毛細管區帶電泳法檢測硝苯地平

張 劍， 張 博， 韓 祿， 楊 陽， 劉春葉

(西安醫學院藥學院，陜西西安 710021)

硝苯地平是第一代二氫吡啶類鈣通道阻滯藥，其化學性質不穩定，遇光易分解。在臨床應用中，硝苯地平具有抑制鈣離子內流作用，可增加冠脈血流量，降低外周血管阻力。在心血管疾病方面，主要用于治療高血壓。此外，硝苯地平還可用于治療穩定型和變異型心絞痛、暈動病、偏頭痛、抑制癌癥的擴散等。同時，硝苯地平具有作用快而強、療效確切、毒副作用小等特點[1 - 2]。常用硝苯地平含量的測定方法有：鈰量法[3]、紫外-可見分光光度法[4]、高效液相色譜法[5 - 7]等。此外，還有文獻報道使用活化玻碳電極電化學法[8]、流動注射-串聯質譜法[9]、液相色譜-質譜法[10]等方法測定硝苯地平含量。

毛細管電泳法具有簡便、快速、高效、樣品用量少、分析成本低，近年來發展迅速，已被廣泛應用于藥物含量測定。目前，尚未有人采用毛細管區帶電泳法(CZE)測定硝苯地平含量。本實驗擬建立CZE法測定硝苯地平含量的分析方法，希望可以對其他藥物含量測定新方法的建立提供參考[11 - 12]。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

BeckmanP/ACEMDQ毛細管電泳儀(貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司北京分公司)，配二極管陣列檢測器(DAD)；熔融石英毛細管(60 cm×50 μm i.d.,有效長度為50 cm；河北永年銳灃色譜器件有限公司)；PB-10型pH計(德國，賽多利斯股份有限公司)；UV-2102 PCS型紫外-可見分光光度計(上海尤尼柯儀器有限公司)。

硝苯地平對照品(中國藥品生物制品檢定所，約100 mg)；NaH2PO4(≥99.0%)，Na2HPO4(≥99.0)(天津市紅巖化學試劑廠)；其余試劑均為分析純。實驗用水為去離子水。樣品溶液及緩沖溶液使用前均用0.45 μm濾膜過濾。

硝苯地平緩釋片分別購自陜西步長高新制藥有限公司，南京白敬宇制藥有限公司，山西云鵬制藥有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1毛細管的預處理及平衡新毛細管在使用前分別用水、1 mol/L NaOH溶液、水、1 mol/L HCl、水依次沖洗10、30、15、30、15 min。為了確保實驗的重現性，每兩次運行之間依次用水、0.1 mol/L NaOH溶液、水、緩沖溶液各沖洗5、5、5、3 min。運行緩沖溶液為20 mmol/L磷酸鹽溶液(pH=8.0)，電動進樣3.45 kPa×5 s，分離電壓20.0 kV，檢測波長254 nm。

1.2.2實際樣品中硝苯地平的含量測定(1)CZE法測定硝苯地平含量:取4個不同批號(批號分別為：C130104、120101、F160910、160302)的硝苯地平片劑各10片，稱量后計算平均片重，分別研磨后，各稱取硝苯地平粉末2 mg。制備硝苯地平供試品溶液，每個供試品溶液配制好后用0.45 μm的微孔濾膜過濾，進行電泳分離，重復3次，記錄峰面積平均值，代入標準曲線計算其濃度，進一步得到進樣硝苯地平的質量，根據硝苯地平的平均片重可計算出每片藥物中含有硝苯地平的質量。(2)紫外-可見分光光度法測定硝苯地平含量：根據《中國藥典》二部(2005版)的方法，取硝苯地平片劑20片，稱量后研磨，稱取硝苯地平粉末適量(大概相當于含有硝苯地平30 mg)，用三氯甲烷溶解，溶解后用無水乙醇定容，取濾液5 mL定容至50 mL容量瓶中，在333 nm波長處測定溶液的吸光度，依據公式[13]計算硝苯地平含量。

