3種全自動血型分析系統在血型鑒定及不規則抗體篩查試驗中的應用比較

陳 偉,李 菲,邱 進,文 軍△,黃 睿,王昌敏

(新疆維吾爾自治區人民醫院：1.輸血科；2.臨床檢驗中心,新疆烏魯木齊 830001)

準確的血型鑒定和不規則抗體篩查是保障臨床用血安全的前提[1-2]。傳統的血型鑒定多為手工操作如玻片法、紙板法、試管法等，不規則抗體篩查也多采用試管法，在工作量較少的情況下，基本可以滿足臨床用血工作，但由于實驗全過程中不可避免的人為誤差，難以保證血型鑒定結果100%正確率和可靠的不規則抗體篩查結果[3]。如果血型鑒定錯誤和不規則抗體漏檢，可能會導致患者在輸注血液制品過程中產生嚴重的輸血不良反應或溶血現象危及患者生命[4]。2015年新疆地區為了更好的發展輸血醫學和規范輸血科基本建設標準，重新修訂了《新疆維吾爾自治區醫療機構輸血科(血庫)建設基本標準(2015版)》，內容對包括設置原則、人員配備、儀器設備、開展業務項目等做了諸多規定，其中要求輸血科必須配置全自動血型儀器，保障血型鑒定準確性和不規則抗體篩查結果可靠性，保證用血安全。

隨著現代科技的發展和輸血醫學專業需求提高，全自動血型分析儀器應運而生，檢測方法主要包括卡式法和微孔板法，卡式法主要包括:強生(ORTHO AUTOVUE Innova)微柱玻璃珠卡、達亞美(Techno TwinStation)微柱凝膠卡、戴安娜(WADianaGrifols)微柱凝膠卡等；微板法包括:伽利略(Galileo NEO)微孔板法與捕獲技術、柯利斯(DIAGAST)微孔板法與紅細胞磁化技術等，其過程是從標本識別、試劑的加樣、樣本的孵育、離心、結果讀取、保存和傳輸全過程自動化和標準化分析，減少人為操作帶來的差錯及判斷標準不同導致的結果迥異，提高了工作質量和工作效率[5-6]。本院2012-2014年分別引進強生(ORTHO AUTOVUE Innova)全自動血型分析儀器、達亞美(Techno TwinStation)全自動血型分析儀器、伽利略(Galileo NEO)全自動血型分析儀器，本文通過對這3種全自動血型分析系統各自特點的研究，總結其臨床應用的經驗體會。

1 材料與方法

1.1樣本來源 樣本采自2012-2017年本院就診患者328例，男141例，女187例，年齡3 d至89歲，使用3種全自動血型分析系統，檢測血型并篩查不規則抗體。

1.2樣本采集 應用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝劑，采集就診患者靜脈血3 mL，盡快檢測，如樣本不能及時檢測可置2～8 ℃冰箱保存7 d。

1.3設備與試劑 強生全自動血型分析儀器(ORTHO AUTOVUE Innova)簡稱強生、達亞美(Techno TwinStation)全自動血型分析儀器簡稱達亞美、伽利略(Galileo NEO)全自動血型分析儀器簡稱伽利略。強生ABO/Rh正反定型血型定型試劑卡(強生微柱玻璃珠)、抗人球蛋白(IgG,C3b/C3d)檢測卡(強生微柱玻璃珠)、人ABO血型反定型用3%紅細胞試劑盒(強生)、強生人不規則抗體檢測用3%紅細胞試劑盒(強生)、低離子強度鹽溶液(強生)；達亞美ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡(達亞美微柱凝膠)、低離子抗人球蛋白卡(達亞美微柱凝膠)、達亞美2號稀釋液、清洗液A(10倍濃縮液；達亞美)、清洗液B(10倍濃縮液；達亞美)；伽利略微孔板、抗A抗B血型定型試劑(伽利略)、抗D(IgM+IgG)血型定型試劑(伽利略)、人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒包括A1、A2、B、O紅細胞(伽利略)、質控對照試劑(伽利略)、紅細胞抗體篩選試劑盒(微孔板捕獲法；伽利略)、低離子強度溶液(伽利略)、指示紅細胞、捕獲法-R 質控血清(陽性和陰性；伽利略)；人ABO血型反定型用紅細胞試劑(A1、B、O紅細胞；上海血液生物醫藥有限責任公司)、抗體篩選紅細胞試劑(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號O型紅細胞；上海血液生物醫藥有限責任公司)。血型鑒定和不規則抗體篩查質控品(北京金豪制藥股份有限公司)。

