益腎化痰法對乳腺癌骨轉移患者血液PTHrP、FGF-β、BSP水平的影響及作用機制分析

王俊濤，尹怡，李曉婷，馬征，馬金玉，郅中怡，楊明明，楊冠森，王祥麒

(河南中醫藥大學第三附屬醫院 腫瘤科一病區，河南 鄭州 450000)

乳腺癌成為威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，乳腺癌細胞喪失正常細胞的特征，細胞間的連接較為松散，極易脫落而借助淋巴液或血液轉移，形成轉移灶，對患者生命威脅較大[1]。骨轉移為乳腺癌常見的轉移類型，中醫認為乳腺癌骨轉移的發生與患者患病日久，正氣不足，腎經耗損，骨髓空虛，邪毒借此侵入骨體而發病，故臨床治療應以補腎益氣散結為主。益腎化痰法以補助正氣，充養腎精，散結，化痰，消瘀為主要功效，與乳腺癌骨轉移之病因病機相對應[2]。筆者在我院乳腺癌骨轉移患者中應用益腎化痰方，發現該方法應用后患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平得到改善，現將本次研究報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

以河南中醫藥大學第三附屬醫院收治的乳腺癌骨轉移患者90例為研究對象，年齡范圍(36～65)歲，平均年齡(48.31±10.14)歲。診斷標準：依照中國抗癌協會乳腺癌專業委員會制定的[3]《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2017年版)》中乳腺癌的診斷標準為標準，行X平片、CT、MRI、PET或骨穿刺活檢等手段診斷骨轉移。納入標準：患者符合乳腺癌骨轉移診斷標準；患者未使用研究治療方案外藥物；患者無過敏與嚴重不良反應；患者不存在心功能衰竭、腎功能衰竭、肝功能不全等情況。剔除標準：患者隨意使用藥物；患者出現嚴重過敏與不良反應被迫終止干預。

1.2 分組與干預方法

1.2.1 分組方法

將2014年12月—2017年12月收治的乳腺癌骨轉移患者90例為研究對象，采取數字表隨機分組法分為觀察組與對照組各45例，對照組實施常規乳腺癌骨轉移治療方法，觀察組以對照組為基礎使用益腎化痰方。其中觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.07±11.01)歲;疾病分期：III期18例，IV期25例;手術類型：全乳房切除術34例,保乳手術11例。觀察組年齡范圍(36～64)歲，平均年齡(50.13±10.99)歲;疾病分期：III期19例，IV期24例;手術類型：全乳房切除術33例，保乳手術12例。兩組一般資料無明顯差異，P>0.05，具有對比價值。

1.2.2 治療方法

兩組均在影像學檢查結果引導下行乳腺癌手術，對照組采取常規乳腺癌術后治療方法：放射性療法、化學療法、內分泌療法、生物靶向治療聯合或單獨療法，骨轉移使用唑來膦酸、雙膦酸鹽等骨轉移對抗藥物，癌痛嚴重者依據情況選擇輔佐劑、非麻醉性止痛藥與麻醉性止痛藥[4]。放化療期間出現胃腸道不良反應者使用奧美拉唑、碳酸氫鈉、六君子湯等胃動力與胃黏膜保護類藥物。

觀察組在常規治療基礎上使用益腎化痰法，自擬益腎化痰方進行治療：益腎化痰方：熟地黃30 g,杜仲15 g,懷牛膝15 g,桑寄生9 g,白芍15 g,山慈菇12 g,白芥子15 g,生牡蠣30 g,浙貝母15 g,皂角刺12 g,片姜黃15 g,蘇木12 g。將生藥用5倍體積量水浸泡2 h,煮沸30 min,過濾分離藥液及藥渣,藥渣再加入3倍體積量水煎煮20 min,過濾后留藥液，合并兩次藥液共500 mL左右。250 mL/次，2次/d，于早上9點與晚上9點按時服用。

兩組均以2周為1療程，干預4療程后進行治療效果評估。

1.3 評價指標

1.3.1 甲狀旁腺相關肽(PTHrP)表達檢測

采用常規ABC法進行PTHrP的免疫組織化學染色[5]。PTHrP的陽性細胞染色為棕黃或棕褐色,定位于胞質,連續計數>10個高倍視野,每個高倍視野計數100個腺上皮細胞,計算陽性細胞的平均百分率，陽性細胞數<25%為陰性,25%～80%為弱陽性(+),>80%為強陽性(++)。

1.3.2 纖維細胞生長因子(FGF-β)檢測

FGF-β染色[6]陽性者在細胞漿有棕黃色顆粒沉著, 部分細胞同時存在核染色。為精確判斷蛋白的表達程度及減少假陽性率, 制定免疫組化半定量標準: 每張切片隨機觀察10個高倍視野,每個視野計數100個癌細胞,根據細胞漿的著色程度及著色細胞的百分率進行評分并計算陽性系數:基本不著色者為0分,著色淡者為1分,著色適中者為2分,著色深者為3分。著色細胞占計數細胞百分率≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,≥51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細胞百分率得分各自相乘,即為陽性系數。陽性系數0、1分為陰性(-),2、3分為弱陽性(+),4～6分為陽性(++)，7～9分為強陽性(+++)。

