丁香酚誘導癌相關成纖維細胞 的凋亡及其機制的研究

徐江昊 何建霄 文渚媛

【摘 要】

目的：研究丁香酚誘導癌相關成纖維細胞的凋亡及其機制。

背景：根據美國癌癥研究協會2017年發布的年度癌癥進展報告，我們發現癌癥已經成為一個嚴重的全球性問題，癌癥患者的數量正在增加。然而，傳統的癌癥治療方法面臨許多挑戰，因此我們的實驗試圖研究有效的方法來解決癌癥問題。

方法：采用MTT 法檢測丁香酚對細胞活性的影響，采用Western blot法檢測丁香酚對相關凋亡蛋白的影響，采用流式細胞術檢測丁香酚是否促進了與癌相關成纖維細胞的凋亡。

結果：丁香酚對癌相關成纖維細胞（CAF）有抑制作用。

1.研究背景

癌癥是世界范圍內一個主要的公共衛生問題，也是導致大多數國家人口死亡率居高的主要原因。然而，傳統的癌癥治療，包括手術、放療和化療，由于其副作用和高復發率，面臨著嚴峻的挑戰。因此，治療惡性腫瘤迫切需要安全有效的治療策略。

天然產物對藥物開發很重要，許多天然物質的提取物，例如紫杉醇和MPSSS，都具有很強的抗腫瘤作用。丁香酚是從丁香中提取的精油主要成分，同時具有廣泛的藥理作用——參與免疫調節和抗炎反應。丁香酚很早就開始作為防腐劑、抗菌劑和止痛劑被使用。美國食品和藥物管理局已經宣布丁香酚是安全的，并且是非致癌和非誘變的。近年來，有多項研究證明了丁香酚對各種癌細胞系和動物模型具有抗癌活性。

2.材料與方法

2.1材料

2.2方法

3.結果與分析

3.1 細胞毒性試驗檢驗丁香酚對細胞活力的影響

（1）用不同物質的量濃度的丁香酚處理正常成纖維細胞（NF），24 小時后，用MTT 法檢測細胞活力。

（2）用相同物質的量濃度梯度的丁香酚處理癌相關成纖維細胞（CAF），24小時后，用MTT 法檢測細胞活力。

如圖3所示，數據表明，在0到1.2mM 濃度范圍內，丁香酚對正常成纖維細胞活力沒有顯著性影響；而癌癥成纖維細胞隨濃度增加活性顯著降低，這說明丁香酚對腫瘤微環境中的成纖維細胞有選擇毒性。

結果表明，隨著丁香酚濃度的升高，癌相關成纖維細胞活力顯著下降。

3.2 流式細胞術——丁香酚促進相關成纖維細胞凋亡

結果顯示（圖4、圖5），隨著丁香酚濃度升高，Annexin V 陽性（三、四象限）和早期凋亡（第四象限）細胞的比例不斷增大。

3.3.Western Blot——丁香酚對凋亡相關蛋白表達水平的影響

使用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色的深度，可以得知特定蛋白質表達水平量。

（一）Bax 促進腫瘤凋亡作用。

（二）BCL-2 （B-cell lymphoma-2） 是細胞凋亡中最受重視的癌基因之一。

（三）GAPDH 不受藥物處理的影響，作為內參蛋白，即參照物。

如圖6，結果顯示，在0.6mM 情況下，隨著時間的推移，Bax 增值，BCL-2 顯著減少，GAPDH 幾乎沒有變化。

結論：初步說明丁香酚對癌癥相關成纖維細胞有抑制作用。