北細辛飲片炮制工藝與藥材質量相關性研究

姜思奇，蔡廣知，赫一鳴，貢濟宇

（長春中醫藥大學藥學院，長春 130117）

北細辛是馬兜鈴科植物北細辛的干燥根和根莖，習稱“遼細辛”。夏季果熟期或初秋采挖，除凈地上部分和泥沙，陰干[1]。細辛首載于《神農本草經》：“味辛溫，主咳逆、頭痛、腦動、百節拘攣、風濕、痹痛、死肌，久服明目、利九竅、輕身長年。”[2]。《名醫別錄》記載：“二月、八月采根，陰干。”現代藥理研究表明，細辛揮發油中的-細辛醚能松弛組胺、乙酰膽堿所致豚鼠離體氣管平滑肌的痙攣，呈量效關系[3]；同時，細辛具有解熱、鎮痛、抗炎、強心、調壓、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗衰老等作用，臨床可用于慢性支氣管炎、類風濕性關節炎、脈管炎、椎間盤突出、肩周炎、鼓膜炎、過敏性鼻炎、耳聾、牙痛、口腔潰瘍、淚囊炎、弱視、痛經、陽痿等疾病的治療[4-7]。關于細辛炮制工藝，2015年版《中國藥典》中將細辛藥材除去雜質，噴淋清水，稍潤，切段，陰干，制成飲片，但未有具體的數據描述。本試驗通過對北細辛藥材進行炮制，結合藥材本身的性質，將藥材潤洗和干燥的時間作為考察因素，以揮發油、浸出物、含水量、馬兜鈴酸I及細辛脂素的含量為指標，在考察炮制工藝對飲片質量影響的同時，選擇合理的工藝流程及參數，在保證飲片質量的同時，考察及優選工藝及參數，以減少馬兜鈴酸I 的含量，為規范飲片生產提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2030 高效液相色譜儀（株式會社島津制作所）；XS105 分析天平、AL204 電子天平（梅特勒－托利多儀器有限公司）；KQ-3200DB數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠）；色譜填充柱：TC-C1（84.6 mm×250 mm，5m）（大連依利特有限公司）。

1.2 試藥

北細辛藥材產地為吉林省靖宇縣，經長春中醫藥大學中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定為馬兜鈴科植物北細辛〔Asarum heterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum（Maxim.）Kitag.〕的干燥根和根莖。

馬兜鈴酸I 對照品（批號：110746-201611，含量：98.9%）、細辛脂素對照品（批號：111889-201203，含量：99.1%）（中國食品藥品檢定研究院），乙腈、磷酸均為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 飲片的炮制工藝

2.1.1 潤制 將藥材倒至揀選臺上，手工去除泥塊、非藥用部位及霉變藥材，凈選藥材稱量，飲用流動水水潤，潤藥時間為0 min、5 min、10 min、15 min、20 min。潤藥結束后，將藥材制成1 cm 的段，稱量，備用。

2.1.2 干燥方式及時間 陰干：在室溫24.6 ℃的環境下，將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2 cm，分別干燥4 h、6 h、12 h、24 h、36 h，1 h 翻動和上、下竄盤1次，測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

烘干：將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2cm；烘干溫度為25 ℃，分別干燥1 h、3 h、5 h、8 h 和10 h，1 h翻動和上、下竄盤1 次，測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

2.1.3 干燥溫度 將待干燥的藥材鋪在烘盤中，厚度為1～2 cm；設定烘干溫度分別為25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃，干燥8 h，測定藥材中揮發油含量變化。

2.2 飲片的減毒工藝

2.2.1 潤制 取凈選合格的藥材，用水浸泡，浸泡時間為0 h、12 h、24 h、36 h、48 h，不能傷水。

2.2.2 陰干 在室溫24.6 ℃條件下，設定干燥時間為12 h、24 h、36 h、48 h 和60 h。測定藥材含水量變化，將含水量小于10.0%的藥材備用。

2.3 細辛脂素與馬兜鈴酸I 含量測定

參考宋雙紅等[8]報道的方法，同時測定藥材中馬兜鈴酸I 與細辛脂素含量。

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱定馬兜鈴酸I對照品10.30 mg 和細辛脂素對照品15.35 mg，分別置于50 mL 和5 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容，得對照品儲備液。分別量取適量儲備液于5 mL 量瓶中，制備成細辛脂素51.75g/mL、馬兜鈴酸I15.30g/mL的混合對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱定北細辛樣品粉末0.5 g（過80 目篩），置于50 mL 具塞錐形瓶中，精確加入70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（500 W，40 kHz）45 min，取出并冷卻，再稱定并補足損失的重量。0.22m 濾膜過濾后，即得供試品溶液。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：C1（8250 mm×4.6 mm，5m）；柱溫：35 ℃；檢測波長：260 nm；流動相：乙腈（A）-0.05%磷酸水（B），梯度洗脫（0～20 min 30%→45%A，20～30 min 45%A，30～35 min 45%→55%A，35～45 min 55%→75%A）。對照品及樣品色譜圖見圖1、圖2。