1.4方法 強生全自動血型分析儀器，其采用微柱玻璃珠抗原抗體凝集法；達亞美全自動血型分析儀器，其采用微柱凝膠抗原抗體凝集法；伽利略全自動血型分析儀器，其采用微板抗原抗體凝集法。首先使用一種全自動血型分析儀器進行檢測，如果鑒定血型不符合正常格局，篩查不規則抗體呈現非陰性結果，然后應用其他2種全自動血型分析儀器進行檢測，對比其結果，最后確認試驗通過試管抗原抗體凝集法結合顯微鏡觀察和分子生物學方法。通過3種全自動血型分析儀器專業工程師培訓，科室人員熟練掌握操作技能和注意事項，嚴格執行強生全自動血型儀器操作手冊、達亞美全自動血型儀器操作手冊、伽利略(NEO)全自動血型儀器操作手冊。由于每種全自動血型儀器都有配套試劑并以每人份計算成本，所以使用不同試劑。放置伽利略原裝配套抗A抗B血型定型試劑(伽利略)、抗D(IgM+IgG)血型定型試劑(伽利略)、人ABO血型反定型用紅細胞試劑、NOVACLONE 質控對照試劑、微孔板到儀器內；放置強生抗人球蛋白卡、ABO/Rh正反定型血型定型試劑卡、低離子強度鹽溶液、人ABO血型反定型用3%紅細胞試劑盒、人不規則抗體檢測用3%紅細胞試劑盒到儀器內；放置達亞美ABO血型正/反定型和RhD血型檢測卡、低離子抗人球蛋白卡、2號稀釋液、A清洗液、B清洗液、人ABO血型反定型用紅細胞試劑(上海)、抗體篩選紅細胞試劑(上海)到儀器內。取EDTA-K2抗凝劑全血，經過離心后，放置血標本置儀器試管架中，啟動檢測血型及不規則抗體篩查試驗任務，等待結果并審核上傳。

1.5統計學處理 采用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗，計算比較3種全自動血型儀器試驗差異，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.13種全自動血型分析系統性能參數比較 3種全自動血型分析系統性能參數具體差異見表1。

2.23種全自動血型分析系統鑒定血型試劑比較 強生、達亞美、伽利略3種全自動血型分析系統鑒定血型所使用的試劑卡分別為微柱玻璃珠卡(預置抗A抗B血清)、微柱凝膠卡(預置抗A抗B血清)、微孔板(配套抗A、抗B、抗D血清)；質控過程為血型卡Ctrl柱(強生和達亞美)和質控血清(陽性和陰性對照，伽利略)及血型鑒定和不規則抗體篩查質控品(北京金豪)，反定紅細胞依次為RhD陰性A1C、BC、OC(強生)、RhD陽性A1C、BC、OC(上海)、RhD陰性A1C、A2C、BC、OC(伽利略)。

2.33種全自動血型分析系統篩查不規則抗體試劑比較 強生、達亞美、伽利略3種全自動血型分析系統所使用不規則抗體篩查試劑卡分別為微柱玻璃珠卡(預置抗人球蛋白試劑)，微柱凝膠卡(預置低離子抗人球蛋白試劑)，包被紅細胞抗原的微孔板(捕獲法)；質控過程：強生及達亞美全自動血型分析系統使用血型鑒定和不規則抗體篩查質控品(北京金豪)，伽利略全自動血型分析系統則使用捕獲法-R質控血清(陽性和陰性；伽利略)；3種分析系統所使用不規則抗體篩查細胞表面所包被抗原具有較大差異，強生使用原廠配備細胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1、f、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、Xga、Lub、Dia、HLAⅠ；達亞美使用由上海血液生物醫藥公司提供的不規則抗體篩查細胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1；伽利略使用原廠配備細胞，所包被抗原為：D、C、c、E、e、Jka、Jkb、M、N、S、s、Fya、Lea、Leb、P1、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、Xga、Lub、Dia、Dib。