1.3.3 骨唾液酸蛋白(BSP)檢測

參照文獻[7],采用免疫組織化學染色對組織標本處理: 固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。在光學顯微鏡下觀察，根據棕色反應的陽性強度及陽性細胞數判斷結果。BSP每張切片觀察5個高倍視野，陽性細胞染色為胞漿棕黃或棕褐色，計算陽性細胞比例。陽性細胞比例=陽性細胞個數/總細胞個數×100.00%。

1.3.4 不良反應

觀察兩組惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、皮疹、感染、放射性皮炎等不良反應發生情況，記錄例數，計算發生率。

1.4 統計學方法

使用SPSS19.0版本統計學軟件進行研究數據分析，以t值檢驗各組計量資料，χ2檢驗計數資料以，a=0.05為檢驗水準，P<0.05認為差異具有統計學方面意義。

2 結果

2.1 干預前后兩組患者PTHrP細胞陽性率對比

結果顯示，干預前兩組的PTHrP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(69.42±3.12)%低于對照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05，詳見表1。

表1 干預前后兩組患者PTHrP細胞陽性率對比(%)

2.2 干預前后兩組患者FGF-β細胞陽性指數對比

結果顯示，干預前兩組患者的FGF-β細胞陽性指數無明顯差異，P>0.05，干預后兩組的細胞陽性指數均下降，但觀察組的陽性指數(5.02±0.94)分低于對照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05，詳見表2。

表2 干預前后兩組患者FGF-β細胞陽性指數對比(分)

2.3 兩組干預前后BSP細胞陽性率對比

結果顯示，干預前兩組的BSP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(61.31±6.45)%低于對照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05，詳見表3。

表3 兩組干預前后BSP細胞陽性率對比(%)

2.4 兩組不良反應情況對比

結果顯示，觀察組患者的治療不良反應發生率低于對照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05，詳見表4。

表4 兩組不良反應情況對比

3 討論

乳腺癌骨轉移為常見乳腺癌轉移類型，當骨轉移發生時患者須承受巨大疼痛，臨床一般使用唑來膦酸、骨硬化蛋白抗體等骨轉移對抗藥物聯合常規乳腺癌療法方式治療[8-10]，近些年有學者提出中藥在骨轉移中的治療價值，方穎等在其研究[11]中提出補腎活血湯聯合唑來膦酸可促進乳腺癌骨轉移患者骨質恢復并降低骨性疼痛。筆者在我院乳腺癌骨轉移患者常規治療基礎上使用益腎化痰方，效果滿意。

中醫理論中認為腎主骨生髓，當骨骼出現改變時多為患者腎臟功能異常，而乳腺癌患者發病日久損耗正氣，進而腎臟功能受到影響，腎氣不足則骨髓空虛，為骨轉移創造條件。而益腎化痰方以熟地黃與杜仲為君藥，起到滋陰補血、填精益髓、補肝腎強筋骨的功效，桑寄生、懷牛膝與白芍為臣藥輔助君藥發揮強肝腎止痛之功，山慈菇、白芥子散結化痰，生牡蠣軟堅聯合浙貝母、皂角刺兩味佐藥共奏化痰消積之功，片姜黃活血止痛，蘇木引經為使藥。各藥合用可奏補益腎精、充盈骨髓、驅邪外出之效。西醫認為骨轉移與血液PTHrP、FGF-β、BSP水平密切相關，方藥中熟地黃可促進成骨細胞增殖與分化；杜仲總黃酮可優化骨細胞增殖能力，優化細胞抗氧化能力；懷牛膝甾體與皂苷成分可優化血清堿性磷酸酶、血清骨鈣素及Ca2+水平,降低血清P水平，優化血液黏度并對抗炎癥反應；白芍總苷可起到鎮痛作用；浙貝母中有效成分如貝母甲素、貝母乙素、貝母辛具有逆轉錄腫瘤細胞作用；皂角刺提取物可改善人體IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的表達水平，強化機體免疫力。

結果顯示，干預前兩組的PTHrP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(69.42±3.12)%低于對照組(77.53±4.01)%，兩組相比P<0.05；干預前兩組患者的FGF-β細胞陽性指數無明顯差異，P>0.05，干預后兩組的細胞陽性指數均下降，但觀察組的陽性指數(5.02±0.94)分低于對照組(6.80±0.82)分，兩組相比P<0.05；干預前兩組的BSP細胞陽性率無明顯差異，P>0.05，干預后兩組患者陽性率均降低，但觀察組陽性率(61.31±6.45)%低于對照組(70.40±6.10)%，兩組相比P<0.05；觀察組患者的治療不良反應發生率低于對照組(28.98% VS 53.33%)，兩組相比P<0.05。

綜上所述，乳腺癌骨轉移患者常規治療基礎上加用益腎化痰方能夠有效改善患者的血液PTHrP、FGF-β、BSP水平，對抗骨轉移癥狀，并降低不良反應發生率，其機制與益腎化痰方改善腎虛骨髓空虛及藥物有效成份可抑制骨破壞增加骨形成、對抗腫瘤細胞增殖并改善免疫功能有關。