女貞子多糖抑制MDA緩解CCl4致小鼠肝損傷

朱 琪， 梁世岳， 王 倩， 王建國， 周志江， 李海花

（1.天津大學化工學院，天津津南300350；2.天津市畜牧獸醫研究所，天津西青300381；

3.天津師范大學生命科學學院，天津西青300387；4.天津農學院動物科學與動物醫學學院，天津西青300384）

女貞子多糖（LLPS）是女貞子的重要活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗癌和調節免疫等多重功效（Yin等，2017）。由四氯化碳（CCl4）誘導的小鼠化學性肝損傷模型主要損害肝實質組織，其機理十分復雜，與脂質過氧化反應相關 （Jiang等，2018）。本試驗研究女貞子多糖對小鼠生長性能、肝損傷后肝臟指數、肝功能和脂質過氧化產物丙二醛（MDA）的影響，旨在探明其保肝的作用機制，為臨床應用奠定基礎。

1 材料方法

1.1 試驗動物 試驗動物購自北京實驗動物中心，清潔級昆明雄性小鼠36只，體重18 g左右，天津市畜牧獸醫研究所動物房飼養，預飼期1周。飼養管理嚴格按照《實驗動物管理條例》執行。

1.2 藥品的準備

1.2.1 女貞子多糖的制備 根據水提純的原理進行女貞子多糖的提取，稱取40 g的女貞子粉放于320 mL的蒸餾水中，100℃加熱回流2 h，用真空泵抽濾，把分離出的水溶液用旋轉蒸發儀脫除水分濃縮至濃度約3 g/mL時停止，此時加入一定量乙醇（約67 mL），讓乙醇的體積分數占70%，再用玻璃棒進行攪拌15 min，后靜置沉淀6 h。真空泵抽濾析出沉淀物，抽濾出得到的濾餅為女貞子多糖，最后放于烘箱中烘干，稱重得到4.1 g女貞子多糖，得糖率為10.25%。

1.2.2 四氯化碳注射液的制備 0.1 mL的CCl4添加9.9 mL的液體石蠟混勻，制得1%的CCl4注射液。

1.3 試驗分組與造模 攻毒前：清潔型試驗昆明小白鼠36只，均雄性，隨機分為6組，每組6只，即空白對照組（正常飲水），模型組（CCl4肝損傷），陽性藥物組（飲水添加0.25%肝太樂0.1g/片），女貞子高、中、低劑量組（飲水中添加0.2%、0.1%和0.05%的女貞子多糖）。自由飲水采食，每天記錄體重、飲水量和采食量。

攻毒后：在第14、16、19天和第21天對除對照組外的每一只小白鼠皮下注射1%的CCl4液體石蠟溶液10 mL/kg。末次攻毒后全部小鼠禁食12 h后處死解剖分離肝臟稱重，按當日體重計算肝臟指數（mg/g），用全自動生化分析儀測定血清生化指標及MDA。

1.4 統計分析 試驗數據用Excel軟件錄入，然后用SPSS 20.0軟件進行數據的單因素方差分析（one-way ANOVA），結果用“平均值±標準差”表示，P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。

2 結果

2.1 女貞子多糖對小鼠生長性能的影響 在飲用女貞子多糖試驗第14天，攻毒前對各組小鼠稱重，記錄飲水量和采食量，所得結果見表1。由此可知，添加女貞子多糖中劑量組料重比最低，但與各組比較差異不顯著（P＞0.05）。

表1 女貞子多糖對小鼠生長性能的影響

2.2 女貞子多糖對小鼠肝臟指數的影響 由表2可知，模型組小鼠肝臟重量與對照組比較差異極顯著（P＜0.01），與其余各組比較差異顯著（P＜0.05）。從肝臟指數來看，模型組極顯著高于對照組（P＜0.01），其他各組均能不同程度的對抗肝臟指數的升高，且除低劑量組與模型組比較差異顯著（P＜0.05）外，其余各組與模型組比較均差異極顯著（P＜0.01）。

