結(jié)直腸腺癌組織中CYR61和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及相關(guān)性研究*

史 璇，張 鑫，朱金朋，邸 巍,田 蕾

錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科三病區(qū)( 錦州 121000)

結(jié)直腸腺癌臨床最為常見，是腸粘膜上皮來源的腫瘤，由腺上皮的異型增生演變而來，伴有肌層的侵襲。病變形成中伴有間質(zhì)的血管新生，可以為腫瘤細(xì)胞的增殖提高必要的營(yíng)養(yǎng)和氧[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor ，VEGF)是血管生成的經(jīng)典蛋白，可以促進(jìn)間質(zhì)中血管內(nèi)皮細(xì)胞的繁殖，促進(jìn)管腔形成，使血管具有功能[2]。目前研究其影響因素較多。高半胱氨酸蛋白61(Homocysteine protein 61，CYR61)是結(jié)締組織生長(zhǎng)因子家族的成員，是早期促癌基因，對(duì)腫瘤形成起的作用更加直接，尤其是對(duì)血管生成的調(diào)控是其重要功能之一[3-4]。本文關(guān)注結(jié)直腸腺癌中CYR61和VEGF的表達(dá)，探討二者的關(guān)系，分析其臨床意義。

資料和方法

1 一般資料 收集近兩年在我院確診為結(jié)直腸腺癌，并行手術(shù)治療的患者作為觀察組，收集病人的完整資料，留取術(shù)后新鮮組織，共77例，其中男性40例，女性37例，年齡45～89歲，平均(59.7±9.3)歲。納入均由病理醫(yī)師復(fù)審切片，并按WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)分型。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前行放、化療的患者；②有腸道手術(shù)史的患者；③多原發(fā)癌的患者。選擇上述患者中距腫瘤邊緣大于5 cm的正常結(jié)腸黏膜新鮮組織12例作為對(duì)照組，其中男性6例，女性6例，年齡49～80歲，平均年齡(58.6±7.8)歲。兩組在性別、年齡構(gòu)成等常規(guī)因素比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 CYR61和VEGF蛋白的檢測(cè) CYR61和VEGF的檢測(cè)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(兩組蛋白的半定量表達(dá))。術(shù)后新鮮樣本均應(yīng)用70%酒精固定后，用眼科剪刀剪碎組織，在銅網(wǎng)上過濾后，制備單細(xì)胞懸液(1×106/ml)，取1 ml單細(xì)胞懸液，按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗、PBS及FITC-IgG二抗。應(yīng)用BC公司生產(chǎn)的Epics-XLII型流式細(xì)胞儀，應(yīng)用數(shù)據(jù)軟件進(jìn)行分析。

3 結(jié)果判定 以熒光指數(shù)(FI)表示蛋白表達(dá)的半定量。FI值計(jì)算公式為：

結(jié)果

1 CYR61和VEGF在兩組中表達(dá)的比較 CYR61和VEGF在兩組中表達(dá)的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2 CYR61和VEGF在觀察組不同病理特征中的比較 觀察組中CYR61和VEGF的表達(dá)與腫瘤的最大徑、腫瘤的浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，CYR61與腫瘤的分化程度和增殖指數(shù)密切相關(guān)，VEGF的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),見表2。

3 觀察組中CYR61和VEGF的相關(guān)性 應(yīng)用線性相關(guān)分析，結(jié)果顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.55，P<0.05)。

表1 CYR61和VEGF在兩組中表達(dá)的比較

表2 CYR61和VEGF在觀察組不同病理特征中的比較

討論

結(jié)直腸腺癌腫瘤具有侵襲性，其侵襲程度與分化和細(xì)胞增殖程度相關(guān)。血管生成不僅在癌前病變及異型增生到較大病灶形成中起重要作用，同時(shí)在腫瘤向周圍或遠(yuǎn)處侵犯和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，并參與了腫瘤量變的過程[5-6]。CYR61基因定位于1p22-p31，相對(duì)分子量為42kDa，含有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子，編碼381個(gè)氨基酸的開放閱讀框架，其中38個(gè)為保守的半胱氨酸[7]。CYR61的表達(dá)是通過RhoA激酶和P38途徑調(diào)節(jié)的，P38通過調(diào)節(jié)環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)結(jié)合蛋白，并使蛋白發(fā)生磷酸化后調(diào)節(jié)CYR61啟動(dòng)子活性，其表達(dá)產(chǎn)物被分泌到細(xì)胞表面，具有明顯的促有絲分裂活性，同時(shí)具有明顯的趨化性[8-9]。在功能上CYR61通過不同途徑誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、粘附、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)和血管的新生[10]。CYR61在結(jié)直腸癌中的作用屬于早期應(yīng)答基因，因此其在腫瘤中是全程參與的，其在不同階段促腫瘤生成的程度可能不同[11-12]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的流式細(xì)胞術(shù)可以半定量檢測(cè)蛋白的表達(dá)，結(jié)果客觀，無主觀判斷產(chǎn)生的偏差，重復(fù)性好。本研究結(jié)果顯示腫瘤中CYR61和VEGF高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤形成的重要因素，使腫瘤細(xì)胞具有一定的異型性，同時(shí)腫瘤細(xì)胞具有明顯的侵襲性，此時(shí)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，核染色深，組織結(jié)構(gòu)形成篩狀和迷路狀，腫瘤趨于幼稚。結(jié)果顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達(dá)與腫瘤的最大徑、腫瘤的浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，提示CYR61和VEGF高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和直接蔓延。CYR61與腫瘤的分化程度和增殖指數(shù)密切相關(guān)，提示CYR61可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的失分化過程和細(xì)胞的繁殖，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，腫瘤細(xì)胞數(shù)量明顯增加，腫瘤體積增大，對(duì)肌層和周圍組織的破壞能力增強(qiáng)，腫瘤的惡性程度明顯提高[13]。結(jié)果顯示VEGF的表達(dá)與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示VEGF高表達(dá)可能對(duì)腫瘤的淋巴道播散有一定的促進(jìn)作用。相關(guān)性分析顯示觀察組中CYR61和VEGF的表達(dá)具有正相關(guān)性，提示二者具有明顯的正向協(xié)同作用。CYR61參與腫瘤新生血管生成的可能機(jī)制為：①Cyr61與整合素受體結(jié)合后通過激活αvβ3以旁分泌形式調(diào)節(jié)血管生成的活動(dòng)，包括促進(jìn)細(xì)胞間的黏附、增殖、增加生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的DNA的合成及介導(dǎo)內(nèi)皮微管的形成等[14]。②CYR61可增加促血管生成調(diào)節(jié)因子[15]，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)的相關(guān)性直接證實(shí)了此觀點(diǎn)。③CYR61可誘導(dǎo)ECM降解蛋白酶和基質(zhì)金屬蛋白酶的生成，抑制組織金屬蛋白酶抑制劑表達(dá)，改變ECM的結(jié)構(gòu)或穩(wěn)定性，間接促進(jìn)血管生成[16-17]。但是由于CYR61是多向調(diào)控基因，關(guān)于CYR61的具體作用和影響因素有待更多基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

總之，結(jié)直腸腺癌組織中CYR61和VEGF高表達(dá)對(duì)促進(jìn)腫瘤性病變的形成和進(jìn)展有重要作用。CYR61和VEGF之間具有正向協(xié)同作用。