閉角型青光眼患者紅細胞免疫功能與EPO和ET－1的相關性

張鄖芳，郭 蕊，劉永麗，潘桂萍

作者單位:(442000)中國湖北省十堰市太和醫院眼科

0 引言

青光眼的臨床病理特征主要包括視神經凹陷性萎縮以及視野缺損，引發青光眼視神經病變的危險因素有病理性眼壓增高以及眼內微循環失調引起的視乳頭血流灌注不足造成的局部缺血［1－3］。閉角型青光眼是青光眼中較為常見的類型之一，主要由于前房角關閉阻止了眼內房水的排出導致［4－5］。早年間有學者提出，閉角型青光眼的急性發作能夠引發機體急性應激反應，從而影響機體的免疫功能。隨著研究的不斷深入，眼科醫師發現青光眼的發生發展與細胞免疫密切相關，且進一步研究發現青光眼患者紅細胞免疫功能明顯低于眼部健康人群。對紅細胞功能的研究發現，紅細胞除了可粘附并識別抗原，還能夠向淋巴細胞遞呈抗原，以促進T細胞的依賴性反應增強。故而對紅細胞免疫功能進行研究可能有利于提高青光眼的治療效果并改善預后。促紅細胞生成素(EPO)是一種糖蛋白，主要分泌于腎臟，可通過對骨髓紅細胞系統產生作用進而對紅細胞的產生與成熟起到促進作用［6］。近年來，研究人員提出，內皮素－1(ET－1)也與眼部生理調節密切相關，其通過調節眼血管張力影響眼壓及眼血流量，還能夠調控視網膜內皮細胞及其周邊細胞的增殖以及視覺傳遞等生理過程［7］。本研究以閉角型青光眼患者為研究對象，旨在探討紅細胞免疫功能與EPO、ET－1濃度之間的相關性。

表1 兩組受試者血流變指標比較

表1 兩組受試者血流變指標比較

注:對照組:眼部正常者;病例組:閉角型青光眼患者。

組別 例數 全血粘度(mPa·s)低切 高切 全血漿粘度(mPa·s) 纖維蛋白原(g/L) 紅細胞壓積(L/L)對照組 30 12.84±2.10 5.18±1.08 1.43±0.28 3.15±0.58 0.37±0.06病例組 30 14.49±2.23 6.04±1.15 1.74±0.31 4.05±0.64 0.44±0.08 t 2.950 2.986 4.065 5.707 3.834 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

1 對象和方法

1.1 對象 選取2017－06/10期間我院收治的閉角型青光眼患者30例30眼為作為病例組，其中男17例，女13例，年齡42～68(平均53.5±4.7)歲。納入標準:(1)具有青光眼視乳頭改變者;(2)房角狹窄至關閉，或者在高眼壓狀態下關閉者;(3)影響血流及血管的藥物停用超過2wk者;(4)具有典型的中、晚期青光眼性視野缺損者;(5)臨床資料完整者。排除標準:(1)患有其它眼部疾病者;(2)心血管、肝、腎功能嚴重受損者;(3)絕對期青光眼患者;(4)合并惡性腫瘤者;(5)哺乳期、妊娠期女性患者;(6)臨床資料不全者。選取同期入院進行體檢的眼部正常者30例30眼作為對照組，其中男19例，女11例，年齡41～69(平均53.6±4.5)歲。兩組研究對象性別構成比、年齡等一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。本研究經我院倫理委員會批準同意，告知研究對象本研究的意義及主要方法，征得同意。

1.2 方法

1.2.1 紅細胞免疫功能測定 通過測定兩組受試者紅細胞C3b受體花環率、紅細胞免疫復合物花環率評估其紅細胞免疫功能。采集受試者靜脈血2mL(病例組受試者于給藥前采集)，經肝素抗凝加入等體積的生理鹽水，以Ficocl為分離液進行水平離心，使紅細胞沉淀稀釋成紅細胞密度為1.25×107/mL的紅細胞懸液，保存待測。采用郭氏法進行紅細胞C3b受體花環試驗和紅細胞免復合物花環試驗，操作步驟:將紅細胞懸液以生理鹽水洗滌3次，C3b受體花環試驗和紅細胞免復合物花環試驗分別加入5滴致敏酵母液、5滴非致敏酵母液，在試管中混勻，37℃條件下水浴30min，采用0.25%戊二醛固定，涂片，行瑞氏染色;于高倍鏡下計數200個紅細胞內2個以上酵母菌的紅細胞花環數，計算百分率。

