高效液相色譜法測定青蒿中東莨菪內酯含量

陳虹潔 梁巧

摘 要：東莨菪內酯作為一種天然香豆素類化合物，是一種天然的具有明顯的抗炎、祛風、止痛和祛痰等功能的物質，被廣泛應用于醫藥保健等領域。研究發現，青蒿中也存在東莨菪內酯。我國是青蒿比較豐富的國家，因此研究從青蒿中提取東莨菪內酯，從資源利用角度和經濟方面具有重要意義。

本文在超聲提取青蒿中東莨菪內酯的過程中，建立了以超聲時間、超聲溫度、溶劑濃度以及料液比四個單因素為基礎，進行了4因素3水平的正交試驗設計與綜合分析，并利用高效液相色譜法對最佳工藝條件下提取青蒿中東莨菪內酯含量進行檢測，為規模化提取純化東莨菪內酯提供可以借鑒的資料。

關鍵詞：青蒿；東莨菪內酯；超聲提?。桓咝б合嗌V法

1東莨菪內酯的提取與測定

東莨菪內酯是一種香豆素類化合物，因為在有機溶劑中溶解度比較大，所以本試驗利用有機溶劑提取法從青蒿中提取東莨菪內酯，以青蒿為原料，對超聲時間、超聲濃度、溶劑濃度及料液比四因素[1]，利用正交設計，獲取最佳提取工藝條件，用HPLC法測定東莨菪內酯的含量[2]。

1.1樣品中東莨菪內酯的提取

利用藥品粉碎機將青蒿藥材粉碎成粉末狀，過80目篩后，存放于燒杯中。根據因素水平表1.1所對應的超聲時間、超聲溫度、甲醇濃度及料液比，進行回流提取，再用中速定量濾紙過濾，濾液承接于25mL容量瓶中，重復沖洗濾渣后，將溶液定容至25mL，至于避光處存放。

1.1.1標準樣品東莨菪內酯含量的測定

分別移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2.0mL，0.062g/L的東莨菪內酯標準品溶液于25mL比色管中，利用甲醇（AR）溶液稀釋至10mL刻度線，搖勻。因為東莨菪內酯在306nm處有一特征峰，因此在分光光度計上測定各溶液在306nm波長下的吸收值[3]。

1.1.2標準曲線的繪制

以所測吸光度值A306為縱坐標，質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線并得到標準曲線方程。同樣條件下測定樣品溶液的吸光度A306，根據標準曲線方程計算東莨菪內酯的含量[4]。

1.1.3最佳提取條件的確定

以東莨菪內酯提取率作為考察指標，對數據作方差分析，獲得最佳提取工藝方案（最佳超聲時間、最佳超聲溫度、最佳甲醇濃度及最佳料液比）。

1.2 HPLC法測定青蒿提取液中東莨菪內酯的含量

①色譜條件

1）色譜柱：Hypersil-ODS2色譜柱（4.6mm*250mm，5um）

2）流動相：（1：4）甲醇（色譜純）

3）檢測波長：306nm

4）壓力：8.0MPa

5）流速：0.9 ml/min

②待測樣品的HPLC測定：

移取1mL東莨菪內酯標準品溶液至10mL容量瓶中，用甲醇（GR）溶液稀釋至刻度線，然后分別精密吸取東莨菪內酯標準品溶液1，3，5，10，15，20μL進行HPLC測定，得到峰面積，根據待測樣品的總體積計算出東莨菪內酯的總含量并根據待測物的原始質量計算東莨菪內酯百分比。

1.3提取結果分析

在本實驗過程中對超聲提取中影響青蒿中東莨菪內酯的提取率的超聲溫度、超聲時間、甲醇濃度和料液比四個因素進行單因素試驗。通過單因素試驗發現，每個提取參量對青蒿中東莨菪內酯的提取率的影響并非是線性的。因此在單因素試驗的基礎上，以青蒿中東莨菪內酯的百分含量為試驗的實驗指標，利用L9（34）即4因素3水平進行正交試驗設計分析方法，對青蒿中東莨菪內酯的超聲提取工藝進行了優化研究。又通過極差分析，確定了各個因素對提取率影響大小的順序為：料液比>超聲溫度>甲醇濃度>超聲時間。結合影響的主要和次要因素，經過驗證實驗發現，當實驗條件為超聲溫度50℃，超聲時間30min，甲醇濃度60%，料液比1：48時，東莨菪內酯的提取率為最高。隨后通過對標準品以及樣品溶液進行精密度、線性關系、穩定性以及重復性試驗[5]發現，不管是標準品或是樣品溶液均可利用HPLC可靠并順利的完成樣品溶液濃度的測定。

