乳腺小葉增生篩選方外用對乳腺增生大鼠乳腺形態學及動情間期血清E2、P、PRL 的影響

繆 霓，王 群*，王珊珊，貢翊斐，王小平，蔡惠群，張 宇

（1.上海中醫藥大學附屬市中醫臨床醫學院，上海 200071；2.上海中醫藥大學附屬上海市中醫醫院，上海 200071）

乳腺增生病是乳房部一種既非炎癥亦非腫瘤的疾病，以經前乳房脹痛及不同程度的乳房腫塊為特征，是育齡期女性常見的乳房疾病。目前認為，卵巢內分泌激素失調是本病的主要原因。乳腺小葉增生篩選方（淫羊藿、巴戟天、香附、莪術、柴胡等）是我院臨床應用于乳腺增生病的外治經驗方，臨床效果反映良好。課題組的前期研究表明，應用苯甲酸雌二醇序貫黃體酮肌注可以復制大鼠乳腺增生病模型，外用藥物13天后各組大鼠乳腺腺泡面積和導管內徑之間無差異，已呈現復舊狀態[1]。據研究[2]表明，大鼠正常動情周期在4～5天左右，課題組考慮去除外源性性激素13天后，大鼠可能已經經歷了將近3個正常的動情周期。因此，課題組將本次實驗取樣時間提前，分別在用藥5天、10天取樣，評價外用中藥對模型大鼠動情間期性激素水平的影響以及乳頭直徑的影響，為外用中藥應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

清潔級SD大鼠60只，雌性未孕，8周齡，體重（160±20）g；上海杰思捷實驗動物有限公司提供（動物許可證號：SCXK（滬）2013-0006）。于標準動物房內常規飼養14d，自由飲水進食，使平均體重達200g以上。

1.1.2 外用中藥

仙靈脾、巴戟天、柴胡、制香附、莪術等中藥配方顆粒（由四川新綠色藥業科技發展有限公司提供，批號170311）。

1.1.3 實驗試劑

苯甲酸雌二醇注射液（生產公司：四川金科藥業有限責任公司，批號：20160301）；黃體酮注射液（生產公司：廣州白云山明興至要有限公司）。

1.1.4 實驗儀器

正置光學顯微鏡；臺式高速冷凍離心機；攝像鏡頭（EVILEYE手機微距鏡頭）。

1.2 隨機分組

將60只大鼠稱重后，由輕至重編號，再通過隨機數字表法將大鼠隨機分為對照組、模型組、用藥組，每組各20只。

1.3 造模方法

模型組及用藥組參考黃月玲等[3]的研究建立模型，具體方法：予大鼠后肢外側肌肉注射苯甲酸雌二醇(劑量為0.5 mg/kg/d)連續20天序貫黃體酮（5 mg/kg/d）連續5天，共25天復制模型。對照組每日在后肢外側肌肉注射0.9%生理鹽水0.2 ml，連續25d。各組大鼠從實驗開始每日觀察大鼠陰道涂片，記錄動情期變化。

1.4 干預方法

大鼠外用藥物劑量按照成人70 kg每日所服藥量換算，根據大鼠體重計算出當日藥量，電子天平稱取每日所需總劑量，加蒸餾水攪拌均勻后形成黏稠狀藥糊，等分后涂抹于1×1 cm紗布上，覆蓋在大鼠第三對乳房上。淀粉糊精貼敷劑制作及使用方法同上。從干預治療周期開始用藥，對照組及模型組給予淀粉糊精貼敷，用藥組給予藥糊貼敷，每次上藥后用自制縛帶將大鼠第三對乳房纏繞，每日貼敷8小時以上，連續10天；大鼠單籠飼養，防止相互啃咬。

1.5 觀察指標與方法

1.5.1 乳頭直徑

分別于造模前后及給藥5d、10d后，使用手機微距鏡頭，等距離微距拍攝，以1cm軟尺作為參照物，軟件測量大鼠第三對乳頭直徑，并觀察乳房外觀。

1.5.2 血清性激素水平影響

分別于造模前后及給藥5d、10d，通過陰道涂片觀察大鼠動情間期，于監測到的每一個動情間期內眥靜脈取血，酶聯免疫檢測大鼠E2、P、PRL。

1.6 統計學方法

實驗數據運用SPSS 21.0軟件進行統計學分析。大鼠乳頭直徑及血清性激素水平數據均用“s”表示，服從正態分布及方差齊性時采用方差分析，不服從正態分布或方差不齊時采用Kruskal-Wallis H檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠造模前后及給藥后乳頭直徑比較

表1 各組大鼠造模前后及用藥后乳頭直徑比較

表1 各組大鼠造模前后及用藥后乳頭直徑比較

注：與對照組相比，1）P＞0.05，2）P＜0.05；與模型組相比，3）P＜0.05；*指大鼠在造模過程中死亡2只。

組別造模前 造模后 用藥5天后 用藥10天后n直徑（mm） n 直徑（mm） 直徑（mm） 直徑（mm）對照組 20 0.89±0.05 20 1.13±0.05 1.10±0.06 1.07±0.06模型組 20 0.86±0.061) 20 1.24±0.072) 1.22±0.052) 1.13±0.072)用藥組 20 0.87±0.051) 18* 1.21±0.082) 1.12±0.052)3) 1.01±0.021)3)

2.2 各組大鼠造模前后及給藥后E2、P、PRL變化

表2 各組大鼠造模前后及給藥后E2、P、PRL水平比較（E2 ：Pmmol/L、P：ng/mL、PRL：ng/mL）（x±s）

3 討 論

傳統醫學的外治理論及經驗豐富，清代吳尚先《理瀹駢文》[5]記載了大量廣泛應用于臨床的外用方劑，且提出：“外治之理即內治之理，外治之藥亦即內治之藥，所異者法耳。醫理藥性無二，而法則神奇變幻。”“病先從皮毛入，藥即可由此進。”闡明了外治與內治療效相當，只要辨證正確，外用藥通過皮膚的吸收，能達到內服藥物同樣的療效。本次實驗中，根據陸德銘教授對乳腺增生病“沖任失調，氣滯血瘀互為因果”病機的認識[6]，課題組采用巴戟天、淫羊藿補腎調沖，柴胡、香附、莪術疏肝活血，同時現代藥理研究證實[7]，補腎藥物可以使下丘腦－垂體－卵巢軸間的功能得以改善，有調節失調的性激素的作用。

在動物實驗中，乳頭直徑的變化是評價乳腺增生病模型及治療作用的一項公認指標。本實驗造模成功后，大鼠乳頭直徑增大，在撤除外源性激素10天后，模型組大鼠的乳頭直徑未見明顯縮小；而用藥組大鼠的乳頭直徑已縮小至正常狀態，這說明外用中藥貼敷能夠加速乳頭直徑的恢復時間，并推測是通過調節體內的雌激素所起到的效果。提示我們對于乳腺增生病的治療應從調節血清性激素水平著手。

綜上，乳腺小葉增生篩選方外用有很大優勢，既能在藥效上發揮作用，在便利性上又有別于中藥湯藥需要煎煮、花費較多時間的特點，外用中藥不受時間地點限制，可行性強。因此，外用小葉增生篩選方給患者提供了一種多的治療方式。