圖1 對照品色譜圖Fig.1 The reference chromatogram of geniposide

圖2 供試品色譜圖Fig.2 The sample chromatogram

2.3.4 線性關系考察 取馬兜鈴酸I 儲備液，精確稀釋至0.1g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL、3.0g/mL、6.0g/mL、9.0g/mL、15.0g/mL，分別進樣10L，以進樣質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為Y=51 205X 2 069.8（r=0.999 8）。結果顯示，馬兜鈴酸I 在0.1～15.0g/mL 之間與峰面積呈良好的線性關系。

取細辛脂素儲備液，精確稀釋至0.1mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL。分別進樣10L，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為Y=15 281X 12 905（r=0.999 7）。結果顯示，細辛脂素在0.1～3.0 mg/mL 之間與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.6 重復性考察 按照“2.3.2”項下方法，制備5 份供試品溶液，連續進樣，測定細辛脂素與馬兜鈴酸I的RSD 值分別為1.23%、2.19%，表明重復性良好。

2.3.7 穩定性考察 分別取放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 的同一供試品溶液，按照“2.3.3”項下色譜條件連續進樣，計算峰面積。結果顯示，RSD 值為2.53%，表明樣品穩定性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗 精密稱定已知含量的北細辛樣品6 份，分別精密加入馬兜鈴酸I、細辛脂素標品（馬兜鈴酸I0.206 mg/mL、細辛脂素3.07 mg/mL）24L 和650L，按照“2.3.2”項下方法制備成供試品溶液，“2.3.3”項色譜條件下測定峰面積，計算加樣回收率。結果見表1、表2。

表1 馬兜鈴酸I加樣回收率結果Table 1 Results of recovery tests for aristolochic acidⅠ

表2 細辛脂素加樣回收率結果Table 2 Results of recovery tests for asarinin

2.3.9 含量測定 將各實驗項下的樣品按照“2.3.2”項下方法制備成供試品溶液，在“2.3.3”項下色譜條件進行測定，以原藥材的含量為100%，計算各樣品中馬兜鈴酸I 與細辛脂素的減少率。結果見表3、表4、圖3、圖4。

表3 馬兜鈴酸I的含量Table 3 Aristolochic acid I content

圖3 潤洗、浸泡時間與馬兜鈴酸I 減少率關系Fig.3 Relationship between rinse,soaking time and aristolochic acid I reduction rate

圖4 潤洗、浸泡時間對細辛脂素的增加/減少率Fig.4 Increase/decrease rate of ascorbate during rinsing and soaking time

表4 細辛脂素的含量Table 4 Ascorbate content

2.4 水分測定

分別取各干燥時間項下北細辛樣品，按照2015年版《中國藥典》水分測定法測定，計算含水率，結果見表5、圖5。

表5 干燥時間與含水率Table 5 Drying time and moisture content

圖5 干燥時間與含水率關系Fig.5 Drying time and water content diagram

2.5 揮發油測定

分別取各溫度項下北細辛樣品，按照2015年版《中國藥典》揮發油測定法測定，計算揮發油含量，結果見表6、圖6。

表6 干燥溫度與揮發油含量Table 6 Drying temperature and volatile oil content

圖6 溫度與揮發油含量關系Fig.6 Relationship between drying temperature and volatile oil content

2.6 浸出物測定

分別取各實驗項下北細辛樣品，熱浸法測定，用乙醇作溶劑，以原藥材浸出物含量為100%，計算各樣品浸出物的減少率，結果見表7，圖7。

表7 浸出物的含量Table 7 Leachate content

圖7 潤洗、浸泡時間對浸出物的減少率Fig.7 Relationship between washing,soaking time and rate of change of extract

3 結論與討論

經研究可得，將北細辛藥材經過5min 潤洗、24.6℃陰干24 h 或5 min 潤洗、25.0～35.0 ℃8 h 烘干，即可得到符合要求的北細辛飲片；將北細辛藥材的潤洗時間增加至48 h，24.6 ℃陰干48 h，可將有毒物質馬兜鈴酸I由9.87g/g 降到7.99g/g，也將醇溶性浸出物的含量減少14.60%～31.23%。比較陰干和烘干兩種干燥方式數據顯示，烘干更具實用性，溫度越高時間越短，且在不影響北細辛揮發油含量的情況下，溫度最高可設為35 ℃；但在實際生產中，烘干的方式并不能適應于大批量干燥，因此，可根據生產實際恰當選擇。另外，北細辛原藥材經0～20 min 的潤洗過程中，馬兜鈴酸I 及醇溶性浸出物的含量并沒有顯著性變化，在整個過程中各實驗因素對細辛脂素的含量沒有顯著性影響。

對于北細辛飲片的炮制操作，嚴建業等[9]對細辛進行了鹽制、炒焦、米泔水制、堿制、甘草制、醋制、姜制、酒制、堿醋制及蜜制等手段對北細辛進行減毒炮制，但這些炮制品并不常用。本試驗研究的炮制工藝在實際生產中更具實用性，通過調整炮制參數也可對減毒工藝進行改良；但此過程對于藥材中其他未知的水溶性成分有無影響，還有待下一步研究。