瘦素及瘦素受體與賁門失弛緩癥的相關性分析

張哲 方毅 舒亦斌 涂金明 吳綿勇 黃小剛

食管賁門失弛緩癥為食管肌肉功能障礙性疾病，其主要特征是食管缺乏蠕動，食管下括約肌高壓和對吞咽動作的松弛反應障礙。主要發生在食管下段，本病是一種少見病，其發病率國外報道約0.5～1/10萬，占食管疾病的2%～20%。其病因至今尚未完全明確，可能與精神因素、自身免疫、病毒感染和遺傳因素導致食管肌肉層神經節變性、退化、減少或缺如等有關［1］。瘦素是肥胖基因編碼的蛋白相關產物，瘦素受體是一種單跨膜的細胞受體，研究認為瘦素與消化道腫瘤關系密切，瘦素及受體在結腸癌、胃癌、食管癌多種腫瘤細胞中均有表達，賁門失弛緩癥約2%～7%可發生癌變［2］。本文探討瘦素及其受體在食管賁門失弛緩中的意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選擇2012年1月至2017年12月本院食管賁門失弛緩癥患者22例，男6例，女16例；年齡16～68歲，平均年齡60.3歲。均有吞咽困難。內鏡檢查食管上段有不同程度的擴張，下段有環形收縮，取賁門處食管組織。后行X線食管鋇劑造影，呈典型鳥嘴癥，均經高分辨食管測壓確診。同時取健康者食管組織30例為對照組，男20例，女10例；年齡28～68歲，平均年齡54.4歲。所有標本均常規脫水，石蠟包埋，4μm連續切片。所有病例取石蠟切片一張行蘇木素-伊紅（HE）染色。所有入組人員均簽署知情同意書，本項目經本院倫理委員會審核批準。

1.2 免疫組織化學 Leptin羊抗人多克隆抗體（SC-842）和ob-R羊抗人多克隆抗體（SC-1834）購自Santa Cruze公 司 ；Immunostain SP Kit試 劑 盒 購 自Maxim Biotech，Inc公司，SC-842與SC-1834的工作液濃度為1∶100；二胺基聯苯氨（DAB）顯色試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。切片常規進行脫蠟、阻斷內源性過氧化酶的活性、抗原修復和封閉，采用鏈霉菌抗生物素蛋白一過氧化物酶（SP法）進行免疫組織化學染色，DAB顯色。

1.3 免疫組化結果判斷 瘦素表達陽性為細胞質染成棕黃色顆粒。瘦素受體表達陽性為細胞膜染成棕黃色顆粒。按以下方法進行半定量分類：組織標本未染色（-）；＜25%細胞染色（+）；25%～50%細胞染色（++）；50%～75%腫胞染色（+++）；＞75%細胞染色（++++）。每片選擇4個不重復的高倍視野，計算陽性表達細胞占全部細胞總數的百分率，取其均值為陽性表達率。

1.4 圖像分析 采用Imge-pro plus 6.0軟件對每張切片400倍數隨機攝像的圖像進行分析，取細胞組織中瘦素及受體染色平均積分吸光度值（IA）表示陽性物質相對含量。

1.5 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 瘦素和瘦素受體在食管賁門失弛緩及正常食管組織中的表達 瘦素和瘦素受體在食管賁門失弛緩組織中表達分別為81.8%、86.4%，正常食管組織中的表達為53.3%、50.0%。兩者比較差異有統計學意義。見表1、2。

表1 瘦素在正常食管及賁門失弛緩癥者食管中的表達（n）

表2 瘦素受體在正常食管及賁門失弛緩癥者食管中的表達

2.2 賁門失弛緩癥組織中的瘦素及其受體與臨床特征的關系 瘦素及受體的表達與性別、年齡差異無統計學意義。見表3。

表3 瘦素和瘦素受體表達與年齡、性別相關性［n（%）］

2.3 賁門失弛緩癥與正常食管組織中瘦素及受體的IA值比較 瘦素在賁門失弛緩癥及正常食管組織 中 的 平 均 IA 值 分 別 為 ：（86365.63±25684.24）、（650476.25±15256.52）； 其 受 體 在 賁 門 失 弛緩癥與正常食管組織中的平均IA值分別為（89524.25±18524.25）、（68751.25±11568.25）。 瘦 素及其受體在賁門失弛緩癥與正常食管組織中的平均IA值比較差異均有統計學意義。

3 討論

國內外大量研究表明瘦素可以作為促細胞分裂劑、存活因子、代謝調節劑、血管生長因子等而對外周很多器官產生作用［3］，曾有學者發現瘦素對胃食管反流病的發生發展中起一定作用，國內相關研究［4］亦證實食管癌瘦素及其受體的表達率均高于正常的食管黏膜。瘦素及其受體與食管病變關系密切，賁門失弛緩癥是食管癌的癌前病變之一，其病因尚不明確。

本資料結果顯示，瘦素及其受體在22例食管賁門失弛緩標本中的表達率分別為81.8%、86.4%；在不同年齡與性別間的表達差異無統計學意義，其在正常食管組織中的表達率分別為53.3%、50.0%。瘦素及其受體在食管賁門失弛緩及正常食管組織的表達率比較均有統計學意義，推測瘦素及其受體，其在食管賁門失弛緩組織中呈現出雙重高表達現象，且高于正常人食管組織，賁門失弛緩癥患者因食管蠕動能力下降，食物易潴留，細菌繁殖及物理刺激，致黏膜糜爛，潰瘍形成，在上皮增生修復過程中，瘦素作為一種促有絲分裂劑及非特異性的促腫瘤生長因子，促進細胞的生長和繁殖［5-6］，同時可能促進血管及細胞的異常增生，導致癌變，推測高表達的瘦素及受體可能直接參與食管賁門失弛緩癥發生癌變的發展的過程。圖像分析結果顯示食管賁門失弛緩癥患者食管組織中瘦素及其受體的平均IOD值明顯高于正常食管組織（P＜0.01），提示食管賁門失弛緩癥食管組織不僅有較高的瘦素及受體表達率，且表達含量高于正常食管組織。食管組織中瘦素及其受體異常表達可能會引起一系列病理生理改變，其中高含量表達的瘦素就有可能激活某些信號通路導致神經細胞的變性，最終引起食管肌間神經叢抑制性神經缺失導致其發病［7］，瘦素還可以作為有絲分裂劑和細胞生長因子促進食管平滑肌分裂增生，引起食管平滑肌肥厚，導致食管賁門失弛緩癥的形成。瘦素及受體在賁門失弛緩癥及食管癌中均雙重高表達現象，推測瘦素及其受體在賁門失弛緩癥發生發展的過程中可能起重要的作用。

綜上所述，瘦素及其受體在食管賁門失弛緩組織中呈現雙重高表達現象，提示其與食管失弛緩癥發生及癌變關系密切。推測通過檢測瘦素及其受體可以作為早期發現食管失弛緩癥和監測食管失弛緩癥發生癌變的一種輔助實驗指標，拮抗瘦素及其受體也可能是治療賁門失弛緩癥及預防賁門失弛緩癥癌變的方式之一。