烯效唑分離與含量檢測方法研究

(四川省危險化學(xué)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，四川成都，610031)

(E)-(RS)-1-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-2-(1H-,2,4-三唑-1-基)戊-1-烯-3-醇的中文名稱為烯效唑，它是一種廣譜、高效植物生長調(diào)節(jié)劑，具有除草和殺菌作用，同時控制營養(yǎng)生長。它可以抑制細(xì)胞伸長，縮短節(jié)間和矮化植物，從而提高抗逆性和促進側(cè)芽生長。其活性高且在土壤中的殘留量較少。烯效唑含量的檢測和分析方法沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，其產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平也存在很大差異。氣相色譜法不適用于烯效唑的檢測，原因是其分子量大且沸點高。本文選用高效液相色譜法，因為該方法兼有較多的優(yōu)點，比如高分辨率和高靈敏度，能夠?qū)崿F(xiàn)快速分離等。本文在色譜柱參數(shù)的選擇上做了大量的實驗工作，這些參數(shù)包括色譜柱、流動相、檢測波長、柱溫以及溶劑等，獲得了較多的實驗數(shù)據(jù)，然后通過密度測定和回收率試驗證明了該方法的可行性。

目前，利用高效液相色譜法檢測烯效唑含量的方法雖有報道，但這些方法基本上通過氣相色譜分析，無法完全保證分離穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，高效液相色譜法還沒有在制造公司中推廣，也沒有形成技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

本文采用的高效液相色譜法克服了上述現(xiàn)有方法的不足，確定了可以有效推廣烯效唑的分離和含量檢測方法，并編制了該方法的地方標(biāo)準(zhǔn)。

1 實驗條件及方法篩選

1.1 高效液相色譜法條件的選擇

1.1.1 色譜柱的選擇

高效液相色譜分析需要用到高效液相色譜儀，色譜儀中最重要的部件是色譜柱，而色譜柱中固定相的選擇是其核心部分。在進行反相色譜分析時，十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠是常用的固定相。本文對比了C18柱和C8柱的分離效果，如圖1和圖2所示。相對于八烷基硅烷鍵合硅膠，十八烷基硅烷鍵合硅膠作固定相具有更好的分離效果。因此，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，柱長和柱內(nèi)徑分別為15cm和4.6mm。

圖1 C8柱(Plates:2177)分離色譜圖

1.1.2 檢測波長的選擇

利用二極管陣列檢測器進行全波長掃描，并分析了它的3D譜圖，目標(biāo)物在波長202nm和254nm處，兩者都具有最大吸收波長，但考慮到在202nm低波長處會有許多物質(zhì)干擾檢測，故選擇波長254nm。如圖3和圖4。

圖2 C18柱(Plates:6089)分離色譜圖

圖3 烯效唑吸收光譜圖

圖4 烯效唑3D吸收光譜圖

1.1.3 流動相的選擇

流動相的選擇前提必須基于色譜柱基礎(chǔ)上。十八烷基硅烷鍵合硅膠由于屬于弱極性鍵合固定相，其極性必須小于所選擇流動相的記性，這樣才能實現(xiàn)樣品中不同組分的較好分離。本實驗分別對比了甲醇+水，乙腈+水，甲醇+乙腈+水三個體系的分離情況，發(fā)現(xiàn)如果流動相中水的比例增加，保留時間延長，柱壓力就會明顯升高，峰型變得不好，導(dǎo)致不利于目標(biāo)物分析；如果甲醇的比例增加，峰值可以提前提高，盡管峰面積相等，但峰形不理想;在乙腈+水的體系中，雖可降低柱壓，增加峰高，得到理想的峰形，但會增加分析成本。經(jīng)過大量試驗對比與驗證，最終確定流動相條件為甲醇+水=75+25(V/V)，如圖5和圖6所示。

圖5 甲醇+水=75+25(V/V)色譜圖

圖6 甲醇+乙腈+水=80+10+10(V/V)色譜圖

1.1.4 柱溫的選擇

柱溫一般選用常溫，為了使冬夏條件一致，也可稍微超過全年最高氣溫幾度，最高不超過40℃，本實驗分別研究了20℃，30℃和40℃不同溫度的影響，發(fā)現(xiàn)柱溫越高，保留時間越短，基于此確定40℃的柱溫溫度。

1.1.5 溶劑的選擇

烯效唑具有特殊的化學(xué)性質(zhì)，其可以溶解在諸多有機溶劑并且微溶于水。因此，在流動相研究中，采用甲醇+水體系作為流動相，甲醇作為溶劑。

1.1.6 色譜條件

基于以上試驗與分析，烯效唑分析方法條件為：

色譜柱：150mm×4.6mm(i.d)，5μm C18(或具等同效果的色譜柱)；過濾器：濾膜孔徑約0.22μm；微量進樣器：100μL；定量進樣管：20μL；流動相：甲醇+水=75+25(V/V)；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進樣體積：10μL；檢測波長：254nm。

1.2 方法精密度試驗

稱取約0.1g烯效唑溶解于50mL容量甲醇瓶中，稀釋至刻度。然后取5mL樣品溶液到25 mL容量瓶中，同樣采用甲醇稀釋至刻度，混勻作為備用。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)進行試驗測試，測試結(jié)果如表1所示。從表中可以發(fā)現(xiàn)，烯效唑測定的變異系數(shù)為0.13%，因此該方法對烯效唑有良好的精密度。

表1 烯效唑精密度試驗結(jié)果

1.3 方法準(zhǔn)確度試驗

稱取幾種已知量的烯效唑，然后加入一定量的烯效唑標(biāo)準(zhǔn)品。 測量其中的烯效唑的總質(zhì)量并計算各自的回收率。 從表2可以看出，該方法中烯效唑的平均回收率為100.213，回收率在99.233和100.747之間，具有良好的準(zhǔn)確性。

1.4 方法的線性關(guān)系試驗

在一定質(zhì)量范圍內(nèi)以濃度遞增順序制備數(shù)個樣品，并制備10種不同質(zhì)量比的烯效唑的標(biāo)準(zhǔn)溶液用于測定。圖7為根據(jù)測試結(jié)果繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)分別為質(zhì)量和峰面積。圖中烯效唑的線性關(guān)系良好，證明了該方法的可行性，測試結(jié)果如表3和圖7所示。當(dāng)烯效唑質(zhì)量濃度位于0.75 ug/mL～600 ug/mL之間時(進樣體積10μL),對應(yīng)峰面積相關(guān)系數(shù)R2=0.99992，具有較好的線性關(guān)系，適用于定量分析要求。

表2 烯效唑回收率試驗結(jié)果

表3 線性范圍的測定

圖7 烯效唑峰面積與質(zhì)量濃度關(guān)系圖

2 結(jié)論

采用一種高效的液相色譜法實現(xiàn)了對烯效唑的分離和含量檢測，根據(jù)測試結(jié)果，該方法能夠較好地實現(xiàn)烯效唑的分離和再現(xiàn)，其分離的準(zhǔn)確性和精密度均能滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)要求。并且基于此研究結(jié)果，制定了烯效唑的地方標(biāo)準(zhǔn)，具有重要的實際應(yīng)用價值和工程意義。