豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗創(chuàng)制與應用

主要完成人：

馮 力（中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

時洪艷（中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

陳建飛（中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

佟有恩（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司），

張 鑫（中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所），

王牟平（哈爾濱國生生物科技股份有限公司）

提名單位：黑龍江省

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和豬輪狀病毒（PoRV）引起的豬病毒性腹瀉可導致7日齡以內(nèi)仔豬死亡率高達100%，導致“連窩端”，被譽為哺乳仔豬死亡的“第一殺手”，且無有效治療藥物，每年因此造成的經(jīng)濟損失超過百億元。針對我國這三種病毒普遍存在且混合感染日趨嚴重的現(xiàn)實問題，為遏制其帶來的嚴重產(chǎn)業(yè)危害，中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所研究員、豬消化道傳染病創(chuàng)新團隊首席科學家馮力帶領(lǐng)項目團隊歷經(jīng)12年科學攻關(guān)，發(fā)明了我國首個安全高效豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒（G5型）三聯(lián)活疫苗（以下簡稱豬病毒性腹瀉三聯(lián)活疫苗），攻克了三種病毒混合感染無疫苗可用的產(chǎn)業(yè)難題，實現(xiàn)了豬病毒性腹瀉精準高效防控。其領(lǐng)銜的“豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒三聯(lián)活疫苗創(chuàng)制與應用”項目獲2018年度國家技術(shù)發(fā)明獎二等獎。

在TGEV、PEDV、PoRV三種病毒中，有兩種冠狀病毒，其血清型單一，但是輪狀病毒血清型眾多，中國流行情況如何，必須先摸清楚，疫苗的研發(fā)才能有的放矢。為了解疫情，掌握豬腹瀉病的流行和感染狀況，摸清輪狀病毒優(yōu)勢基因型，馮力及其團隊克服養(yǎng)豬場都建在遠離城市的農(nóng)村或山區(qū)，交通極不方便的困難，跋山涉水，深入疫情發(fā)生地開展流行病學調(diào)查，明確了三種病毒是我國主要腹瀉病原，在眾多的豬輪狀病毒基因型中，G5型為優(yōu)勢基因型，為疫苗的研發(fā)提供了堅實有力的科學依據(jù)。

馮力介紹，三聯(lián)活疫苗不是單單把三個病毒混在一起那么簡單，為保證三個病毒混在一起效果不打折，在如何提高效價方面他們投入了大量的精力。此外，在疫苗株與野毒株的區(qū)分，包括檢驗工作上他們同樣遇到了很多難題，但逢山開路、遇水搭橋，難點被他們一一解開。

通過堅持不懈的攻關(guān)，他們發(fā)明了適應傳代細胞系的安全性高、免疫原性好且具有獨特分子標記的弱毒株，攻克了三種豬腹瀉病毒難以適應細胞、致弱過程中免疫原性減弱、強弱毒株難以區(qū)分的世界性難題。在病毒致弱過程中，采用敏感細胞系和未吃初乳仔豬交替繼代，結(jié)合固相病毒蝕斑克隆及全基因組測序等技術(shù)，優(yōu)選安全性高、免疫原性好的克隆株，獨創(chuàng)了豬腹瀉病毒分離致弱體系，發(fā)明了安全、穩(wěn)定、免疫原性好并具有獨特分子標記的三種弱毒株，為三聯(lián)活疫苗的創(chuàng)制及產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定了關(guān)鍵性基礎。除此之外，他們創(chuàng)建的傳代細胞系替代原代細胞系的生產(chǎn)新工藝，突破了原代細胞培養(yǎng)過程中外源病毒污染難以控制的技術(shù)瓶頸，能降低生產(chǎn)成本約2/3，為疫苗制造與檢驗規(guī)程及質(zhì)量標準的制定提供了新路徑。

該項目產(chǎn)品2014年獲得國家二類新獸藥證書，并在2015年3月24號成功上市。為了將項目科研成果盡快應用到生產(chǎn)實際，馮力及其團隊深入基層，開展豬病毒性腹瀉防控知識合技術(shù)的宣傳，手把手將技術(shù)教給養(yǎng)殖戶和技術(shù)員。目前，三聯(lián)活疫苗已推廣到我國除臺灣、香港、澳門以外的所有省區(qū)市，累計推廣2560萬頭份，免疫覆蓋仔豬1.54億頭，實現(xiàn)銷售收入2.01億元。對三種病毒混合感染引起的腹瀉防控收到了很好的效果，斷奶仔豬數(shù)得到了提升，達到了一針免疫防控三種疫病的效果。同時，因為減少了免疫次數(shù)，降低了免疫勞動強度，減少了免疫應激，極大方便了免疫接種，受到使用者的一致好評。該項目成果相繼獲得國家發(fā)明專利2項；國家二類新獸藥證書1項；黑龍江省技術(shù)發(fā)明獎一等獎1項，中國專利優(yōu)秀獎1項，中國農(nóng)業(yè)科學院杰出科技創(chuàng)新獎1項；制訂行業(yè)標準2項；發(fā)表文章百余篇，并被Nature等雜志引用，極大地推動了國內(nèi)外三種腹瀉病防控理論與技術(shù)體系的豐富和完善。