1.2.2 血清EPO和血漿ET－1濃度測定 于清晨靜息狀態下，采集受試者靜脈血2mL，置入含抑肽酶的試管中，充分混合;4℃、3000r/min離心10min，取血漿保存于－70℃冰箱中待測。將血漿樣本置于常溫條件下復融，4℃、3000r/min離心5min，取上清液，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)測定血清EPO濃度，采用GC－1200γ放射免疫計數儀測定血漿ET－1濃度。

1.2.3 眼動脈血流指標測定 采用彩色多普勒超聲儀(GE－LOGIQ9，美國)測定受試者眼動脈血流指標，高頻探頭10MHz、取樣容積2mm。測定當日確保受試者眼壓不超過3.25kPa(24mmHg)，測定前休息15～30min，當心臟功能處于較大限度穩定條件下開始測量。受檢者取仰臥位，輕輕閉目，將少許藕合劑涂抹于眼瞼表面，眼瞼上紡織探頭，確保其不對眼球產生加壓，對聲束及眼動脈進行調整，確保睫狀后短動脈與視網膜中央動脈血流方向保持一致。測定收縮期峰值流速(PSV)、舒張末期流速(EDV)，并計算阻力指數(RI)，RI=(PSV－EDV)/PSV。

1.2.4 血流變指標測定 取晨間血2mL，放置試管中混勻離心，取血漿，采用全自動血液流變儀(ZL9000PLUS型)測定全血粘度、全血漿粘度、血漿纖維蛋白原、紅細胞壓積等指標。

統計學分析:本研究數據采用SPSS 20.0統計分析軟件進行處理。計量資料采用均數±標準差表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料采用百分率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析法。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受試者紅細胞免疫功能比較 病例組受試者紅細胞C3b受體花環率明顯低于對照組(10.81%±2.01%vs 18.06%±3.44%)，紅細胞免疫復合物花環率明顯高于對照組(17.21±3.49%vs 11.74±2.14%)，差異具有統計學意義(t=9.967、7.318，均 P＜0.05)。

2.2 兩組受試者血清EPO和血漿ET－1濃度比較 病例組受試者血清EPO濃度明顯高于對照組(26.10±5.22 mU/mL vs 22.68±4.06mU/mL)，血漿 ET－1濃度明顯高于對照組(70.85±7.16ng/L vs 58.43±5.09ng/L)，差異具有統計學意義(t=2.833、7.744，均 P＜0.05)。

2.3 兩組受試者眼動脈血流指標比較 病例組受試者EDV明顯低于對照組(8.66±1.59cm/s vs 10.68±2.12cm/s)，RI明顯高于對照組(0.73±0.04 vs 0.64±0.05)，差異具有統計學意義(t=4.175、7.699，均 P＜0.05);兩組受試者 PSV(31.65±1.38cm/s vs 31.02±1.20cm/s)差異無統計學意義(t=1.887，P＞0.05)。

2.4 兩組受試者血流變指標比較 病例組受試者低切和高切全血粘度、全血漿粘度、纖維蛋白原、紅細胞壓積均明顯高于對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.5 紅細胞C3b受體表達與血清EPO和血漿ET－1濃度的相關性 閉角型青光眼患者紅細胞C3b受體花環率與血清EPO濃度呈顯著正相關(r=0.271，P＜0.05)，而與血漿 ET－1濃度無相關性(r=0.508，P＞0.05)。