表1 3種全自動血型分析系統性能參數比較

2.43種全自動血型分析系統在鑒定血型和篩查不規則抗體中的應用比較 鑒定A2血型、A3血型、骨髓移植血型不相合轉變期血型中比較,差異均無統計學意義(χ2=0.230、0388、0.248，P>0.05)；篩查抗-M、抗-K、抗-P1、抗-Dia、抗-D抗體中比較，差異均無統計學意義(χ2=1.225、0.00、0.280、0.00、0.001，P>0.05)；3種全自動血型分析系統檢測直接抗人球蛋白試驗中比較，差異無統計學意義(χ2=0.463,P>0.05)。見表2。

表2 3種全自動血型分析系統在鑒定血型和篩查不規則抗體中的應用比較(n)

3 討 論

全自動血型分析儀器的引進，使輸血科工作人員從繁雜的常規手工操作中脫離，可將大量時間和精力放在疑難病例分析和輸血醫學相關知識學習中。手工操作易于出錯的方面主要有:患者信息核對、患者檢測項目、樣本處理、試管標注、試劑加樣、樣本加樣、結果判讀、結果記錄、結果錄入信息系統等環節[7]。如將全自動血型分析儀器與臨床用血閉環信息管理系統有機結合[8]，可實現血型鑒定和不規則抗體篩查試驗的自動化、標準化、信息化及數據溯源，可用于大批量標本的常規檢測，節省了大量的人力，消除了人為因素對檢測結果的影響[9-10]，可有效解決手工操作帶來的不利因素，但是在疑難標本處理和分析時還必須使用手工血清學方法進一步解決。

3種全自動血型分析系統性能參數比較中發現，在操作界面適用性和實用性方面強生更加易于操作，達亞美操作界面略微遜色，伽利略英文操作界面對初次接觸的操作者(英語語言障礙者)而言比較復雜；檢測速度(血型+不規則抗體篩查)由快到慢排序依次是伽利略、強生、達亞美，其檢測速度的快慢決定因素有加樣臂、離心機、孵育室、標本裝載量、配套試劑和卡(微板)量、操作系統等，初始檢測第一個樣本(血型+不規則抗體篩查)時所需時間大約20 min，但大批量檢測由于可連續加載標本和操作系統優化，所以速度會大大增加；3種全自動血型儀器對操作環境溫度濕度要求比較嚴格，室溫高于30 ℃ 3種儀器均報警停止運轉，必須給予高度重視，控制溫度；在濕度方面，北方的冬天室內比較干燥，濕度在20%～40%，由于濕度比較低極易造成鹽水的結晶，可能堵塞管路。

3種全自動血型分析系統鑒定血型試劑比較中可見，每種儀器使用的載體不同，強生應用微柱玻璃珠卡(預置抗A抗B血清)，儲存和運輸溫度2～25 ℃，溫度范圍比較寬泛易于執行。微柱玻璃珠卡為六孔，其中一孔是空白柱(Ctrl)，可初步判斷紅細胞是否被致敏，但試驗過程中需并行做血型質控品(北京)。配套反定紅細胞為RhD陰性的試劑，其優勢在于血清或血漿中存在抗-D抗體時，不影響正反定格局，最為明顯是在做血型鑒定和不規則抗體篩查質控品時，符合標準正反定格局。達亞美應用微柱凝膠卡(預置抗A抗B血清)，儲存和運輸溫度18～25 ℃，溫度范圍比較窄需嚴格控制溫度保證試劑卡質量。微柱凝膠卡和質控品做法均與強生一致，但不同的是達亞美使用的反定紅細胞(上海)是RhD陽性的紅細胞試劑，在血清或血漿中存在抗-D抗體時，鑒定血型可能存在正反定型不符的現象。伽利略(NEO)應用微孔板(配套抗A、抗B、抗D血清)，微孔板儲存和運輸溫度沒有限制，其具有配套質控品(陽性和陰性；伽利略)和反定紅細胞(RhD陰性)。

