脂必泰膠囊溶出度測(cè)定的方法研究

施 磊，葉 雋，宋 磊

(1.上海市靜安區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，上海 200435； 2.上海市交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院，上海 200050)

高脂血癥是指由于脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常使血漿中總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LGL-C)中一種或幾種脂質(zhì)高于正常，表現(xiàn)為高膽固醇血癥、高三酰甘油血癥、混合型高脂血癥[1]。臨床上可為原發(fā)性或繼發(fā)于其他疾病，是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈血管內(nèi)斑塊形成、冠心病和腦卒中的高危因素。因此，控制血脂、改善血管內(nèi)皮功能、穩(wěn)定斑塊成為一級(jí)預(yù)防的手段之一。脂必泰膠囊消痰化瘀、健脾和胃。主治痰瘀互結(jié)、氣血不利所致的高脂血癥。癥見(jiàn)頭昏、胸悶、腹脹、食欲減退、神疲乏力等。脂必泰膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)中藥第64冊(cè)。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，有多篇文章對(duì)脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的含量測(cè)定進(jìn)行了研究[2-4]，沒(méi)有對(duì)其溶出度進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。本研究建立了HPLC 法測(cè)定脂必泰膠囊的溶出度，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1260系列高效液相色譜儀(包括G1311B型二元泵、G1329B型自動(dòng)進(jìn)樣器、G4212B DAD檢測(cè)器、Agilent openLAB色譜工作站，美國(guó)安捷倫)，STAT智能溶出度儀(SOTAX AT7)，CPA225D型電子天平(精度0.01 mg，德國(guó)賽多利斯公司)。

1.2 試劑和藥品

洛伐他汀對(duì)照品(批號(hào)：100600-201504,含量為 99.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，脂必泰膠囊(0.24 g/粒，批號(hào)：170206、160706、160511、160307，成都地奧九泓制藥廠)，甲醇(色譜純，德國(guó)Merck公司)，磷酸、十二烷基硫酸鈉、氫氧化鈉(均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，高純?nèi)ルx子水(上海市靜安區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所自制)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

ZABAX-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相為甲醇-0.05%磷酸(80∶20)；流速1.0 ml/min;柱溫 30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)238 nm；進(jìn)樣量 10 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液

精密稱取洛伐他汀對(duì)照品溶液10.24 mg，置50 ml容量瓶中，加少量乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備對(duì)照溶液。

2.2.2供試品溶液

取樣品(批號(hào):170206)6粒，分別置200 ml容量瓶中，分別加1%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)超聲溶解，冷卻，加溶劑至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液

根據(jù)脂必泰膠囊處方配制，除去紅曲，按生產(chǎn)工藝制備陰性樣品，同供試品溶液制備方法，即得陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

取洛伐他汀對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相制成濃度為40 μg/ml的溶液作為系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，得液相色譜圖(圖1)，洛伐他汀的保留時(shí)間為10.22 min，理論塔板數(shù)為10 500。結(jié)果表明，本次分析使用的色譜系統(tǒng)是有效、適用的。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取按“2.2.1”項(xiàng)下配制的對(duì)照儲(chǔ)備液0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0 ml，置25 ml的容量瓶中，分別加1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)稀釋至刻度，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液(濃度分別為1.63、4.073、8.143、16.29、24.43、40.72、81.44、122.2 μg/ml)。按“2.1”項(xiàng)色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得洛伐他汀的線性回歸方程為：Y=30.801 1X+5.332 1，r=1.000 0，線性范圍1.628 8～122.160 0 μg/ml。

圖1 脂必泰膠囊的HPLC圖 A.溶劑；B.對(duì)照品溶液；C.供試品溶液；D.陰性對(duì)照溶液；1.洛伐他汀

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液(含洛伐他汀40.72 μg/ml)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各色譜峰的峰面積。洛伐他汀平均峰面積為1 269.41，RSD為0.11%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取溶出度項(xiàng)下供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，記錄峰面積，其峰面積的RSD為0.87%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取脂必泰膠囊9粒，每3粒為一組，置溶出杯中，分別加洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(精密稱取洛伐他汀對(duì)照品31.5 mg，置50 ml容量瓶中，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋至刻度搖勻，備用)1.0、2.0、3.0 ml，參照溶出度第三法，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)200 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，依法操作。經(jīng) 45 min時(shí)，取溶液適量，冷卻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果回收率分別為101.94%、100.94%、98.53%，平均回收率為100.5%，RSD為1.7%。

