血清鈣衛蛋白表達在類風濕性關節炎中的意義

陶 李，杜 明，王昱斌，李光迪

(蘭州大學第二醫院檢驗中心,甘肅蘭州 730000)

類風濕性關節炎(RA)是一種慢性炎癥性、自身免疫性疾病，目前病因不明。臨床多表現為手、足小關節的對稱性、侵襲性炎癥。免疫細胞的激活，炎癥介質的浸潤，在RA的發生發展中扮演至關重要的角色[1-2]。鈣衛蛋白是由S100A8和S100A9兩種鈣結合蛋白組成的異源二聚體。作為一種炎癥性蛋白質，其血清水平會在組織出現損傷或炎癥時升高[3-4]。有研究指出鈣衛蛋白在RA患者滑膜及滑液中高表達，其可能參與RA的致病過程[5-6]。本研究通過分析RA患者血清鈣衛蛋白水平，探討其與RA患者臨床疾病活動度及實驗室相關參數[C反應蛋白(CRP)、紅細胞沉降率(ESR)、抗環瓜氨酸肽(CCP)抗體、類風濕因子-IgM (RF-IgM)]之間的聯系，從而為RA患者臨床病情評估提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2018年5月在蘭州大學第二醫院風濕免疫科住院的診斷明確的70例RA患者(RA組)，診斷標準符合2010版美國風濕病學院/歐洲抗風濕病聯盟制定的RA診斷標準[7]。其中女61例，男9例，平均年齡(57.98±9.68)歲。同時根據DAS28評分標準，將RA組患者分為3組，分別為高疾病活動組(DAS28>5.1分),中疾病活動組(3.2分0.05)。兩組受試者無高血壓、心臟病、糖尿病等慢性系統性疾病，并排除合并其他自身免疫系統性疾病，且心、肝、腎等重要臟器功能均正常。本次研究獲得蘭州大學第二醫院倫理委員會批準，所有患者簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1臨床及實驗室資料的收集 通過蘭州大學第二醫院患者數據庫對70例RA患者的臨床及實驗室相關資料進行整理收集。包括：(1)患者一般情況;年齡、性別、疾病持續時間；(2)患者臨床信息：疼痛持續時間、晨僵持續時間、28腫脹和疼痛關節計數(28-SJC和28-TJC)、患者全身模擬評分(100-mm VAS)；(3)患者實驗室相關指標： CRP、ESR、RF-IgM、抗CCP抗體。計算DAS28評分[8]。

1.2.2鈣衛蛋白定量檢測 收取RA患者的血清樣本，-80 ℃保存直到使用時取出，避免反復凍融。采用人鈣衛蛋白酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(武漢華美)檢測血清鈣衛蛋白水平。首先每孔加標準品或待測樣本100 μL，覆蓋板貼，37 ℃孵育2 h。每孔加生物素抗體工作液100 μL，覆蓋新板貼，37 ℃孵育1 h。洗滌，每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100 μL，覆蓋新板貼，37 ℃孵育1 h。洗滌，每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色15 min。每孔加終止液50 μL，5 min內用酶標儀(北京朗普)在450 nm波長依次測量各孔的光密度(OD值)。

2 結 果

2.1RA患者及健康對照組血清鈣衛蛋白水平測定 RA患者平均血清鈣衛蛋白水平[(108.91±113.15)ng/mL]明顯高于健康對照組[(8.33±1.98)ng/mL],差異有統計學意義(P<0.05)],見圖1。低疾病活動組RA患者血清鈣衛蛋白水平[(19.89±14.29)ng/mL]與健康對照組之間比較差異無統計學意義(P=0.071)。中疾病活動組和高疾病活動組血清鈣衛蛋白水平分別為[(77.35±99.79)ng/mL]和[(216.39±85.83)ng/mL]，均顯著高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。高疾病活動組較中疾病活動組也有明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05),見圖2。

圖1 RA組與健康對照組血清衛蛋白表達

圖2 不同疾病活動度RA組患者鈣衛蛋白的表達

2.2RA患者血清鈣衛蛋白表達與臨床相關指標的相關性分析 RA患者血清鈣衛蛋白水平與28腫脹關節計數(r=0.652,P<0.05)，28疼痛關節計數(r=0.633,P<0.05)，DAS28評分(r=0.581,P<0.05)，RF-IgM(r=0.438,P<0.05)相關，而與CRP、ESR、抗-CCP抗體水平，疾病持續時間和年齡無相關性。見表1。

