涂片檢查在細菌培養中的應用

李曉娟

（南陽胸科醫院，河南 南陽 473000）

在微生物檢驗中，由于培養需要時間長，而涂片簡單快速，因此形態學檢查就成為臨床快速獲得病原學依據的方法之一。通過涂片可以了解標本的合格性，炎癥類型（感染性、變態反應性等）以及導致感染的微生物種類和感染類型（單一感染還是混合感染），分離菌的宿主反應性（感染？定植？正常菌群？）。并且可以通過形態及時為臨床提供治療依據，達到抗生素的合理利用，減少耐藥菌株的產生。細菌形態學是一種快速輔助診斷方法，在感染性疾病中的價值勿容置疑[1]。

表1 2016年1月至2017年7月標本

1 材料與方法

1.1 一般資料：收集2016年1月至2017年7月胸科醫院培養標本，標本類型包括痰液、尿液、切口分泌物、胸腹水、膿液、膽汁、腦脊液共996例。

1.2 主要試劑及儀器：革蘭染液，瑞氏姬姆薩染液，抗酸染液（珠海貝索公司），離心機（江蘇江堰），顯微鏡（日本OLYMPUS）。

1.3 取材及制片：不同部位采取不同采集方法。參照《實用臨床微生物檢驗與圖譜》中，臨床常見標本的采集運送及處理章節。

痰標本采用自然咳痰法、支氣管鏡采集法。尿液采用清潔中段尿采集法、導尿法。切口分泌物：首先用無菌生理清洗病灶表面的腐生菌，用無菌棉拭子先蘸少許無菌生理鹽水，然后采取深部靠近正常組織部位的分泌物，置于裝有1 mL無菌生理鹽水的無菌拭子中。膽汁，胸腹水采用穿刺方法獲取標本。非膿性的胸腹水采取增菌培養。

1.4 涂片染色及鏡檢：痰液標本用無菌生理鹽水洗滌后接種涂片染色，分別進行革蘭染色，瑞氏姬姆染色，抗酸染色；尿標本，切口分泌物，膽汁標本接種后剩余標本離心（3000 r/min 離心10 min），取沉渣涂片，進行革蘭染色；膿性標本直接涂片革蘭染色。各種染色方法參照說明書步驟操作。

2 涂片鏡檢結果

996例標本中，通過涂片發現不合格標本207例，不合格標本中痰占大多數。合格標本進行細菌培養，其中涂片和培養結果一致的標本數為742例，二者結果不一致的標本數47例。不一致結果中多見的是膿液。主要原因可能是不做厭氧培養導致厭氧菌不生長。見表1。

3 討 論

涂片檢查在細菌培養中占據著重要位置，沒有涂片的細菌培養就如同盲人摸象。但是在日常微生物工作中，許多醫院脫離涂片只看重培養，更有甚者連涂片也不做只做培養。最終導致的結果就是非致病菌當成致病菌處理，誤導臨床，增加患者負擔，導致耐藥菌株的產生，同時患者又得不到及時準確的治療。

對于痰標本，涂片可幫助篩查不合格標本，對于不合格標本不用進行培養。對于合格的標本先接種再涂片，分別進行革蘭染，瑞氏-姬姆薩染色，抗酸染色。如涂片未發現病原體，看到大量淋巴細胞應考慮為病毒感染等[2]。抗酸染色發現抗酸性桿菌，提示臨床有可能是結核。涂片發現革蘭陽性雙球菌，矛尖相對，有莢膜，直接報告臨床疑為肺炎鏈球菌感染.如果涂片見大量炎癥細胞，革蘭陰性細長桿菌（位于胞內），菌體外裹一層厚重的黏液質，疑似黏液性銅綠，及時通知臨床經驗用藥的同時加用大環內酯類藥物[3-4]。因為大環內酯類抗生素對細菌生物被膜有抑制作用，與其他體外藥敏試驗敏感的抗生素合用，對治療產生生物被膜細菌所致的慢性感染有較好的療效。如涂片并未發現它與多形核粒細胞（PMN）吞噬或伴行，應判斷為定植，不做處理。

膿液標本，對于未開展厭氧培養的醫院，涂片就顯得尤為重要，因為正常情況下，封閉囊腔液多是需氧厭氧混和感染，單純的需氧培養是發現不了致病菌的。但是我們可通過涂片提示臨床是否有厭氧菌感染。如涂片革蘭染色見到革蘭陽性桿菌，直角分枝，成對，Y、V、T形短鏈或成簇，提示為放線菌感染。

尿液標本，如涂片見到3種菌并且有真菌孢子，首先考慮尿液來自尿袋，很多護士為了取樣方便，直接從尿袋留取標本。

膽汁標本，首先涂片革蘭染色觀察標本的合格性，合格的標本用來做培養，不合格的直接棄之。如鏡下觀察有無蛋白凝塊，有無白細胞裸核，看到這此成分，說明是一份合格標本，可以用來做培養并將涂片所見細菌依據形態第一時間通知臨床，有助于臨床經驗用藥。如涂片超過三種以上細菌，而且形態各異，比例上又接近糞便，那么提示這份標本很可能被腸內容物污染，沒必要繼續做下去，因為這樣培養的結果是毫無意義的。

再者原始標本涂片所得到的信息要及時和臨床溝通，因為人體體表與外界相通的器管很多。如泌尿生殖道、腸道、呼吸道等都存在著種類及數量不同的細菌，它們的存在與正常人體維持著正常的微生態環境。在日常的工作中我們要根據標本部位，涂片結果，培養結果綜合分析才能得出正確結論。不結合涂片只看重培養，會使我們失去方向導致錯誤結果，還會導致人體正常微生態環境破壞，對患者反而不利，并且還可能造成肝腎等器管的損傷。對于培養出來的是否是病原菌，同樣應該結合直接涂片分析。

由于形態學的特殊性，在微生物檢驗中它是最難的，沒有任何捷徑可走的，只能要求每一位從業者熟練基本功，多學，多看，及時總結經驗。才能及時準確報告結果，為臨床提供診斷依據。

綜上所述，涂片在細菌培養中有著舉足輕重的作用，沒有涂片的培養是不可靠的，只有嚴格遵守涂片培養兩結合的方法，才能把微生物檢驗做好做強。