2.8 溶出度試驗(yàn)條件的選擇

2.8.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取洛伐他汀對(duì)照品適量，先用適量甲醇溶解，再用1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)稀釋成適宜的濃度，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在238 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，因此，選擇238 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.8.2溶出度方法的確定

取樣品(批號(hào)：170206)，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)200 ml為溶出介質(zhì)，參考2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》四部要求，采用小杯法，轉(zhuǎn)速為100 r/min進(jìn)行試驗(yàn)，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 不同溶出介質(zhì)下脂必泰膠囊的溶出度曲線

2.8.3轉(zhuǎn)速的確定

取樣品(批號(hào):170206)，采用小杯法，1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)200 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50、75、100、120 r/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，于45 min時(shí)取樣測(cè)定，轉(zhuǎn)速100、120 r/min時(shí)溶出度最大。根據(jù)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》四部要求和洛伐他汀的溶出情況，確定轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.8.4溶出介質(zhì)的選擇

取樣品(批號(hào)：170206)，分別以水、0.1 mol/L鹽酸、1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)和2.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為溶出介質(zhì)。其中水和0.1 mol/L鹽酸是常見(jiàn)的首選溶出介質(zhì)，2.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》二部中“洛伐他汀膠囊”溶出度測(cè)定采用的溶出介質(zhì)，而1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)是根據(jù)“若介質(zhì)中加表面活性劑如十二烷基硫酸鈉等，應(yīng)盡量選用低濃度。”的原則。由于脂必泰膠囊中洛伐他汀含量較少，為保證高效液相色譜出現(xiàn)相對(duì)較大的色譜峰，故按照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》四部的溶出度測(cè)定第三法，溶出介質(zhì)為200 ml，轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣，測(cè)定溶出含量，結(jié)果詳見(jiàn)圖2，確定1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH值為7.0)為溶出介質(zhì)。

2.8.5取樣時(shí)間的選擇

取4個(gè)批號(hào)樣品，采用小杯法，以1.0%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽溶液(pH 7.0)200 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別于5、10、20、30、45、60 min取樣，測(cè)定溶出含量。由圖3可見(jiàn)，20 min時(shí)已經(jīng)達(dá)到85%以上，在30 min時(shí)溶出度都在90%以上，根據(jù)2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》四部要求和洛伐他汀的溶出情況，確定取樣時(shí)間為45 min。

圖3 不同取樣時(shí)間下脂必泰膠囊的溶出度曲線

2.8.6樣品溶出度的測(cè)定

取4批供試品，參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》四部附錄0931的溶出度測(cè)定第三法小杯法，按“2.8.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)樣品溶出度檢查結(jié)果，限度均不得低于標(biāo)示量的80%。

表1 樣品溶出度測(cè)定結(jié)果

3 討論

固體制劑要在人體內(nèi)發(fā)揮其藥效，首先要在人體內(nèi)崩解、溶出后釋放出藥物，然后才能進(jìn)一步產(chǎn)生作用。而預(yù)測(cè)在人體的釋放吸收情況，作為體外評(píng)價(jià)樣品質(zhì)量、判斷藥物療效的有效藥學(xué)研究手段，

目前只有溶出度法最為適用。該法在當(dāng)前藥物的體外釋放評(píng)定中應(yīng)用最為廣泛、便捷和準(zhǔn)確。因此，在固體制劑的檢驗(yàn)中溶出度檢查應(yīng)該成為一個(gè)必檢項(xiàng)目。

脂必泰膠囊為復(fù)方中藥制劑，國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定其含量測(cè)定項(xiàng)僅為熊果酸。然而，脂必泰膠囊作為一種治療高脂血癥的藥物，其主要成分是紅曲，而紅曲中降血脂的活性成分主要是洛伐他汀[5]。那么測(cè)定脂必泰膠囊中洛伐他汀這一成分的含量，及其在人體的釋放程度就成了對(duì)其質(zhì)量的一個(gè)必然考核。與脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的含量測(cè)定的多篇文獻(xiàn)相比較，本研究是采用HPLC法，測(cè)定脂必泰膠囊中紅曲的有效成分洛伐他汀的溶出度，并對(duì)該溶出度的測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。該方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于測(cè)定脂必泰膠囊的溶出度。