血漿雙調蛋白水平在肝炎、肝硬化、肝癌患者中的變化及意義

韓少靜 李帆 張宏偉 李亞飛 閆華楠 郭永澤 董慧聰 秦佳麗

在慢性肝病進展為肝硬化甚至肝癌的過程中有多種細胞因子參與。其中表皮生長因子 (epidermal growth factor , EGF)和肝細胞的生長、再生及肝臟膠原纖維合成密切相關。已有研究發現，在慢性肝損傷中均有EGF異常表達。雙向調節蛋白 (amphiregulin ，AR)與EGF有較高的序列同源性，均是表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)通路上游配體，可以促進上皮細胞、成纖維細胞增殖,與肝臟膠原纖維合成有一定的相關性。本文通過檢測慢性肝病及肝癌患者血漿AR的表達水平，以探討其臨床意義。

材料和方法

一、標本來源及研究對象

研究對象選取2018年3月至2018年6月就診于河北工程大學附屬醫院符合2015年中華醫學會肝病學分會修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]及2017年《原發性肝癌診療規范》[2]中的診斷依據的慢性肝病及肝癌患者58例，及健康體檢者(血常規、生化正常，AFP陰性，無各型肝炎、肝硬化，無各大系統重大疾病史)11例作為對照組。均除外其他系統原發性疾病及其他部位腫瘤。其中，慢性肝炎患者12例，慢性肝炎后肝硬化30例，原發性肝癌患者16例。該研究得到河北工程大學附屬醫院倫理委員會批準，所有研究對象均自愿入組，并簽署知情同意書。

二、實驗方法

(一)所有患者均于清晨空腹抽取肘靜脈血2 mL，置于5%乙二胺四乙酸二鈉( 5%EDTA·K 2)抗凝管中,收集后30 min內以1 000×g離心15 min去除顆粒，取血漿樣本約1 mL，分裝置于-80℃的低溫冰箱中保存待測，以保證表皮生長因子家族成員的生物學活性，檢測前于室溫完全復溶后,嚴格按照說明書要求進行操作。

(二)其他臨床指標的檢測如：肝功能、血脂、血常規、凝血六項、腫瘤五項(或甲胎蛋白)、輸血前檢查(或乙肝、丙肝標志物)，均有河北工程大學附屬醫院采用全自動生化分析儀檢測完成。

三、統計學方法

結 果

(一)各組研究對象一般性資料

四組間男女構成比經卡方檢驗差異無統計學意義(P=0.619 )。對照組、慢性肝炎組、肝硬化組及肝癌組年齡分別為(58.00±9.95)，(51.67±14.59)，(57.90±13.04)，(59.94±9.48)，經方差分析，四組間年齡差異無統計學意義(P=0.337)。

(二)對照組、慢性肝炎組、肝硬化組、肝癌組血漿中AR濃度

(三)生化指標檢測

討 論

AR含有 84 個氨基酸的糖蛋白，是表皮生長因子家族成員之一，最早由 Shoyab 從人乳腺癌細胞中發現并分離出來，因其同時具有抑制癌細胞生長和促進成纖維細胞生長這兩種相反功能而得名。目前研究已對AR通過激活相應受體EGFR及下游多條信號通路在腫瘤增殖、凋亡、侵襲等過程起重要調控作用有了一定的認識[1]。EGFR在肝癌發生發展中起重要作用。研究表明正常肝細胞中EGFR呈陰性，在急慢性肝損傷時肝細胞組織中EGFR的上調，如在肝硬化和肝細胞癌組織中EGFR的過度表達和活化[2-5]。AR作為激活EGFR配體，除有其他配體相同的促肝細胞增殖效應外，還有不可被代償的作用[6，7]。Castillo等[8]證明了重組AR誘導EGFR依賴性細胞內信號的治療可以刺激肝癌細胞的增殖并抵抗TGF -β誘導的凋亡，還觀察到AR能夠通過激活EGFR刺激其自身在肝癌細胞中的基因表達，藥物抑制AR脫落或干擾AR結合，包括使用中和抗體，導致EGFR信號和細胞增殖減少。AR基因和EGFR一樣在健康人肝臟中檢測不到[9]。AR在部分肝切除術后的再生肝中容易誘導產生，對正常肝細胞起有絲分裂和抗凋亡作用[10,11]。AR在細胞外基質或血液循環中發揮重要作用[12]。Han等[13]研究發現肝癌患者AR高于正常人及良性肝病患者，而良性肝病患者與正常人無明顯差異。Ahn等[11]發現，和慢性肝炎/肝硬化病人相比，肝細胞癌AR表達上調。試驗觀察到了在人類肝硬化及大鼠實驗性肝硬化中AR基因的表達上調。這些結果提示AR可能起到了促進肝細胞增生及過度增殖的作用。目前國內外關于該因子研究較少，關于AR及AR在慢性肝炎、肝硬化及肝癌病中的變化及相應的作用機制仍在不斷討論。

本研究發現，良性肝病組(慢性肝炎、肝硬化)及肝癌組外周血中AR含量與健康對照組相比均明顯升高(P<0.001)，提示AR可能參與此類疾病的發生發展，其可能的機制為：AR是表皮生長因子家族成員，與表皮生長因子有相似的生物學功能，主要表現在促進上皮細胞、成纖維細胞的增殖、再生及肝臟膠原纖維合成。健康人中不表達，當肝細胞受損時，AR表達升高，促進細胞增殖修復損傷的肝臟，當機體中過度增殖，轉化為肝癌時，抑癌基因表達弱于原癌基因，抑癌基因Ras相關結構域家族蛋白1A(rasassociation domain family 1 isoform A，RASSF1A)表達下調，與此同時AR表達上調。RASSF1A能夠通過活化Hippo通路抑制Yes相關蛋白和AR的表達，從而誘導肝細胞癌細胞凋亡，抑制細胞增殖[1]。EGFR是原癌基因表達產物，AR作為配體激活EGFR，EGFR活化后可促進腫瘤細胞增殖、生長、侵襲及轉移，同時還可抑制腫瘤細胞凋亡[14-16]。具體機制還有待進一步研究。

同時研究還發現肝病的嚴重程度即肝組織增殖程度與血漿AR水平存在相關性。在一定范圍內，肝病嚴重程度與AR含量呈正相關，肝組織的炎性反應越重，組織增生纖維化程度越重，AR含量也隨之上升。

試驗數據還顯示，ALT及AST與AR的含量無明顯的相關性，從某種程度上ALT、AST是反映肝臟炎性活動的重要指標，但部分患者肝臟炎性活動時二者并無升高，嚴重肝衰竭、肝硬化、肝細胞壞死患者中二者與肝臟炎性程度也不成正比。這也許與本研究未發現相關性有一定關系。

綜上所述，AR可能與肝病的嚴重程度有一定相關性，可以在一定程度上反映疾病程度，測定血漿AR有助于判斷患者肝臟損傷程度及其預后，AR是否能成為一個有價值的肝病診療檢測指標可做進一步研究。