表 1）。

表1 流動相梯度洗脫表

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂流動相梯度洗脫，記錄色譜圖，詳見圖1。結(jié)果京尼平苷酸峰理論板數(shù)不低于3 000。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取京尼平苷酸對照品適量，精密稱定，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品溶液(京尼平苷酸質(zhì)量濃度為0.103 24 g／L)。取樣品(批號為 20160714)約 1 g，精密稱定，置 10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲提取30 min，靜置至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，過0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。稱取除車前子原料外的其他藥材及輔料，按處方及工藝制備陰性樣品，取1 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲提取30 min，靜置至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，過0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2項下對照品溶液2，5，10，15，20，25 μL，進(jìn)樣測定峰面積。以各對照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝787 630X＋10 548，r2＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，京尼平苷酸進(jìn)樣量在0.206～2.581μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液(京尼平苷酸質(zhì)量濃度為 0.103 g／L)10 μL，重復(fù)進(jìn)樣 6次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.24%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品（批號為20160714），精密稱定，各6份。按2.2項下方法制備供試品溶液，精密進(jìn)樣 10 μL測定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為 1.45%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取樣品（批號為20160714）1 g，精密稱定，各6份。按2.2項下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，4，6，8 h 時進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1.51%（n＝6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取樣品（批號為 20160714）0.5 g，精密稱定，共6份。分別加入對照品溶液(京尼平苷酸0.139 6 g ／L)9 mL，制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果見表2。

表2 京尼平苷酸加樣回收試驗結(jié)果(n＝6)

2.4 樣品含量測定

分別取樣品（批號分別為 20160714，20160715，20140718）各 1 g，精密稱定，共 3份。按 2.2項下方法制備供試品溶液，依次進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計算3批樣品的京尼平苷酸含量。結(jié)果見表3。

表3 3批樣品京尼平苷酸含量測定結(jié)果(n＝3)

3 討論

本研究中參考2015年版《中國藥典(一部)》車前子中京尼平苷酸含量測定的檢測方法進(jìn)行梯度洗脫，試驗中采用甲醇∶0.5%冰醋酸的流動相進(jìn)行洗脫，京尼平苷酸峰在約14.2 min時出峰，在454 nm波長處有最大紫外吸收，理論板數(shù)大于4 000，且峰形良好。樣品中京尼平苷酸出峰時間為14.2 min，且樣品峰與其他峰分離度好。陰性對照試驗表明，除車前子外的其他原輔料不干擾樣品中京尼平苷酸的含量測定。該方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、靈敏度高，重復(fù)性、精密度等各項指標(biāo)均良好，為巴那都克布祖熱顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量測定提供了參考，可快速、有效地通過京尼平苷酸含量檢測來考察制劑內(nèi)在質(zhì)量。2015年版《中國藥典(一部)》中規(guī)定車前子中京尼平苷酸含量應(yīng)不低于0.5%，本研究中通過對制劑中京尼平苷酸的含量考察，應(yīng)不低于0.2%才合格。