Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中的表達意義

周洪濤 李山林 劉學進

胃癌是當前常見的消化系統惡性腫瘤，我國胃癌發病率的增速是世界平均水平的2倍左右，當前每年新發病例接近50萬，嚴重威脅著居民的健康[1-2]。腺瘤性息肉是指胃黏膜局限性良性上皮或間質成分增生形成的病變，通常被認為是胃癌的癌前病變。流行病學調查顯示腺瘤性息肉的癌變率比較高，在胃組織的癌變率在50.0%以上[3-4]。腺瘤性息肉與胃癌患者的早期診斷率較低，患者確診時大多數已經屬于中晚期，預后比較差[5]。腺瘤性息肉與胃癌的影像學檢查有一定的誤差性，病理學檢查也存在檢查的創傷性、取樣部位的誤差大、閱片者自身偏倚等不足[6]。隨著現代分子生物學技術、現代免疫組織化學的不斷發展，通過檢測腫瘤細胞特異抗原等來診斷蛋白水平的變化已成為了可能。cyclin D1的擴增和過表達與人體多種腫瘤有關，cyclin D1的過度表達促使細胞過度增殖繼而發生惡變[7-8]。TNFR在多種腫瘤的發生、發展中起到了重要作用，TNFR1可促進IL-6的表達、激活NF-KB信號通路，促進成纖維細胞增殖以及細胞程序化死亡，從而參與調控多種腫瘤血管發生相關基因的轉錄[9-10]。本研究收集相關胃癌病例，對患者的臨床特征進行了回顧性研究，并用免疫組織化學法檢測Cyclin D1及TNFR1的表達水平，探討Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中的表達意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

采用回顧性、隨機抽樣研究方法，選擇2011年12月到2016年8月在我院進行診治的120例胃癌患者與120例腺瘤性息肉患者的組織標本作為研究對象，納入標準：患者臨床病例資料齊全；原發于胃部疾病，非其他部位轉移或復發的胃部疾病病例；所有病例均為初次治療或外院術后治療不徹底3個月以內；研究得到了醫院倫理委員會的批準。排除標準：組織病理學不明確的病例；未行手術或活檢病例；妊娠孕婦與哺乳期婦女；精神疾病患者。

1.2 免疫組化分析

所有標本都給予免疫組化分析，采用 Envision法染色兩步法，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。兔抗人Cyclin D1、TNFR1多克隆抗體都由英國Abcam公司提供，工作濃度為1∶100。快速免疫組化檢測試劑盒由福州邁新生物技術開發有限公司提供，嚴格按照試劑盒說明書進行操作；英國Abcam公司提供Breast carcinoma作為陽性質控片。95%乙醇、85%乙醇、蘇木精、PBS 緩沖液、二甲苯、無水乙醇、蒸餾水、內源性過氧化物酶阻斷劑、中性樹膠等由本院保存。

由兩名高年資病理醫師采用雙盲法進行染色結果判斷，TNFR1陽性表達為細胞膜和細胞質出現棕黃色或棕褐色顆粒，cyclin D1陽性染色為腫瘤細胞的胞核出現棕黃色顆粒。雙盲法隨機抽取有代表性的10個連續的高倍視野(×400倍)，每個視野計數100個細胞，TNFR1、cyclin D1陽性染色的腫瘤細胞占所有腫瘤細胞的比例≥20%被視為陽性表達。

1.3 調查分析

選擇Microsoft Excel 2010軟件收集2組的臨床資料信息，進一步調閱胃癌患者的病史，通過查閱隨訪資料和電話等方式對患者進行隨訪，記錄內容包括患者患病年齡、聯系人及聯系電話、性別、通訊地址、病理診斷、臨床診斷等。

1.4 統計方法

選擇SPSS 20.00軟件進行分析，TNFR1、cyclin D1腺瘤性息肉與胃癌組織間表達差異的比較采用卡方分析檢驗，TNFR1、cyclin D1和患者臨床病理資料間的關系采用卡方分析檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 一般資料對比

在120例胃癌患者中，男性68例，女性52例；年齡35～83歲，平均年齡(54.22±12.49)歲；Dukes分期：A期+B期48例，C期+D期72例；淋巴結轉移：有60例，無60例；分化程度：高分化60例，中分化40例，低分化20例；黏液癌：有20例，無100例；浸潤深度：<肌層40例，≥肌層80例。

