EB病毒衣殼抗原抗體聯合轉鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷價值

張 云,庹 敏

(恩施土家族苗族自治州中心醫院：1.臨床檢驗中心；2.乳腺外科，湖北恩施 445000)

EB病毒的慢性感染是全世界肝臟相關的發病率和病死率的主要原因，并且易患肝纖維化和終末期肝臟并發癥[1]。其中，肝損傷是EB病毒誘發的較為常見肝臟疾病[2]。肝損傷的嚴重程度由EB病毒基因型和病毒組分調節[3]。但是，目前EB病毒誘導的肝損傷早期診斷困難[4]。EB病毒在感染后，患者血清中的EB病毒衣殼抗原抗體會顯著增加[5]。肝損傷后，患者血清的鐵代謝與健康人群顯著不同[6]。鐵對人類的生物功能和細胞生化過程至關重要。 鐵缺乏和鐵超負荷都會造成嚴重且可能致命的健康風險，并且鐵的穩態受到嚴格監管[7]。當該調節被破壞時，鐵在許多重要器官的實質細胞中沉積來介導對組織器官的損傷，包括心臟、胰腺和肝臟[8]。許多實驗和臨床研究表明，慢性鐵沉積促進肝損傷的進展并增加了患病風險[9]。其中，轉鐵蛋白受體是個重要的鐵穩態分子[10]。本文旨在探討EB病毒衣殼抗原抗體聯合轉鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年7月至2018年7月本院收治的EB病毒感染所致肝損傷患者70例(觀察組1)，其中男32例，女38例，平均年齡(51±17)歲；藥物性肝損傷患者70例(觀察組2)，其中男37例，女33例，平均年齡(47±14)歲。乙型肝炎病毒(HBV)肝損傷患者70例(觀察組3)，其中男29例，女41例，平均年齡(49±18)歲。納入肝損傷患者均經病理科明確診斷，且未經過相應的藥物治療。另選取同期來院體檢健康者70例(對照組)，其中男34例，女36例，平均年齡(53±12)歲。各組一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，可納入此次分析。受試者均知情同意且經過本院倫理委員會批準。

1.2納入標準 (1)藥物性肝損傷患者根據對應的病史包括使用相應的腫瘤藥、免疫制劑、抗結核藥，以及臨床表現、輔助檢查選擇確診患者；(2)EB病毒感染所致肝損傷患者根據病史、臨床表現及外周血EB病毒DNA篩查選擇確診患者；(3) HBV肝損傷患者根據病史、臨床表現及血清HBV抗原篩查選擇確診患者；(4)合并肝功能相關指標：總膽紅素(TBil)>0.019 μmmol/L和丙氨酸氨基轉移酶(ALT)>40 IU/L。

1.3排除標準 (1)藥物性肝損傷患者血清HBV抗原篩查陽性或外周血EB病毒DNA篩查陽性；(2)EB病毒感染所致肝損傷患者血清HBV抗原篩查陽性后有服用相應的腫瘤藥、免疫制劑、抗結核藥的病史；(3)HBV肝損傷患者外周血EB病毒DNA篩查陽性或有服用相應的腫瘤藥、免疫制劑、抗結核藥的病史；(4)合并肝功能相關指標：TBil≤0.019 μmmol/L和ALT≤40 IU/L。

1.4方法 采取觀察組1、觀察組2和對照組肘前靜脈血5 mL，進行酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。將包被緩沖液中的抗原(5～20 μg/mL)加入到微量滴定板中。在37 ℃孵育4 h，然后在4 ℃下儲存直至使用。用洗滌液洗滌3次，在洗滌之間等待10 min。通過完全填充管或所有孔，用0.5%牛血清清蛋白封閉1 h。用洗滌液清洗4次，等待10～15 min。向每個孔中加入100 μL用含0.1%吐溫的磷酸緩沖鹽溶液(PBS-TA)稀釋的抗血清，在室溫下孵育5 h或在冰箱中孵育過夜。如前所述洗滌平板，然后加入用0.1%吐溫的磷酸緩沖鹽溶液(PBS-T)稀釋的綴合物。在室溫下1.5 h或在37 ℃下1 h。洗滌4次，然后向每個孔中加入100 μL底物。加入100 μL濃度為2 mol/L的硫酸磷酸停止反應。讀取酶標儀450 nm數據。

1.5觀察指標 EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的表達量采用 ELISA檢測，使用上海研卉生物公司的病毒衣殼抗原抗體ELISA試劑盒(貨號：KA0963)和上海科順生物科技有限公司的轉鐵蛋白受體ELISA試劑盒(貨號：KS18359)進行相應蛋白表達量的分析。

2 結 果

2.1各組人員血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的表達量比較 觀察組1血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的表達量明顯高于觀察組2、觀察組3和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的表達量明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組3血清中EB病毒衣殼抗原抗體的表達量與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，但是其轉鐵蛋白受體的表達量明顯高于觀察組1、2和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組人員血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的表達量比較(ng/mL,±s)

注：與對照組比較，*P<0.05；與觀察組2比較，▲P<0.05；與觀察組3比較，#P<0.05

2.2觀察組1、2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和觀察組2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線，見圖1。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.86±0.04(95%CI：0.787 8～0.927 5)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為84%，特異度為75%；轉鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.79±0.04(95%CI：0.707 7～0.864 9)，以轉鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為83%，特異度為54%，見表2。

2.3觀察組1與對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線見圖2。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.77±0.04(95%CI：0.683 9～0.851 6)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為75%，特異度為84%；轉鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.94±0.02(95%CI：0.900 2～0.985 6)，以轉鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為84%，特異度為98%，見表3。

