慢性牙周炎伴肥胖患者血清中IL-6、IL-18表達(dá)水平的研究

褚福行 李珊珊 李思琪 李維善

摘要：目的? 探究白細(xì)胞介素6（IL-6）、白細(xì)胞介素18（IL-18）在肥胖慢性牙周炎患者血清中的表達(dá)水平變化及意義。方法? 選取2017年9月～2018年5月在佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院牙周科門診確診為慢性牙周炎患者15例設(shè)為NP組，另選取同期慢性牙周炎伴肥胖患者15例設(shè)為FP組。收集兩組患者外周血樣本并記錄牙周PD、CAL，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測(cè)定樣本中的IL-6、IL-18的表達(dá)水平，分析兩組間指標(biāo)的差異及相關(guān)性。結(jié)果? FP組血清中IL-6、IL-18分別為（9.16±2.35）pg/ml、（325.22±98.67）pg/ml，其表達(dá)水平分別高于NP組的（6.15±2.06）pg/ml和（241.52±78.82）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;FP組中PD與血清中IL-6、IL-18呈高度正相關(guān)（r=0.894，P<0.01;r=0.819，P<0.01）;CAL與血清中IL-6、IL-18呈正相關(guān)（r=0.885，P<0.01，r=0.828，P<0.01）;NP組中PD與血清中IL-6、IL-18也有正相關(guān)關(guān)系（r=0.842，P<0.01，r=0.728，P<0.01）;CAL與血清中IL-6、IL-18呈正相關(guān)（r=0.884，P<0.01，r=0.707，P<0.01）。結(jié)論? 肥胖狀態(tài)所導(dǎo)致的外周血中IL-6、IL-18水平的升高與CP的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。

關(guān)鍵詞：慢性牙周炎;肥胖;IL-6;IL-18

中圖分類號(hào)：R781.4+2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.01.028

文章編號(hào)：1006-1959（2019）01-0092-04

Study on the Expression Levels of IL-6 and IL-18 in Serum of Patients with

Chronic Periodontitis and Obesity

CHU Fu-xing，LI Shan-shan，LI Si-qi，LI Wei-shan

（Periodontal Oral Mucosa of Stomatological Hospital Affiliated Jiamusi University，Jiamusi154004，Heilongjiang，China）

Abstract：Objective? To investigate the changes and significance of interleukin-6 （IL-6） and interleukin-18 （IL-18） expression in serum of obese chronic periodontitis patients. Methods? From September 2017 to May 2018， 15 patients with chronic periodontitis diagnosed in the periodontal clinic of Jiamusi University Hospital of Stomatology were selected as NP group， and 15 patients with chronic periodontitis and obesity were selected as FPgroup. Peripheral blood samples were collected from both groups and PD and CAL were recorded. The expression levels of IL-6 and IL-18 in the samples were determined by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.The differences and correlations between the two groups were analyzed. Results? The serum levels of IL-6 and IL-18 in FP group were （9.16±2.35） pg/ml and （325.22±98.67） pg/ml， respectively， and their expression levels were higher than that of NP group （6.15±2.06） pg/ml and （241.52±78.82） pg/ml， the difference was statistically significant （P<0.05）; PD in the FP group was highly positively correlated with serum IL-6 and IL-18 （r=0.894， P<0.01;r=0.819，P<0.01）; CAL was positively correlated with serum IL-6 and IL-18 （r=0.885， P<0.01， r=0.828， P<0.01）;There was a positive correlation between PD and serum IL-6 and IL-18 in NP group （r=0.842，P<0.01，r=0.728， P<0.01）; CAL was positively correlated with serum IL-6 and IL-18 （r=0.884，P<0.01，r=0.707，P<0.01）. Conclusion? The increase of IL-6 and IL-18 levels in peripheral blood caused by obesity is closely related to the occurrence and development of CP.

