白芨組織快繁技術(shù)研究進(jìn)展

何博聆 鄭茜 陳瑞 袁云香

摘要：白芨（Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.）為蘭科（Orchidaceae）白芨屬（BletillaReichb.f.）多年生草本植物，以塊狀假鱗莖入藥，且花為紫紅色，具有極高的藥用和觀賞價值。近年來白芨的組織快繁技術(shù)迅速發(fā)展，并成為白芨大規(guī)模種植的主要手段。本文從白芨組培的外植體選擇、原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)及煉苗移栽等技術(shù)等方面進(jìn)行了論述。

關(guān)鍵詞：白芨;組織培養(yǎng);快繁技術(shù)

基金項(xiàng)目：渭南師范學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目（JG201708）;陜西省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（18JS036）

中圖分類號：$567.239 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI編號：10.14025/i.cnki.jlny.2019.04.014

白芨（學(xué)名：Bletilla striata）又名連及草、朱蘭等，植株高18～60cm。陸生多年生草本植物，花期4～5月，果期10月，主要分布在我國華東、西南、陜西、甘肅等省區(qū)，以及日本、緬甸北部。白芨已被列為重點(diǎn)保護(hù)的野生藥用植物之一，白芨有廣泛的藥用價值，主要作用是收斂止血，消腫生肌。白芨傳統(tǒng)栽培主要靠分株繁殖，但分株繁殖周期長，繁殖效率也很低，很難滿足大量栽培的需要。組織培養(yǎng)技術(shù)能夠快速繁殖大量種苗，白芨組織快繁技術(shù)發(fā)展迅速，使之成為白芨大規(guī)模繁殖的重要手段，主要是通過在不同的培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌播種，種子萌發(fā)后用組織培養(yǎng)方法進(jìn)行無性系繁殖，實(shí)現(xiàn)白芨有效的快速擴(kuò)繁與種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。

1外植體的選擇

1.1白芨種子作為外植體的組織培養(yǎng)

白芨的蒴果含有大量的種子，同時蒴果的消毒較為簡單快捷，因此不易被污染，以白芨成熟蒴果為外植體，萌發(fā)率高、種苗生長迅速，所以大部分研究者均用種子建立了白芨植株的再生體系。張豆豆Ⅲ等人研究發(fā)現(xiàn)，在白芨種子的萌發(fā)和芽的分化中6一BA起到促進(jìn)作用，添加2，4-D對促進(jìn)白芨幼苗生長過程中愈傷組織的形成有重要的作用。毛鑫閉等人研究發(fā)現(xiàn)白芨種子在培養(yǎng)基6-BAl。6mg/L+NAA0.3mg/L中萌發(fā)率最高，達(dá)到98%。李芳以白芨蒴果為外植體，首次提出多株移栽對提高成活率和新生小芽具重要作用，完整建立了穩(wěn)定而高效的白芨組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)體系。

1.2假鱗莖作為外植體的組織培養(yǎng)

白芨的初生假鱗莖通常為圓球形，當(dāng)生長到一定程度才形成V形塊狀假鱗莖。黃作喜嗍等人發(fā)現(xiàn)帶泥的白芨假鱗莖不用清洗，在陽光照射下迅速曬干后就能進(jìn)行儲藏處理。付穎聰?shù)热搜芯堪l(fā)現(xiàn)，6-BA溶液的濃度是影響誘導(dǎo)率的主要因素，2，4-D濃度次之。NAA對愈傷組織的誘導(dǎo)具有抑制作用。李慧敏等人通發(fā)現(xiàn)白芨假鱗莖誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+6-BAl.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+香蕉泥40.0g/L+土豆泥40.0g/L+花寶四號1.0g/L+活性炭1.0g/L+蔗糖30.0g/L。

1.3側(cè)芽作為外植體的組織培養(yǎng)

在實(shí)驗(yàn)研究中以側(cè)芽為外植體的培養(yǎng)效果較塊莖好。石云平等人發(fā)現(xiàn)以白芨側(cè)芽為外植體，使用0.2%升汞滅菌8rain成活率最高且污染率最低。余朝秀等人發(fā)現(xiàn)MS+6-BAl.0-3.0mg/L+NAA0.2mg/L可誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā)增殖芽。

1.4幼根作為外植體的組織培養(yǎng)

田英翠等人以白芨幼根為材料，添加不同濃度水平的生長調(diào)節(jié)劑，成功誘導(dǎo)出原球莖并進(jìn)行分化培養(yǎng)。

2原球莖的誘導(dǎo)

白芨種子萌發(fā)時先形成原球莖，原球莖分割可采用縱切法、橫切法和掰開法三種分割法。管常東等人實(shí)驗(yàn)研究表明，掰開法最有利于原球莖的增殖，橫切法易導(dǎo)致原球莖褐變而死亡。成曉靜等人發(fā)現(xiàn)促進(jìn)白芨原球莖誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基組為MS+馬鈴薯汁+NAA 0.1rag/L+6-BA 1.0mg/L。

3從生芽增殖培養(yǎng)

吳傳恩舊等人發(fā)現(xiàn)叢生芽在MS+0.4mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+20g/L蔗糖+2glL活性炭的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，叢生芽的長勢良好，增殖效果最佳。楊舒婷認(rèn)為在培養(yǎng)基中添加TDZ激素誘導(dǎo)的叢生芽數(shù)量大。高晗等人研究證明1/2MS+1.0mg/LNAA+I.0mg/L GA3+0.2%AC+3%蔗糖+0.7%瓊脂為白芨叢生芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。

4生根誘導(dǎo)

葉靜等人研究發(fā)現(xiàn)，6-BA質(zhì)量濃度為1.0mg/L，NAA為0.1 5mg/L時誘導(dǎo)率最高，叢生芽長勢較好，相較于其他不同濃度的培養(yǎng)基中的苗健壯，顏色鮮艷。趙漫麗等人研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中添加香蕉泥可以促進(jìn)白芨苗的生根，提高了移栽的成活率。席剛俊等人實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)白芨的壯苗生根最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.5mg/L+香蕉泥75g/L+椰子汁100mL/L+蔗糖10g/L+活性炭2g/L+瓊脂6g/L，pH值為5.8。

5煉苗與移栽

鄒娜11日等人實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，白芨壯苗生根培養(yǎng)后30d將無菌苗移栽到蛭石中成活率最高可達(dá)96%。曹婧n9等人實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)白芨組培苗在移栽時隨著開瓶鍛煉時間的延長，成活率明顯增加，當(dāng)煉苗6d時成活率高達(dá)96.3%，但當(dāng)煉苗到12d時成活率下降。姜麗瓊等人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在15°C～28°C是白芨的最佳煉苗溫度。