大豆淫羊藿骨碎補片增加骨密度功能實驗研究

禹珊珊，趙倩倩，高洋，高卓林，王瑩，金向群

（吉林大學藥學院，長春 130021）

骨質疏松癥在中老年人群中發病率較高，是一種以骨密度降低、骨質變薄、骨脆性增加和患者骨折率增加為主要特征的骨骼性疾病[1]。隨著社會老齡化的加劇，患骨質疏松癥的人群逐漸增加，許多醫藥研究者都在致力于開發一種預防和治療骨質疏松癥的藥物。因此，許多具有改善骨質疏松功能的中藥保健品應運而生。大豆淫羊藿骨碎補片是由大豆、淫羊藿及骨碎補組成的復方制劑，它具有增加骨密度、預防骨質疏松的功能。本實驗對大豆淫羊藿骨碎補片進行了增加骨密度的動物實驗研究。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物

動物數量與標準：60 只SD 雌性大鼠，SPF 級，體重240～279 g，購自上海杰思捷實驗動物有限公司，生產許可證號：SCXK（滬）2013-0006，動物使用許可證號：SYXK（滬）2013-0008。

動物飼養條件：飼養室相對濕度為40%～53%，溫度為20 ℃～24 ℃；實驗動物大鼠所用的基礎飼料由上海福貝寵物有限公司提供，登記證號：滬飼證（2014）04002。

1.2 材料與試劑

大豆淫羊藿骨碎補片（長春英平藥業有限公司，規格0.6 g/片，批號：20161116）。

硝酸、高氯酸、2%氧化鑭鈣標準溶液（配制成鈣含量為500g/mL 的溶液）。

1.3 儀器

PL3002 型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；ACS-3A型電子秤（上海太和衡器廠）；AA-300 型原子吸收分光光度計（鉑金埃爾默公司）；Discovery-wi型雙能X 線骨密度儀（美國Hologic 公司）。

2 實驗方法

2.1 骨密度和骨鈣含量測定試驗

將60 只大鼠分于12 個籠內，每籠飼養5 只，適應性飼養1 周后開始實驗。整個實驗過程中（包括適應性飼養階段）大鼠飲用去離子水。

對50 只大鼠進行去勢手術處理：用戊巴比妥鈉溶液按照30 mg/kg的劑量對大鼠進行腹腔注射麻醉，去除大鼠背部肋脊角處的毛，用碘伏進行消毒處理，將雙側卵巢切除。其余10 只大鼠作為假手術對照組，并做相應的假手術處理：大鼠按照去勢手術方法處理，但保留雙側卵巢，僅切除部分脂肪。

大鼠去勢后，按照體重隨機分組，每組10 只，共5組：陽性對照組、模型對照組、大豆淫羊藿骨碎補片低、中、高劑量組。假手術對照組和模型對照組大鼠均用去離子水灌胃；陽性對照組大鼠用1.0 mg/kg的雌二醇灌胃；低、中、高3 個劑量組分別用人體推薦劑量的5倍（0.2 g/kg）、10 倍（0.4 g/kg）、30 倍（1.2 g/kg）的大豆淫羊藿骨碎補片供試液灌胃。以上各組每天灌胃1次，灌胃容量為10 mL/kg，連續12 周。每周記錄大鼠體重。12 周之后，處死大鼠，把各組大鼠右側的股骨分離出來，烘干至恒重并稱量，記錄各組大鼠的股骨干重。測量各組股骨遠心端和股骨中點的骨密度。骨密度測完后，股骨經消化后利用原子吸收法進行骨鈣含量的測定。

2.2 數據處理和統計

對實驗數據進行方差分析和統計學處理統計，采用SPSS22.0 軟件對數據的方差齊性進行檢驗，采用單因素方差分析對方差齊性數據進行比較，發現差異后，用Dunnett 法進行多個劑量組與1 個對照組均數間比較。而對于方差不齊的數據，用Dunnett T3 檢驗進行兩兩比較。P ＜0.05，差異有顯著性。

3 結果

3.1 實驗各組對大鼠體重的影響

模型對照組從第1 周末開始，體重和體重增重均明顯高于假手術對照組（P ＜0.05），可以說明大鼠骨密度低下模型造模成功。大鼠體重異常變化的原因可能是大鼠的卵巢被切除后，雌激素迅速減少，進而引起激素水平紊亂而導致的。與模型對照組相比，陽性對照組和假手術對照組每周體重和體重增重均顯著降低（P＜0.05），而后兩者變化無明顯差異；大豆淫羊藿骨碎補低、中、高劑量組初始體重、每周體重和試驗末體重增重均無顯著性差異（P ＞0.05）。見表1。

表1 實驗各組對大鼠體重的影響Table 1 Effect of every experimental group on body weight of rats

續表1

3.2 實驗各組對大鼠股骨的干重、骨鈣含量及骨密度的影響

由表2 可見，假手術對照組與模型對照組相比，前者的骨鈣含量和骨密度均顯著高于后者（P ＜0.05），證明大鼠骨密度低下的模型造模成功；與模型對照組相比，大豆淫羊藿骨碎補片中、低劑量組的骨鈣含量和骨密度值均無顯著性差異（P ＞0.05），高劑量組中兩者均有顯著增加（P ＜0.05）；所有劑量組的股骨干重與模型對照組比較均未見明顯差異（P ＞0.05）。

表2 實驗各組對大鼠股骨的重量、骨鈣及骨密度的影響Table 2 Effects of every experimental group on femur weight,bone calcium and bone mineral density in rats

4 結論

大豆淫羊藿骨碎補片選用大豆、淫羊藿、骨碎補為原料，是專為骨質疏松人群設計的一種具有增加骨密度、改善骨質疏松癥功能的保健型片劑。本實驗表明，大豆淫羊藿骨碎補片具有增加大鼠骨密度和骨鈣含量的作用。

臨床上利用飲食調節、運動和藥物（鈣劑、氟化物、激素等）[2]等常規方式對骨質疏松的治療雖然起效，但卻存在各種（諸如骨硬化、便秘等）不良反應。近年來，更多的醫、藥學研究者致力于研究采用中藥治療骨質疏松并取得良好的效果[3-5]。大豆中的大豆異黃酮能夠促進大鼠成骨細胞的增殖[6]；淫羊藿中的淫羊藿苷可以促進成骨細胞的生長[7]，并抑制破骨細胞的生成[8]；骨碎補也可促進成骨細胞增殖并抑制破骨細胞對骨的吸收[9]。大豆淫羊藿骨碎補片以大豆、淫羊藿、骨碎補三味中藥材為主要原料，起到了很好的治療骨質疏松、增加骨密度的作用，具有良好的開發前景。