胃癌原發灶活檢標本與淋巴結轉移內HER2狀態及臨床病理相關性分析

張曉昉

隨著社會和醫療水平的不斷發展，近些年來胃癌發病率有降低的趨勢，但其死亡率仍位于惡性腫瘤的第一位，是癌性致死亡的主要因素[1-2]。手術治療是胃癌診治主要方法，前期胃癌術后患者五年存活率可達到94%以上，但臨床較多的卻是進展期胃癌，借助化療或手術患者預后效果較差。在研究期發病機制基礎上尋求分子水平治療辦法是目前研究重點，人類表皮生長的因子受體2(HER2)是位于染色體17q21內跨膜受體樣蛋白，其在不同腫瘤組織內均有表達，HER2在胃癌診療內重要性逐步顯現。當前一般以患者胃癌原發灶的組織內HER2狀態為基準[3]，患者在確診時已處于胃癌晚期，此時已無法進行腫瘤切除術，在晚期患者中篩選HER2的陽性患者，使其獲得HER2靶向治療有十分重要意義。因此，本文著重研究原發灶HER2狀態和胃癌臨床病例特征間聯系，為臨床患者治療提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

回顧性分析2014年4月至2016年4月在青海仁濟醫院接受治療的胃癌患者，依據胃鏡活檢和手術標本病檢的結果，選取經病理組織學確診為胃腺癌患者的石蠟標本144例。其中男性82例，女性62例，年齡46～83歲，平均年齡(57.92±11.2)歲，遠端胃癌患者79例，患者腫瘤直徑>5cm 66例，組織學分級中低級70例，高級74例，患者中淋巴結轉移102例，病理分期Ⅰ期15例，Ⅱ期42例，Ⅲ期74例，Ⅳ期13例，Lauren分型中彌漫型/其他有99例，腸型有45例。

1.2 主要試劑

生物素化二抗工作液(由中衫金橋生物制品公司生產)、鼠抗人的HER2單克隆的抗體(由ORIGENE公司生產)、辣根酶標記鏈霉卵白素的工作液(由中衫金橋生物制品公司生產)、DAB的顯色試劑盒(由中衫金橋生物制品公司生產)、封閉用正常山羊的血清工作液(由中衫金橋生物制品公司生產)、FISH的探針、抗原的修復液(由中衫金橋生物制品公司生產)、乙醇和二甲苯等。

1.3 實驗方法

本研究HER2檢驗過程嚴格依據胃癌HER-2的檢測指南組所編寫的實踐指南來進行[4]。

1.3.1 免疫組化染色(IHC)和結果判定[5]研究標本在離開人體內的35 min內標記、切開等初步的處理。固定液為8%中性的福爾馬林，浸泡所固定的組織。樣本都已由病檢部門HE染色并驗證是胃癌，從中選擇手術切除腫瘤的原發灶標本和胃鏡活檢的標本各7例，淋巴轉移的患者取轉移的淋巴組織。手術和活檢的標本IHC的判定依據2011年發布《胃癌HER-2的檢測指南》[6]來進行。

1.3.2 熒光原位雜交(FISH)和結果判定[7]對IHC檢測淋巴轉移灶與原發灶不一致患者進行FISH檢測，在一致患者中隨機選取IHC1+、IHC2+和IHC3+各10例進行FISH的檢測。淋巴結轉移灶、活檢標本和手術標本內IHC2+相關檢查都采用一致的準則：在擴增度最強部位，針對大于21個連續的腫瘤細胞核來進行兩色信號計數與比值的計算：①HER2/CEP17<1.9時，判定是擴增實驗的陰性；②HER2/CEP17>2.3時，判定是擴增實驗的陽性；③HER2/CEP17在1.9與2.3間，則再次進行計數。

1.3.3 HER2的狀態判定[8]IHC 1+與IHC 0判定是HER2陰性；IHC 3+判定是HER2陽性； IHC 2+的患者需要做臨床相關檢測，再判定其陰陽性。

1.4 統計學方法

研究數據應用SAS 9.5軟件來進行分析，率對比使用McNemar χ2來檢驗、持續校正χ2的檢測與Fisher精確的檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 原發灶與胃鏡活檢標本HER2狀態一致性情況對比