表2 女貞子多糖對小鼠肝臟指數的影響

2.3 女貞子多糖對小鼠肝臟功能（血清生化指標）的影響 由表3可知，模型組的血清總蛋白水平比對照組顯著降低（P＜0.05），其余各組均有明顯減輕這種降低的趨勢（P＜0.05），但各組間差異不顯著（P＞0.05）。血清谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的變化趨勢基本一致，各藥物組均有緩解轉氨酶升高的作用，且差異顯著（P＜0.05），從AST/ALT的值來看，模型組顯著低于對照組（P＜0.05），各藥物組除了女貞子高劑量組與模型組差異不顯著（P＞0.05），其余各藥物組差異均顯著高于模型組（P＜0.05）。

2.4 女貞子多糖對小鼠肝臟和血清MDA含量的影響 由表4可知，各組小鼠肝臟和血清中的MDA變化趨勢基本一致，模型組極顯著高于對照組（P＜0.01），各藥物組除肝臟女貞子多糖低劑量組顯著低于模型組（P＜0.05），各組均極顯著低于模型組（P＜0.01）。

表3 女貞子多糖對小鼠肝功能指標的影響

表4 女貞子多糖對小鼠肝臟和血清MDA含量的影響

3 討論

女貞子多糖作為畜禽補充劑，具有藥用和營養雙重功效，其豐富的營養成分可促進畜禽的生長發育，降低腹瀉率，提高平均日增重，同時調節脂類代謝，增強其生產性能（黃新蘋等，2016）。本研究發現，在飲水中添加女貞子多糖對小鼠的生長性能無顯著影響，說明女貞子多糖對小鼠生長并無毒副作用，飲水安全。研究表明，日糧中添加不同水平女貞子萃取物有提高斷奶仔豬日增重、采食量、降低料重比的趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）（張超等，2012）。這與本研究的結果相一致。肝臟指數是反映肝臟功能的重要指標之一，CCl4所致的小鼠肝損傷模型可出現肝組織充血、水腫，脂肪變性，肝指數上升等一系列的病變（呂娟濤等，2010）。本研究發現，女貞子多糖各組均可顯著緩解模型組所致的肝指數升高，且與肝太樂組作用相一致，這說明女貞子多糖的保肝效果和肝太樂近似。當肝臟發生病變時，肝細胞合成蛋白質的功能減退，血漿中蛋白質即會發生質和量的變化。臨床上用各種方法檢測血漿蛋白的含量來協助診斷肝臟疾患，并作為療效觀察，預后判斷的指標。本研究發現，模型組小鼠血清總蛋白比對照組顯著降低，中藥各組均有緩解這種降低的作用，且效果與肝太樂相當。

ALT與AST主要分布在肝臟的肝細胞內，如果肝細胞壞死，ALT和AST含量就會升高，其升高的程度與肝細胞受損的程度相一致，因此是目前最常用的肝功能指標（Zhang等，2018）。本研究結果顯示，女貞子多糖可以緩解肝損傷所致的ALT和AST升高，但效果不如肝太樂。

丙二醛為肝臟脂質過氧化的產物，CCl4所致的肝損傷機制與自由基密切相關，生物體內，自由基作用于脂質發生過氧化反應，氧化終產物為丙二醛，會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合，且具有細胞毒性，丙二醛含量的多少說明肝臟細胞膜受到傷害的程度（Wang等，2018）。由結果可知，女貞子多糖可以顯著降低CCl4所致的肝臟和血清中MDA含量，通過抑制脂質過氧化作用起到保肝的效果，這與特女貞苷保肝護肝的機理相一致（胡冬梅等，2016）。

4 結論

飲水中添加不同劑量的女貞子多糖對小鼠生長性能無影響，但可以緩解CCl4所致小鼠的肝臟損傷，這可能與調控肝臟指數、肝功能指標和肝臟血清中MDA水平有關。