血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌的診斷價(jià)值

黃鵬翀

卵巢上皮癌(epithelial ovarian cancer，EOQ)又稱為上皮性卵巢癌，數(shù)據(jù)顯示，全球每年新確診為上皮性卵巢癌的婦女約為225萬，每年全球死于卵巢上皮癌的患者約為14萬，臨床針對(duì)該病的主要治療手段為外科減瘤手術(shù)聯(lián)合卡鉑放化療，但患者5年生存率仍低于30%[1]。而EOQ發(fā)病早期并無特殊癥狀，難以診斷，且發(fā)展迅速，嚴(yán)重危害女性生命健康，臨床資料顯示，若在EOQ早期確診并給予有效治療，5年生存率約為90%[2]。微小RNAs(microR-NAs，miRNAs)作為臨床目前研究最熱門的腫瘤檢測(cè)因子群，由其最原始存在形式(pre-miRNA)經(jīng)過一次加工成為長度為70～100個(gè)堿基的miRNAs前體而被命名，越來越多的研究表明，miRNA在人體基礎(chǔ)細(xì)胞發(fā)生變化，如脂肪代謝、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡等過程中起著重要作用[3]。本研究通過檢測(cè)不同患者血清mir-200a水平的變化，分析血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌的診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2016年12月我院收治疑似卵巢上皮癌患者156例，入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡介于18～65歲間女性；②入院時(shí)均經(jīng)二維超聲、三維超聲等影像學(xué)檢測(cè)為疑似病例需進(jìn)行下一步確診；③排除妊娠期或哺乳期婦女；④均簽署知情同意書。根據(jù)組織活檢及細(xì)胞病理學(xué)診斷分為卵巢良性病變組(n=109)與卵巢上皮癌組(n=47)。卵巢良性病變組患者年齡37～61歲，平均年齡(50.21±12.60)歲；黏液性囊腺瘤59例，漿液性囊腺瘤50例。卵巢上皮癌組患者年齡26～63歲，平均年齡(49.65±17.29)歲；按FIGO分類標(biāo)準(zhǔn)和WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期5例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期10例，其中25例患者發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。另取同時(shí)期來我院行健康體檢婦女(n=100)作為對(duì)照組，健康婦女年齡28～60歲，平均年齡(51.26±18.56)歲。上述受試者入院時(shí)采血后均采用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)血清中mir-200a的表達(dá)量。

1.2 方法

所有受試者均在入院時(shí)抽取晨起空腹靜脈血5 ml，標(biāo)本采集后送檢驗(yàn)科高速離心(3 000 r/min)后取上清液后放置于-80 ℃環(huán)境中保存。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定所有樣本中血清mir-200a水平：吸取1 μl反轉(zhuǎn)錄酶、5 μl RNA與3 μl引物(miRNAs特異莖環(huán)引物和TaqMan miRNAs反轉(zhuǎn)錄試劑盒由美國Applied Biosystems公司提供)，將上述反應(yīng)體系放置在16 ℃ 30 min、42 ℃ 30 min、85 ℃ 5 min環(huán)境下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，之后吸取2 μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與10 μl TaqMan引物進(jìn)行混合，上述定量反應(yīng)均放置于GeneAmp PCR 9700 Thermocycler中進(jìn)行PCR擴(kuò)增[4]，后記錄mir-200a相對(duì)水平。針對(duì)卵巢上皮癌組患者進(jìn)行生存分析，分析指標(biāo)包括年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理類型等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示并采用兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，并采用受試者操作特性曲線(ROC)分析血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌診斷的價(jià)值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組受試者血清mir-200a比較

卵巢上皮癌組患者血清mir-200a相對(duì)表達(dá)量為(4.32±0.86)，卵巢良性病變組為(1.24±0.63)，對(duì)照組為(1.10±0.57)，卵巢上皮癌組患者血清mir-200a水平明顯高于對(duì)照組與卵巢良性病變組的(t=27.60,25.50，P<0.05)，對(duì)照組與卵巢良性病變組的血清mir-200a水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.68，P>0.05)。

2.2 mir-200a與卵巢上皮癌臨床病理特征的關(guān)系

血清mir-200a與臨床分期有關(guān)(P<0.05)，與年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性，見表1。