所有標本中，胃鏡活檢的HER陽性表達率是23.61%，手術標本是13.89%，兩者HER-2狀態的一致率達86.11%，陰性預測率為83.06%，陽性預測率為65.00%，詳見表1。

表1 胃鏡活檢的標本HER2的狀態與原發灶對比/例

2.2 淋巴結轉移灶的HER2狀態與原發灶一致性情況對比

102例淋巴結轉移患者內有30例是原發灶HER2陽性，其陽性表達率是29.41%，轉移灶HER2陽性是25例，陽性表達率是24.51%，一致性為75.49%，有25例不一致的患者，陽性表達率為24.51%，見表2。

表2 淋巴結轉移灶的HER2狀態與原發灶對比/例

2.3 HER-2狀態與胃癌病理特征的關系

患者性別、年齡、腫瘤大小和腫瘤位置與HER2狀態無關(P>0.05)，患者組織學分級、淋巴結轉移、Lauren分型、TNM分期和浸潤深度與HER2狀態有關(P<0.05)，見表3。

表3 HER-2狀態與胃癌病理特征的關系/例

3 討論

HER2為原癌基因，一般在人類的胎兒期進行表達，在成人組織內低水平的表達，其主要在膀胱癌、胃癌和乳腺癌等上皮的組織腫瘤內表達，在造血系統和神經來源的腫瘤內沒有表達[9]。HER2的表達蛋白是跨膜糖蛋白，有絡氨酸激酶活性，主要作用在細胞DNA的合成前期和合成期中細胞周期素E上，能夠影響到細胞的分化方向和細胞的生長。在細胞二聚化的進程中，HER3和HER2非對成型異源的二聚化比例很高，它能夠激活細胞的信號傳輸，HER2還可以通過自身絡氨酸磷酸化的路徑來激活細胞信號的傳輸，從而對細胞生長的過程產生影響[10-13]。

本文研究中胃鏡活檢標本的HER狀態和胃癌的原發灶一致性是86.11%，淋巴轉移灶的HER2狀態和原發灶一致性是75.49%，兩者差異有統計學意義，說明胃癌原發灶和淋巴轉移灶的HER2的狀態一致性較好，在淋巴的轉移灶或者胃鏡的活檢標本對HER2的狀態進行檢測可以預測到胃癌原發灶內HER2的狀態，特別是患者沒有辦法得到原發灶病理的結論時，對轉移性胃癌患者的靶向治療提供幫助。雖然淋巴的轉移灶和原發灶檢測的HER2結果的不同地方沒有明顯的差異，但在臨床的判斷中，不能以淋巴的轉移灶和活檢的標本來替代原發灶HER2的檢查結果[14-15]。本文研究中，HER2表達胃癌原發灶和相應淋巴結轉移灶具有一致性，但是有學者指出遠處轉移灶與原發灶的不一致率顯著高于區域淋巴結轉移灶和原發灶的不一致率。造成這種差異的因素可能是腫瘤進展過程中亞克窿細胞的選擇，腫瘤的異質性等，而不是檢測方法與結果判讀的差異。如果轉移性腫瘤發生陽性或者陰性轉變，將直接導致治療方式的徹底改變。機體內HER2在正常情況下處于非激活的狀態，當HER2受到某些致癌因素作用以后，其結構或者表達失控而被激活，從而具有腫瘤轉化的活性，可促使細胞發生惡性的轉化。本文研究顯示，患者組織學的分級、淋巴轉移、Lauren分型、TNM分期和浸潤的深度和HER2的狀態對比差異有統計學意義，說明胃癌的產生、進展及轉移與HER2有密切聯系。

綜上所述，在淋巴轉移灶中對HER2進行檢測可以較好地預測胃癌原發灶HER2的狀態；患者的性別、年齡、腫瘤的大小和腫瘤的位置與手術標本HER2的狀態沒有關聯，患者組織學的分級、淋巴轉移、Lauren分型、TNM分期和浸潤的深度和HER2的狀態有關聯。