2 結果與討論

2.1 工作曲線

在1.2.1電泳條件下，硝苯地平對照品溶液與供試品溶液的電泳圖譜如圖1所示。可以看出，硝苯地平出峰時間約為4.8 min，其理論塔板數分別為21654、17339。在此條件下硝苯地平分離效率較好，可保證整個實驗穩定運行。

圖1 硝苯地平標準品(A)與供試品(B)電泳譜圖Fig.1 Electropherograms of nifedipine standard(A) and nifedipine sample(B)

配制系列硝苯地平標準溶液，按優化后CZE條件測定，以硝苯地平的峰面積為縱坐標(y)，其濃度(x)為橫坐標進行線性擬合，得回歸方程:y=55633x+1019.4，相關系數r=0.9998(n=5)。硝苯地平溶液濃度在0.03～0.11 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.2 加標回收率

精確吸取已知濃度的硝苯地平溶液9份，每份約相當于硝苯地平0.1118 mg，分別準確加入硝苯地平對照品儲備液(質量為0.0590、0.1118、0.1677 mg(各3份))，制成低、中、高3種加標濃度的溶液。測定結果如表1所示，平均回收率分別為105.84%、104.60%、98.04%，能保證實驗的準確性。

2.3 精密度考察

準確吸取對照品儲備液70 μL，連續進行6次測定，計算峰面積的相對標準偏差(RSD)，得日內峰面積RSD值為2.1%(n=6)；每天按照上述電泳條件運行3次，平行實驗5 d，得日間峰面積的RSD值為1.4%(n=5)。表明該方法的精密度較高，重現性良好。

2.4 重復性考察

將批號為C130104的硝苯地平片劑研磨，研細后稱取2 mg，平行配制5份供試品溶液進行測定，計算峰面積RSD值。實驗結果表明峰面積的RSD值為4.3%(n=5)，方法重復性良好。

表1 硝苯地平加樣回收率實驗

2.5 穩定性考察

稱取批號為C130104的硝苯地平，配制供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h條件下進行測定，計算得峰面積RSD值為5.5%(n=5)，表明硝苯地平供試品在8 h內穩定性較好。此外，實驗中所配制的硝苯地平對照品儲備液應置于棕色瓶中，并置于冰箱中保存，以免其見光分解。

2.6 實際樣品含量測定

硝苯地平CZE法含量測定結果見表2。結果顯示，批號為C130104、F160910、160302的硝苯地平片劑均符合標注規格，而批號為120101的硝苯地平含量低于標注規格。截至測試時間(2017年4月)，批號為120101的硝苯地平片劑于2013年已經過期，批號為C130104的硝苯地平片劑于2016年過期。可見，隨著硝苯地平片劑存放時間增加，硝苯地平的含量也會隨之呈現下降趨勢；同時，實驗也對此4個批號的硝苯地平按照《中國藥典》二部(2005版)方法進行了測定(表2)。結果顯示，4個批號的硝苯地平含量均符合標注規格，兩種測量方法相比較，測定結果差值范圍在0.06～0.479 mg(0.57%～4.78%)之間，差異性較小。因此本文所建立的CZE測定新方法，可作為一種硝苯地平片劑質量控制的有效方法。

表2 硝苯地平含量測定結果

3 結論

本文建立了一種測定硝苯地平含量的毛細管區帶電泳法，采用該方法對4個不同批號的硝苯地平片劑進行含量測定，其中有3個批號的硝苯地平片劑符合標注規格，而不符合標注規格的硝苯地平片劑過期時間較長。通過比較可以看出，硝苯地平藥物的存放時間越長會使其含量減少，同時該實驗所建立的毛細管電泳測定新方法與藥典的紫外-可見分光光度法的測定結果差異較小(0.57%～4.78%)，說明毛細管區帶電泳法可作為一種硝苯地平片劑質量控制的有效方法。