2 總結與討論

2.1總結

本實驗通過以青蒿為原料，采用以超聲時間、超聲溫度、料液比及甲醇濃度為四因素三水平的正交實驗，其中四因素均為可優化東莨菪內酯的理化極限的條件，使得正交實驗數據更為可靠，得到超聲提取東莨菪內酯的最佳工藝條件：超聲溫度30℃，超聲時間30min，甲醇濃度60%及料液比1：48。在高效液相色譜法檢測過程中，通過對精密度、重復性、線性回歸以及穩定性的數據發現該色譜條件下精密度、穩定性以及重復性均良好，且線性關系較好，得到青蒿中東莨菪內酯的含量高至0.0819mg/g。

2.2討論

提取東莨菪內酯時，易志彪[6]、林永德[7]、張紫佳[8]等研究者多以提取方法、提取次數、提取溶劑、提取前水解時間、水解溫度等因素考慮。對比本實驗方案發現，甲醇是提取較好的提取溶劑；超聲提取為操作最簡單、可行性最強的提取方法；在以超聲提取為前提下，料液比、超聲時間、超聲溫度及甲醇濃度為最具影響的四因素。

HPLC法測定東莨菪內酯時，易志彪[6]、林永德[7]、劉偉[9]等使用的流動相大多為不同比例的水、冰醋酸及乙腈，但觀察發現，（1：4）甲醇為流動相時，分離情況良好，出峰情況良好。

用紫外分光光度法測定東莨菪內酯，雖然方便快速，但精確度不夠，只能作為參考，尤其是大批量從數據篩選的時候，用高效液相檢測的分辨率和靈敏度高，重復性好，應該范圍相對廣[10]。在實驗中，采用HPLC法，通過比較標準樣品的圖譜，可以很直觀的鑒定出東莨菪內酯是否存在以及含量。

參考文獻：

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[3] 譚亮，張琦，范旭航，陳曉輝，錢忠直，畢開順，賈英.高效液相色譜法同時測到的旱芹中東莨菪內酯和濱蒿內酯含量[J].中南藥學， 2010年7月， 8（7）：583-587.

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[5] 閆寒，李愛媛，趙一，李啟云，李滄海等.青蒿總香豆素抗熱應激作用及其機理的研究，中國實驗方劑學雜志，2009，12（15）

[6] 易志彪，曾寶，賴小平.HPLC法測定枸杞中的東莨菪內酯含量[J].亞太傳統醫藥， 2010年4月， 6（4）：13-15.

[7] 林永德，陳超鳳，許振朝.HPLC法測定羅漢果止咳片中東莨菪內酯的含量[J].廣西醫藥， 2009年11月， 31（11）：1698-1699.

[8] 張紫佳，張勉等. 丁公藤類藥材及其混用品中總東莨菪內酯的含量測定[J]. 中國藥學雜志， 2004， 39（12）：936-938.

[9] 孫玉剛，秦續文.高效液相色譜法同時測定青蒿綠原酸、隱綠原酸、東莨菪內酯含量，天津中醫藥，2012 ，29 （5）：484-486

[10] 張曉榮，彭光花，陳功錫，徐定華，常大成等.黃花蒿殘渣揮發油化學成分及其抑菌活性分析，中草藥，2011，42（12）.

作者簡介：

第一作者，陳虹潔，（1989.4-）女，漢族，重慶市，本科，重慶科技學院，助教，食品安全與衛生，重慶輕工職業學院。

第二作者，梁巧，（1988.1）女，漢族，重慶市，本科，重慶大學，助教，食品安全與衛生，重慶輕工職業學院。