表1 卵巢上皮癌患者血清 mir-200a表達(dá)量與不同臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌的診斷價(jià)值分析

ROC曲線顯示，血清mir-200a診斷卵巢上皮癌的臨界值為3.81，敏感度與特異度分別為82.98%、81.65%。如圖1所示。

圖1 血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌的診斷價(jià)值分析的ROC曲線

3 討論

卵巢癌是婦科三大惡性腫瘤中病死率最高危害最大的婦科常見腫瘤，而上皮性卵巢癌是卵巢癌患者最為常見的組織學(xué)類型，根據(jù)不同卵巢上皮癌的組織學(xué)可再細(xì)化為漿液性卵巢上皮癌、黏液性卵巢上皮癌、透明細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜樣癌、未分化癌及Brenner癌[5]。但卵巢上皮癌的發(fā)病機(jī)制仍不完全清晰，故臨床上仍然沒有針對(duì)性的藥物，主要治療手段仍以外科減瘤手術(shù)聯(lián)合卡鉑放化療為主。調(diào)查顯示，70%卵巢上皮癌患者確診時(shí)已為癌癥晚期，治療后5年生存率25%～30%，而若能在卵巢上皮癌發(fā)生早期即及時(shí)確診并給予相應(yīng)治療，患者5年生存率可高達(dá)90%[6]。miRNA是動(dòng)物體內(nèi)長度為19～25個(gè)核苷酸的非編碼小分子，隨著miRNA的研究熱度上升，大量文獻(xiàn)證明miRNA可通過基因?qū)用嬗绊懜黝惣?xì)胞行為，并在基因?qū)W水平體現(xiàn)出細(xì)胞癌化現(xiàn)象的發(fā)生，并與腫瘤的發(fā)生、分化等過程密切相關(guān)[7]。本研究所選用的mir-200a是mir-200家族中的一員，Iorio MV等發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌患者體內(nèi)卵巢組織的mir-200家族表達(dá)水平明顯高于卵巢良性腫瘤患者[8]，但目前針對(duì)mir-200a與卵巢上皮癌的相關(guān)性研究尚未引入臨床應(yīng)用中。現(xiàn)筆者通過檢測(cè)不同患者血清mir-200a水平的變化，分析血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌的診斷價(jià)值，以期尋找一種更為靈敏的診斷手段。

本研究發(fā)現(xiàn)卵巢上皮癌組患者血清mir-200a明顯高于對(duì)照組與卵巢良性病變組的，說明卵巢上皮癌患者血清mir-200a是明顯有別于健康正常女性與卵巢良性病變患者。研究發(fā)現(xiàn)，卵巢上皮癌患者卵巢組織中mir-200家族主要以mir-200a、mir-200b和mir-200c為主[9]，其中mir-200a水平顯著高于其余兩者[10]。本研究通過生存分析發(fā)現(xiàn)，血清mir-200a與臨床分期有關(guān)，說明腫瘤癌化程度越后期，血清mir-200a水平越高，腫瘤惡性程度越高。除此之外，國內(nèi)外對(duì)mir-200a的研究發(fā)現(xiàn)，mir-200a可作為調(diào)節(jié)因子影響上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程，并通過不可逆性導(dǎo)致E-cadherin丟失，進(jìn)而影響細(xì)胞間緊密連接程度，影響腫瘤細(xì)胞遷移[11]。ROC曲線顯示，血清mir-200a診斷卵巢上皮癌的臨界值為3.81，敏感度與特異度為82.98%、81.65%，對(duì)診斷卵巢上皮癌具有較高的敏感度與特異度。國外Taylor等發(fā)現(xiàn)采用Real-time PCR檢測(cè)卵巢癌患者外周血清與卵巢癌細(xì)胞中mir-200a水平無差異[12]，且血液中mir-200a在經(jīng)歷多次循環(huán)凍結(jié)后更可穩(wěn)定存在，穩(wěn)定性明顯高于現(xiàn)有的CEA、CA135等腫瘤標(biāo)志物，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確。

綜上所述，血清mir-200a對(duì)卵巢上皮癌具有一定的診斷價(jià)值，可作為診斷卵巢上皮癌的輔助指標(biāo)之一。