2.4觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的各指標比較 為了評估EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體在EB病毒感染所致肝損傷早期診斷的價值，繪制觀察組1和觀察組3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線見圖3。EB病毒衣殼抗原抗體的ROC曲線AUC為0.78±0.04(95%CI：0.701 0～0.865 9)，以EB病毒衣殼抗原抗體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為75%，特異度為87%；轉鐵蛋白受體的ROC曲線AUC為0.62±0.05(95%CI：0.527 6～0.717 7)，以轉鐵蛋白受體的陽性臨界值，其診斷靈敏度為47%，特異度為82%，見表4。

圖1 觀察組1、2血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線

圖2 觀察組1與對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線

圖3 觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的ROC曲線

檢測變量靈敏度(%)特異度(%)截斷值AUC(x±s)P95%CIEB病毒衣殼抗原抗體84750.910.86±0.04<0.050.787 8～0.927 5轉鐵蛋白受體83540.70.79±0.04<0.050.707 7～0.864 9

表3 觀察組1和對照組血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體各指標比較

表4 觀察組1、3血清中EB病毒衣殼抗原抗體和轉鐵蛋白受體的各指標比較

3 討 論

EB病毒是慢性肝炎的最主要原因之一[11]。由EB病毒感染引起的肝損傷影響許多細胞過程，例如細胞信號傳導、細胞凋亡、轉錄、DNA修復等[3]。這種擾動的后果導致膽汁分泌、糖異生、糖酵解，以及解毒和碳水化合物、蛋白質、脂肪和營養素平衡的代謝的改變[3]。其中鐵代謝尤為關鍵[12]。肝臟是鐵的主要儲存器官。 大約三分之一的身體總鐵沉積在肝細胞，竇狀間充質細胞和網狀內皮細胞中。肝臟在回收鐵中也起著重要作用。肝損傷和功能障礙可以干擾鐵的穩態[13]。肝臟中過量的鐵沉積會通過引發肝細胞壞死、炎癥、纖維化甚至癌癥而導致進一步的損傷[14-17]。本文研究發現，代謝中的關鍵蛋白分子轉鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體在觀察組1血清中的表達量明顯高于對照組和觀察組2,但低于觀察組3，差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組1和對照組中轉鐵蛋白受體的AUC為0.94±0.02，靈敏度和特異度分別為98%和82%，顯示轉鐵蛋白受體在甄別EB病毒感染所致肝損傷患者和健康人群具有較高的診斷效能。EB病毒衣殼抗原抗體的靈敏度和特異度較轉鐵蛋白受體低，這可能是因為90%的健康人群存在皰疹病毒潛伏[18]，而降低了靈敏度和特異度。這些提示轉鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體可成為EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷的潛在標志物。

DELIMA等[19]在小鼠模型中發現血色素沉著病蛋白或轉鐵蛋白受體2的突變通過阻止肝臟鐵調節激素的產生而導致遺傳性血色素沉著癥并最終導致肝損傷。與此同時，CHITAMBAR等[20]發現EB病毒刺激的B淋巴細胞增殖和免疫球蛋白產生會被轉鐵蛋白受體抑制。EB病毒感染所致肝損傷可能會誘導機體產生大量的轉鐵蛋白受體。這可能是機體一種針對EB病毒的免疫反應，但是隨著轉鐵蛋白受體的增多，轉鐵蛋白受體的數量是一定的，造成了大量轉帖蛋白沉積，最終引發了肝損傷。

藥物性肝損傷是肝損傷的另一分類,藥物誘導的肝損傷主要因為市場上用于治療各種疾病的化合物的數量不斷增加及草藥的日益普及，包括對乙酰氨基酚[21-22]。本研究發現轉鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體在觀察組1、2之間比較差異有統計學意義(P<0.05)。觀察組1、2中EB病毒衣殼抗原抗體的AUC為0.86±0.04，靈敏度和特異度分別為84%和75%，顯示轉鐵蛋白受體在甄別EB病毒感染所致肝損傷患和藥物性肝損傷患者具有較高的診斷效能。轉鐵蛋白受體的靈敏度和特異度較EB病毒衣殼抗原抗體低，這可能是藥物性肝損傷患者的鐵代謝系統也存在一定的紊亂[23]。江智龍等[23]的研究結果指出在甄別EB病毒感染所致肝損傷患和藥物性肝損傷患者可再聯合血清鐵、血清鐵蛋白等指標。這些提示轉鐵蛋白受體和EB病毒衣殼抗原抗體可成為EB病毒感染所致肝損傷的早期診斷的潛在標志物。

在HBV相關的肝病中，鐵代謝的數據及其臨床意義相對較少[24]。 BLUMBERG等[25]在1981年首次描述了鐵水平變化與乙型肝炎感染之間的關聯性。報道指出33例持續性HBV攜帶者的血清鐵水平明顯高于34例清除病毒感染的患者，暗示高水平的血清鐵可能與慢性HBV感染的存在有關。然而卻沒有報告血清鐵蛋白或轉鐵蛋白受體水平，或總鐵結合能力。而本研究中，HBV肝損傷患者的轉鐵蛋白受體水平明顯高于EB病毒所致肝損傷患者，藥物性肝損傷患者和健康人群。相應地，HBV肝損傷患者血清中鐵蛋白水平可能與健康人群有所差別。轉鐵蛋白受體在血清中的作用又與轉鐵蛋白受體相關[10]，故血清中轉鐵蛋白受體水平的升高可能與轉鐵蛋白受體結構和蛋白水平有關，這需要進一步研究驗證。

4 結 論

本研究發現EB病毒衣殼抗原抗體聯合轉鐵蛋白受體可作為病毒感染所致肝損傷早期診斷的潛在標志物。