Key words：Chronic periodontitis;Obesity;IL-6;IL-18

慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）是以牙周致病菌為始動(dòng)因子，宿主易感性為重要因素的一類廣泛牙周支持組織破壞的疾病。Offenbacher在1996指出CP與全身健康和疾病之間具有雙向聯(lián)系。肥胖（obesity）是一種以體內(nèi)脂肪組織過(guò)度積累為特點(diǎn)的慢性代謝性疾病，世界衛(wèi)生組織（WHO）在1997年提出“肥胖本身就是一種疾病”。Perlstein 等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)肥胖會(huì)使牙周組織表現(xiàn)出更為明顯的炎癥反應(yīng)[1]。有研究表明，肥胖可能通過(guò)脂肪組織分泌多種脂肪因子，包括白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素18（interleukin-18，IL-18）等促炎因子，進(jìn)而參與了牙周病的發(fā)生發(fā)展[2]。同時(shí)，Coralia比較了慢性牙周炎患者與健康人群牙齦組織中IL-6、IL-18的濃度。結(jié)果顯示，牙周病變部位的細(xì)胞因子的濃度均大于正常部位。因此IL-6、IL-18可能與CP和肥胖之間存在著密切的聯(lián)系[3]。血清是齦溝液的液體成分的主要來(lái)源，與牙周組織有著密不可分的聯(lián)系，也是牙周局部疾病與全身健康狀況之間的關(guān)聯(lián)媒介之一。流行學(xué)研究調(diào)查顯示，肥胖是繼吸煙后的第二大牙周炎危險(xiǎn)因素[4，5]，但是關(guān)于肥胖對(duì)慢性牙周炎的發(fā)生發(fā)展的促進(jìn)機(jī)制目前尚不明確。本研究擬通過(guò)比較CP伴肥胖患者與CP患者血清中IL-6、IL-18表達(dá)水平以及其與牙周炎臨床指標(biāo)之間的關(guān)系，為探究肥胖與慢性牙周炎之間的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料? 選取2017年9月～2018年5月在佳木斯大學(xué)附屬口腔醫(yī)院牙周科門診確診為慢性牙周炎患 者15例設(shè)為NP組，男性8例，女性7例，年齡37～54歲，平均年齡（45.27±5.65）歲，體重指數(shù)19.51～24.81 kg/m2，平均體重指數(shù)（21.98±1.75）kg/m2。另外選取同期慢性牙周炎伴肥胖患者15例設(shè)為FP組，男性10例，女性5例，年齡37～54歲，平均年齡（44.87±5.90）歲，體重指數(shù)28.06～31.18 kg/m2，平均體重指數(shù)（29.26±1.01）kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：①近6個(gè)月內(nèi)未做過(guò)牙周治療;②近3個(gè)月內(nèi)未使用任何抗生素。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦、哺乳期、吸煙史及正畸治療史;②未簽署知情同意書者。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)? 根據(jù)2012年美國(guó)牙周炎定義標(biāo)準(zhǔn)[6]制訂：①余留牙不少于20顆，磨牙中至少有4顆存在（除第三磨牙外）;②≥2個(gè)非同一個(gè)牙的鄰面位點(diǎn)CAL≥3 mm，并且≥2個(gè)非同一個(gè)牙的鄰面位點(diǎn)，PD≥4 mm或者≥1個(gè)鄰面位點(diǎn)PD≥5 mm。肥胖的納入標(biāo)準(zhǔn)[7]：以體重指數(shù)（body mass index，BMI）為指標(biāo)，BMI在18.5～23.9 kg/m2為體重正常;BMI≥28 kg/m2為肥胖。

1.3方法

1.3.1一般資料收集及牙周狀況評(píng)估? 對(duì)各組受試的年齡性別，身體狀況進(jìn)行一般調(diào)查。由同一名有臨床工作經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生，通過(guò)WILliams探針以20 g的探診壓力檢查患者的牙周探診深度（Probing depth，PD）和臨床附著喪失（Clinical attachment loss，CAL），按《牙周病學(xué)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，從右上象限開始，依次檢查4個(gè)象限的第一、第二磨牙的6個(gè)位點(diǎn)（近中頰、頰、遠(yuǎn)中頰、近中舌、舌、遠(yuǎn)中舌），由一名經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的專科醫(yī)生記錄數(shù)據(jù)，并填寫牙周檢查記錄表。所有患者均在采血后對(duì)牙周狀況進(jìn)行評(píng)估。

1.3.2血清樣本的收集與處理? 所有受試者均采集清晨8～10點(diǎn)空腹的血液，肘前靜脈穿刺采集5 ml外周靜脈血，放入非抗凝管中靜置，2000 r/min離心20 min，收集上清，分裝到EP管中，標(biāo)記后，于-80 ℃冰箱保存，待檢。

1.3.3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)? 在室溫下復(fù)融所有的樣本血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）檢測(cè)樣本的IL-6、IL-18的表達(dá)水平，步驟要求按照IL-6、IL-18 ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。計(jì)算血清樣本中兩種炎癥因子的濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理? 使用SPSS 20.0將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，行兩樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料行四格表？字2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2 結(jié)果

