屑止康膠囊質量控制方法研究

李忻，汪旭，孟慶妍，朱昆※

（1.吉林大學中日聯誼醫院藥學部，長春 130021；2.長春市中心醫院制劑室，長春 130024；3.吉林省食品藥品檢驗所，長春 130033）

屑止康膠囊為院內制劑，處方由赤芍、紫草、槐花、大青葉、白鮮皮、生地黃、甘草等中藥材加工制備而成，具有養陰生津、解毒透疹、清熱涼血、祛風止癢之功效，臨床用于治療尋常性銀屑病。赤芍為該方劑中的君藥，芍藥苷為赤芍主要有效成分之一，具有抗氧化、改善線粒體功能及修復神經元損傷等多種藥理作用[1-2]。

本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對屑止康膠囊中主要有效成分芍藥苷進行定量測定，通過對芍藥苷的含量控制，考察制劑的質量，為建立該制劑質量控制標準提供了相關依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010AHT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ3200E型超聲波處理器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

屑止康膠囊（批號：20180025、20180026、20180027，長春市中心醫院制劑室）；芍藥苷（110736-201842，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，Grace 公司）；其它所用試劑均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：TC-C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%醋酸溶液；梯度洗脫：0～22 min 14∶86，22～27 min 98∶2，27～33 min 14∶86；檢測波長：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取適量的芍藥苷對照品，用95%乙醇配制成30μg/mL 的芍藥苷乙醇溶液，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

稱取適量屑止康膠囊內容物，研磨成細粉末，用3號篩濾過后，精密稱取樣品0.3 g 于25 mL 的容量瓶之中，60%乙醇定容至25 mL，密閉，稱重，超聲波震蕩20 min 后，取出放冷，再對其稱重，用60%乙醇溶液彌補溶液耗損，震蕩搖勻，濾過溶液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照品溶液的制備

按處方中藥材比例，取除赤芍外的其它藥材，按工藝流程制備成不含赤芍的陰性對照品溶液。

2.5 專屬性實驗

采用“2.1”項下色譜條件，分別取對照品溶液、陰性對照品溶液以及供試品溶液，分別進樣，得相關HPLC色譜圖。研究結果表明，芍藥苷出峰時間約17.5min，在這個時間段，陰性對照品溶液未見明顯雜質峰干擾，即屑止康膠囊組方中的其它成分在該檢測條件下對芍藥苷含量測定不會產生影響，專屬性較強。具體結果見圖1～圖3。

圖1 芍藥苷對照品溶液液相色譜圖Figure 1 High performance liquid chromatography of paeoniflorin reference material

圖2 陰性樣品溶液液相色譜圖Figure 2 High performance liquid chromatography of negative sample

圖3 供試品溶液液相色譜圖Figure 3 High performance liquid chromatography of sample

2.6 線性范圍的考察

精密稱取適量的芍藥苷對照品，用60%乙醇溶液配制成0.035 0 mg/mL 的溶液，分別精密吸取該對照品溶液5L、10L、15L、20L、25L、30L，分別注入液相色譜儀，測定對照品芍藥苷的色譜峰面積。將進樣量作為橫坐標、峰面積積分值作為縱坐標進行線性回歸，得到回歸方程y=2×106x 19 970，r=0.999 6，芍藥苷進樣量在0.174 0～1.045 1g 的范圍內，芍藥苷色譜峰面積同進樣量可以呈現良好的線性關系。

2.7 精密度考察

2.8 穩定性試驗

取同一批供試品（批號：20180025），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于室溫放置0h、2h、4h、8h、12 h 及24 h，按“2.1”項下色譜條件測定芍藥苷色譜峰面積，以考察測定環境下供試品溶液的穩定性。結果RSD 為0.16%（n=6），表明供試品溶液在該環境下24 h內的穩定性達到測定要求。

2.9 重復性試驗

取屑止康膠囊6 份（批號：20180025），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，測得RSD 為1.13%，表明該方法測量結果的偏差小，重復性達到測定要求。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量樣品（批號：20180025）6 份，分別加入一定量芍藥苷對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，參照“2.1”項下色譜條件進樣測定，測定樣品中芍藥苷的含量。通過計算得平均回收率為99.76%，RSD為1.09%。表明本研究方法對于樣品的處理方法準確可行。

2.11 屑止康膠囊中芍藥苷的含量測定

按照“2.3”項下方法，取3 個批次的屑止康膠囊樣品，制備3 批供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件，分別對3 個批次的供試品溶液芍藥苷含量進行測定，結果見表1。

表1 屑止康膠囊中芍藥苷的含量測定結果Table1 Determination of paeoniflorin in Xiezhikang capsule

3 討論

本研究在選擇流動相時，曾經考察多種流動相的混合比例，如甲醇-水、乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液[3]，結果芍藥苷的色譜峰重疊較為嚴重，分離度較差。通過多次調整有機相與水相的組合，最終確定以乙腈-0.1%醋酸溶液為流動相[4-5]，確定了梯度洗脫的時間比（0～22min 14∶86，22～27min98∶2，27～33min 14∶86）。在此條件下，芍藥苷的色譜峰同樣品其它成分的分離度均>1.5，且無拖尾現象。關于芍藥苷的含量測定，常用的檢測方法包括紫外-可見分光光度法（UV）和HPLC 法。與UV 相比，HPLC 雖然在操作上更為復雜，但通過該方法建立的屑止康膠囊質量標準的穩定性和精密度方面更加理想，達到預期效果。