3種全自動血型分析系統不規則抗體篩查試劑比較中呈現，每種儀器使用的載體不同，強生應用微柱玻璃珠卡(預置抗人球蛋白試劑)和達亞美應用微柱凝膠卡(預置低離子抗人球蛋白試劑)，儲存和運輸溫度與血型卡一致，不規則抗體篩查試驗過程需并行加做質控品(北京金豪)；強生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號紅細胞試劑，存在獨有紅細胞抗原包括f、K、k、Kpb、Jsb、Fyb、 Xga、Lub、Dia、HLAⅠ(強生)等，達亞美Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號紅細胞(上海)具有共同抗原。伽利略應用包被紅細胞抗原的微孔板(捕獲法)，其儲存和運輸溫度1～30 ℃，具有配套質控品(陽性和陰性；伽利略)；微孔板包被紅細胞抗原試劑，其獨有的抗原包括K、k、Kpb、Jsb、Fyb、 Xga、Lub、Dia、Dib(伽利略)等。3種全自動血型分析系統不規則抗體篩查試劑紅細胞除具有共同抗原外，其強生和伽利略具有的抗原如K+抗原在新疆維吾爾族頻率是1.80%～3.16%[11-12]，Dia抗原幾乎是蒙古人種獨有的，而那些罕見的例子中，往往難以排除蒙古血統祖先的存在[13]。Fyb抗原在強生不規則抗體篩查紅細胞抗原格局譜中具有陰性和陽性特異性，在伽利略不規則抗體篩查紅細胞抗原格局譜中全部是陽性，在上海不規則抗體篩查紅細胞抗原格局譜是全陰性，這種Fyb抗原全陰和全陽不易與其他抗原區別。在檢測抗-K(2例)和抗-Dia(3例)時使用強生(進口抗篩試劑)和伽利略(進口抗篩試劑)儀器可檢出不規則抗體，而達亞美(國產抗篩試劑)未檢出不規則抗體(0例)，所以國產試劑和進口試劑聯合應用，檢測不規則抗體篩查試驗可提高抗體檢出率。

3種全自動血型分析系統在各試驗中的應用比較結果表明，強生、達亞美和伽利略的性能在案例中比較差異無統計學意義(P>0.05)，3種全自動血型分析儀是經長期臨床試驗驗證非常成熟的儀器，具有穩定的性能和可靠的試驗結果，但是具有各自特點。強生和達亞美采用微柱玻璃珠卡和微柱凝膠卡的模式，具有細胞篩的功能，對于混合凝集的樣本和弱凝集標本具有一定優勢，但微柱細胞篩對于異常蛋白造成凝集會給試驗造成一定困擾。伽利略采用微孔板(捕獲法)，檢測速度較快，檢測不規則抗體凝集強度較強，但對于IgM型抗體檢出率不高，可能與國外儀器設計理念有關，只檢出有意義的抗體，其抗體類型多為(IgG型)；對于血型鑒定凝集強度較弱的樣本，相較其他兩種儀器缺少微柱細胞篩的介質可能凝集強度會弱一些。3種全自動血型分析系統在檢測不規則抗體時，檢出率由多個因素決定，主要是抗原種類和性質(試劑)、抗體種類和性質及抗體含量(樣本)、儀器的特性等因素。

3種全自動血型分析系統給研究者的工作帶來諸多便利和高效率的同時，必須了解每種儀器的特點，趨利避害。更好的服務臨床、服務患者，確保臨床用血安全，保障醫療質量和醫療安全，最終贏在患者身上[8]。