3 討論

青光眼是由于眼內壓力升高而出現的不可逆性眼部疾病，眼壓升高后視神經、視網膜無法承受高壓的壓迫從而導致視功能損害［7］。青光眼對于視神經功能危害性極大，一般分為先天性、原發性和繼發性三種青光眼類型，其中原發性青光眼根據房角形態不同又分為閉角型和開角型。原發性閉角型青光眼是指由于前房角被周邊虹膜組織機械性阻塞導致房水流出受阻，造成眼壓升高、視神經損害的一類青光眼。青光眼是我國主要的致盲原因之一，而且青光眼引起的視功能損傷是不可逆的，后果極為嚴重。理論上來講青光眼是不能預防的，但早期發現、合理治療，絕大多數患者可終生保持一定的視功能。因此，青光眼的防治必須強調早期發現、早期診斷和早期治療。

紅細胞能夠對有害的免疫復合物起到轉運功能，可通過紅細胞膜上的C3b受體對抗原－抗體－補體復合物進行識別，從而發揮保護性的免疫緩沖功能，此功能在加快清除有害免疫復合物的同時，還有效降低了免疫復合物在組織內滯積所造成的免疫病理損傷。通過對慢性腎功能衰竭患者紅細胞免疫功能的研究發現，慢性腎功能衰竭患者C3b受體花環試驗陽性率明顯低于正常人，紅細胞免疫復合物花環率明顯高于正常人。本研究中，閉角型青光眼患者眼動脈血流指標(EDV、RI)及血流變指標異常，紅細胞C3b受體花環率降低，紅細胞免疫復合物花環率升高，且與眼部正常者之間差異具有統計學意義(P＜0.05)，說明閉角型青光眼患者紅細胞免疫功能顯著下降，分析原因可能是由于閉角型青光眼患者眼血管血流動力學指標發生變化，導致視神經發生了嚴重的缺血缺氧損傷，從而對紅細胞代謝產生影響，降低了紅細胞C3b受體的粘附功能，無法對有害免疫復合物進行及時、有效地清除，使得有害免疫復合物沉積量增加，進一步造成視神經局部的病理性損傷。

EPO是一種十分重要的神經營養因子，在中樞神經系統缺氧/缺血性腦損傷以及培養的神經元中具有抗自由基、抗細胞凋亡及抗氧化等作用［8－10］。目前臨床中已采用EPO對慢性腎功能衰竭進行治療，以提高患者血紅蛋白含量，改善其貧血狀況［11］。Aktas 等［12］學者研究發現，慢性腎功能衰竭患者EPO治療8wk后，其紅細胞C3b受體花環率明顯提升，且提升效果隨著治療時間的延長而增加，而紅細胞免疫復合物花環率明顯降低，推測EPO可能通過降低氧自由基含量、對紅細胞膜起到穩定作用以增加紅細胞壽命，避免其它因子損傷C3b受體，增強紅細胞免疫功能［13－14］。目前關于EPO的研究主要針對慢性腎功能衰竭患者，在青光眼患者中較為少見。本研究中，病例組受試者血清中EPO濃度明顯高于對照組(P＜0.05)，且進一步研究發現，閉角型青光眼患者紅細胞C3b受體花環率與血清EPO濃度呈顯著正相關(r=0.271，P＜0.05)。

近年研究指出，內皮素在眼部生理病理調節過程中扮演重要角色，與部分眼部疾病的發生發展具有一定的關聯性［15－17］。本研究中，閉角型青光眼患者的血漿 ET－1水平明顯高于眼部健康人群(P＜0.05)，與其它同類型研究結論相一致，提示血漿ET－1可能參與閉角型青光眼造成的視神經損害，具體機制包括以下幾個方面［18－20］:(1)血漿ET－1可通過收縮微血管引發局部組織缺血、缺氧，上調天冬氨酸與谷氨酸等興奮性氨基酸含量，產生視網膜神經節細胞毒性，最終對視網膜神經節細胞凋亡起到促進作用;(2)血漿ET－1可通過對視神經的逆向軸漿運輸過程產生抑制，影響腦源性神經營養因子從腦部向視網膜的運輸，最終引起視網膜神經節細胞凋亡;(3)血漿ET－1濃度過高可能通過活化星形膠質細胞參與青光眼視神經的病理損傷。

綜上所述，閉角型青光眼患者紅細胞免疫功能下降，血清EPO和血漿ET－1濃度升高，且閉角型青光眼患者紅細胞免疫功能與EPO濃度呈正相關，與血漿ET－1濃度無相關性。