2.1兩組牙周狀況及炎性因子表達(dá)水平比較? FP組與NP組PD、CAL比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）; FP組中IL-6、IL-18表達(dá)水平高于NP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2牙周臨床指標(biāo)及BMI與IL-6、IL-18的相關(guān)性? 兩組BMI與IL-6、IL-18無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。FP組和NP組血清中IL-6、IL-18的表達(dá)水平分別與各組PD、CAL呈顯著正相關(guān)（P<0.01），見表2、表3。

3 討論

血清通過(guò)參與齦溝液的液體成分的構(gòu)成，間接參與了牙周防御體系的建立。本實(shí)驗(yàn)采取牙周臨床指標(biāo)相對(duì)較接近的臨床患者的外周血，排除慢性牙周炎嚴(yán)重程度所帶來(lái)的變量誤差后，檢測(cè)炎性因子含量顯示，IL-6、IL-18在FP組與NP組血清中均有較高的表達(dá)水平，進(jìn)一步比較兩組炎性因子的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)P組的血清中IL-6、IL-18的表達(dá)水平顯著高于NP組，在表2及表3的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示，慢性牙周炎的PD及CAL與血清中炎性因子IL-6、IL-18呈顯著正相關(guān)，即肥胖中炎性因子增加會(huì)加重慢性牙周炎患者的牙周硬組織的喪失，表明了機(jī)體的肥胖狀態(tài)會(huì)影響慢性牙周炎的發(fā)展，也提示了肥胖參與CP發(fā)生發(fā)展的機(jī)制可能與機(jī)體炎性因子水平的提高有關(guān)。

本研究認(rèn)為，慢性牙周炎的牙槽骨吸收和附著喪失與機(jī)體內(nèi)IL-6、IL-18濃度的增加是有直接聯(lián)系的。Lana JP等研究表現(xiàn)了IL-18成骨細(xì)胞骨吸收活性的體內(nèi)影響作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)應(yīng)用不同濃度IL-18進(jìn)行富含成骨細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，骨吸收活性降低[9]。Scapoli L等也發(fā)現(xiàn)慢性牙周炎病人外周血血清中的IL- 6的水平明顯增加，驗(yàn)證了IL-6與牙周病的炎癥反應(yīng)明顯相關(guān)[10]。以上結(jié)論與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是一致的。脂肪組織是機(jī)體表達(dá)IL-6、IL-18的重要部位，相關(guān)研究表明了，IL-18在肥胖和牙周炎患者的血清中均呈現(xiàn)高表達(dá)，且與BMI有相關(guān)性[11]。本實(shí)驗(yàn)FP組中IL-18與BMI也呈一定的正相關(guān)關(guān)系，r=0.263。Sims JE從因子水平的研究表明，IL-18可通過(guò)IL-1 受體相關(guān)激酶 1等因子，激活 NF-κB并活化 NF-κB抑制因子（IκB），引起其他炎癥因子的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而加重了慢性牙周炎的病程發(fā)展[12]。本研究的結(jié)果是NP組中PD與IL-6、IL-18濃度成高度正相關(guān)，分別為r=0.894、r=0.819。這與劉琦等研究結(jié)果也相吻合，即牙周探診深度越深則牙齦組織中的IL-6、IL-18的含量越高[13]。中外研究學(xué)者也指出，肥胖狀態(tài)使血清中的炎性因子濃度升高，進(jìn)而降低了宿主的防御功能，從而增加了細(xì)菌感染的敏感性和宿主的易感性，并加重了微生物感染牙周炎支持組織的嚴(yán)重程度[14，15]。由于目前的研究對(duì)肥胖分型未有統(tǒng)一的客觀標(biāo)準(zhǔn)，所以本研究對(duì)于研究對(duì)象的納入僅依據(jù)體質(zhì)指數(shù)為指標(biāo)，希望下一步能根據(jù)亞洲人群的肥胖類型進(jìn)行具體分型研究。

在慢性牙周炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，全身健康因素起著十分重要的作用。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組中的IL-6、IL-18的表達(dá)濃度均大于對(duì)照組，且兩組血清中IL-6、IL-18與PD、CAL具呈顯著正相關(guān)綜上，機(jī)體肥胖可能會(huì)加重CP的病情發(fā)展。所以本研究提示肥胖人群等慢性牙周炎高危人群及時(shí)采取正確的措施保護(hù)自己，并指導(dǎo)臨床對(duì)慢性牙周炎合并肥胖患者采取個(gè)性化的治療，包括飲食干預(yù)，生活方式指導(dǎo)等。也有助于加深臨床醫(yī)師與口腔醫(yī)師之間的合作，以期更加積極地促進(jìn)全身健康和口腔健康。

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