表1 RA患者血清鈣衛蛋白水平與其臨床和實驗室指標相關性

2.3以DAS28為因變量進行多元線性回歸分析 鈣衛蛋白、血沉與其呈正相關，而CRP、年齡、性別、病程與其不相關。即在矯正CRP、ESR、年齡、性別、疾病持續時間后，鈣衛蛋白與DAS28評分相關性(P<0.05)依然存在。并且結果還提示鈣衛蛋白對于DAS28評分的相關性要優于CRP與ESR。

3 討 論

RA是一種多病因引起的慢性、炎癥性自身免疫性疾病，它可以導致關節的破壞和功能的喪失[9]。對于RA患者來說，疾病活動性的監測在疾病的治療中尤為重要。使用傳統的實驗室指標如CRP和ESR反映RA疾病的活動性，因為它們只是間接反映了局部炎癥的程度[10]，特異度和靈敏度都不夠理想。因此，迫切需要尋找用于診斷和評估RA疾病活動的特異性血清學標志物。

鈣衛蛋白-屬于S100鈣結合蛋白家族。其由中性粒細胞、樹突狀細胞、激活的巨噬細胞、血管內皮細胞、血小板及成纖維細胞中表達分泌[11]。鈣衛蛋白約占中性粒細胞胞質蛋白的45%，單核細胞胞質蛋白的1%[12]。在細胞內，鈣衛蛋白通過以鈣依賴性方式促進微管蛋白聚合并穩定微管蛋白，從而促進吞噬細胞遷移。在細胞外主要是從活化的或壞死的中性粒細胞和單核/巨噬細胞中釋放，作為炎癥蛋白質參與多種自身免疫性疾病的致病過程[13]。并且鈣衛蛋白能直接反映RA患者滑膜和滑液的炎癥活動[14]。HURNAKOVA等[15]發現在反映RA患者炎癥方面，鈣衛蛋白比CRP更加敏感。CHOI等[16]研究認為監測RA患者血清中鈣衛蛋白的表達可以用來評估RA患者藥物的療效。另有研究者發現鈣衛蛋白與超聲滑膜炎評分相關，而且可以用于預測RA患者影像學的相關進展[17]。HAMMER等[18]的報道中顯示RA患者血清鈣衛蛋白與其抗-CCP抗體水平和RF-IgM水平相關。而最新研究表明RA患者血清鈣衛蛋白水平與其RF-IgM水平相關，但是與抗-CCP抗體水平沒有相關性[14]，不同研究結果的出現可能與他們選擇的患者接受了不同的藥物治療有關。具體結論還需要進一步研究。

本研究結果顯示，RA患者血清鈣衛蛋白的表達水平明顯高于健康人群，顯示出血清鈣衛蛋白可能參與RA的發生發展。為了驗證RA患者血清鈣衛蛋白水平是否與其臨床疾病活動程度和實驗室特異性指標相關聯，將70例RA患者根據DAS28評分分為3組。結果顯示，高疾病活動組患者具有更高的鈣衛蛋白水平。在相關性分析中，RA患者血清鈣衛蛋白水平與其28腫脹關節計數、28疼痛關節計數、DAS28評分、RF-IgM水平呈正相關。在以DAS28評分為因變量的多元線性回歸分析中，發現在矯正年齡、性別、疾病持續時間、CRP、CER后，鈣衛蛋白水平與DAS28評分依然具有良好的相關性。同時結果還提示，鈣衛蛋白與DAS28評分的相關性優于傳統實驗室指標CRP與ESR。這說明RA患者血清鈣衛蛋白水平與其臨床疾病活動性和實驗室特異性標志物之間存在密切關系。

由于本研究只進行了橫向的觀察性研究，同時樣本含量相對較小，還需要更大樣本的深入研究來進一步驗證相關結論。同時，還可對鈣衛蛋白作為RA患者診斷、預后評估、藥物療效預測及治療靶點的可能性進行探索。

綜上所述，血清鈣衛蛋白水平與RA實驗特異性指標和臨床疾病活動度之間存在密切關系，對評估和監測RA患者病情有重要的指導和參考意義。