在120例腺瘤性息肉患者中，男性65例，女性55例；年齡32～84歲，平均年齡(54.11±9.78)歲。2組性別、年齡對比無顯著差異(P>0.05)。

2.2 Cyclin D1及TNFR1表達對比

胃癌組織的Cyclin D1及TNFR1陽性表達率分別為75.0%和65.0%，腺瘤性息肉組織分別為3.3%和15.0%，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 胃癌與腺瘤性息肉組織的Cyclin D1及TNFR1陽性表達率對比(例，%)

2.3 Cyclin D1及TNFR1表達的相關性

120例胃癌組織中有75例Cyclin D1及TNFR1蛋白的表達同時呈陽性，腺瘤性息肉組織中只有3例同時呈陽性，Spearman等級相關分析顯示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表達呈正相關(γ=0.563,P=0.002)。

2.4 胃癌組織Cyclin D1及TNFR1表達與臨床特征的相關性

Cyclin D1及TNFR1在胃癌組織中的陽性率與胃癌的浸潤深度、淋巴結轉移、黏液癌、Dukes分期呈正相關(P<0.05)，與腫瘤的分化程度呈負相關(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組織Cyclin D1、TNFR1陽性表達率與臨床特征的相關性(例，%)

3 討論

胃癌的發生與發展是由多因子參與調控的復雜過程，早期癥狀不明顯，多由腺瘤性息肉發展而來，病情發現時多為癌癥中晚期，因此死亡率一直居高不下[11-12]。

目前胃癌與腺瘤性息肉發病機理尚未完全了解，與其它腫瘤一樣，胃癌與腺瘤性息肉的發生歸因于基因與環境的相互作用，正是這些基因多態影響或“修飾”不同個體對環境因素作用的敏感性[13]。不同基因的表達在息肉形成、癌變過程中的作用及其胃癌發生、發展之間的關系當前被廣泛深入分析與研究[14]。

細胞周期調控紊亂是導致腫瘤發生的重要環節，Cyclin D1是細胞周期調控因子，是癌基因，有正性調節作用[15]。有研究表明cyclin D1隨著胃黏膜病理變化加重，Cyclin D1陽性表達率顯著增加[16]。TNFR1是分子量為55 kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，廣泛分布于正常細胞膜與腫瘤細胞表面。TNFR1在引起細胞凋亡、抗腫瘤和抗病毒感染中發揮重要作用，也參與自身免疫性疾病[17]。本研究顯示胃癌組織的Cyclin D1及TNFR1陽性表達率分別為75.0%和65.0%，腺瘤性息肉組織分別為3.3%和15.0%，對比有顯著性差異(P<0.05)；Spearman等級相關分析顯示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表達呈正相關(γ=0.563,P=0.002)。相關研究也表明TNFR1也可以介導細胞活化信號和增殖信號，誘導一氧化氮合成酶和白介素-8的活性，活化核轉錄因子和激活蛋白[18]。cyclin D1基因的擴增是重要的胃癌促發因素，可能發生在胃黏膜上皮癌變的早期階段，可作為一個潛在的胃癌早期診斷分子標志物[19]。

生長在人體黏膜表面上的贅生物統稱為息肉，也是指人體組織表面長出的多余腫物。腺瘤性息肉是胃癌的癌前狀態之一，也決定著胃癌的發生與發展。cyclin D1基因既是細胞周期G1/S期轉換的正向調節因子，也是G1期細胞增殖信號的關鍵蛋白[20]。臨床研究表明在頭頸部鱗狀細胞癌、結直腸癌、肺癌、肝細胞癌、乳腺癌、食管癌等多種惡性腫瘤中存在cyclin D1基因擴增、重排及過表達[21-22]。

TNFR1引起的作用比較廣，包括殺細胞活性、抗病毒活性等。本研究顯示Cyclin D1及TNFR1在胃癌組織中的陽性率與胃癌的浸潤深度、淋巴結轉移、黏液癌、Dukes分期呈正相關(P<0.05)，與腫瘤的分化程度呈負相關(P<0.05)。有研究表明在胃癌的不同分化程度上，Cyclin D1及TNFR1表達的差異均無統計學意義，但是Cyclin D1及TNFR1的表達呈正相關，提示兩者在腺瘤性息肉與胃癌的發生中可能具有協同作用[23]。然而本研究也存在缺陷，沒有在腺瘤性息肉與胃癌組織中針對Cyclin D1及TNFR1做動態的檢測，將在下一步進行深入分析。

總之，Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉與胃癌中都呈現過表達狀況，與腺瘤性息肉與胃癌的發生發展密切相關，兩者的早期檢測可為進一步提高胃癌的診治水平提供思路。