麝香保心丸對代謝綜合征大鼠血管重構的影響

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1.深圳市龍崗區人民醫院，廣東 深圳 518172；2.汕頭大學醫學院第一附屬醫院分子生物學實驗室，廣東 汕頭 515041

代謝綜合征[1](Metabolic Syndrome，MS)包括高血壓、高脂血癥和血糖代謝異常等心血管危險因素，可導致血管內皮功能障礙和動脈粥樣硬化等心血管疾病的發生發展，并導致血管重構，是目前冠心病、腦梗塞等常見心腦血管疾病發病率升高的主要因素之一。因此，防治MS導致的血管重構除了控制相應的危險因素，還需要具有血管保護或抗動脈粥樣硬化的藥物。麝香保心丸具有舒張血管、抑制炎癥反應、抗動脈粥樣硬化及抑制血管鈣化等作用[2-3]，在臨床上治療心絞痛、心肌梗死等發揮了很大的作用，能否改善MS導致的血管重構尚不清楚。為此，本實驗在MS大鼠模型上，用麝香保心丸干預，觀察血管重構的變化，并觀察血清MCP-1及主動脈相應受體表達的變化，初步探討相關可能的機制。

1 材料

1.1 動物 無特定病原體級(SPF)雄性SD大鼠由汕頭大學醫學院實驗動物中心提供，8周齡。

1.2 材料 高果糖飼料(60%，北京華阜康生物科技有限公司)；MCP-1試劑盒(北京華英生物研究所)；MCP-1受體一抗、二抗及DAB顯色試劑盒(武漢博士德)；其余為進口或國產分析純試劑。麝香保心丸(批號：12050401，上海和黃藥業有限公司)。

1.3 儀器 BP-2010A鼠尾動脈測壓儀(北京軟隆生物)；Beckman Coulter AU5800生化儀；血糖試紙及快速血糖儀購自美國雅培。

2 方法

2.1 MS動物模型制備 參照參考文獻[4]制備大鼠MS模型，取雄性SD大鼠8只作為正常對照組，普通飼料喂養；取16只雄性SD大鼠作為MS組，高果糖飼料喂養8周后，檢測血糖、血脂和尾動脈壓水平，以確定MS模型建立成功(高血糖、高血脂及高血壓狀態)。將造模成功的MS大鼠隨機分成MS組(8)和MS+麝香保心丸組(8)，繼續高果糖飼料喂養，MS+麝香保心丸組予麝香保心丸25 mg/kg灌胃1次。飼養4周后稱重后，3%水合氯醛麻醉，心臟取血，血液置入含有促凝劑的5 mL塑料試管中，充分混勻，4度離心分離血清，-80℃保存。摘取胸主動脈，用冰生理鹽水沖洗后，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。

2.2 血糖、甘油三酯和血壓的測定 禁食8 h后尾動脈取血，采用快速血糖儀檢測血糖，并分離血清，采用Beckman Coulter AU5800生化儀檢測血清甘油三酯水平；采用鼠尾動脈測壓儀測量血壓。

2.3 血清MCP-1含量的測定 將血清送至北京華英生物研究所，采用放射免疫法測定血清MCP-1含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。

2.4 免疫組織化學法檢測主動脈組織MCP-1受體的表達 采用4%多聚甲醛固定胸主動脈，石蠟包埋，制作4 μm厚切片，常規脫臘入水，抗原修復，封閉非特異性抗原，滴加一抗過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸酒精分化、脫水、透明、中性樹膠封片，具體步驟按說明書進行。

3 結果

3.1 大鼠MS模型特征 經高果糖飼料喂養8周后，大鼠血清血糖、甘油三酯和尾動脈壓水平明顯高于正常對照組(P<0.01)，提示MS模型建立成功。見表1。

組別n血糖/mmol/L甘油三酯/mmol/L平均動脈壓/mmHg正常對照組80.80±0.452.88±00.64100.98±6.35MS組161.92±0.68a7.67±0.68a135.35±7.55Ia

注：與正常對照組比較，aP<0.01。

3.2 Masson染色 采用Masson染色觀察大鼠主動脈組織，與正常組比較，MS大鼠發現血管全層均有明顯膠原沉積，血管細胞和彈力纖維排列紊亂，管壁增厚，用麝香保心丸干預后膠原沉積有所改善。見圖1。

3.3 大鼠血清MCP-1含量的變化 MS組血清MCP-1含量明顯增加(P<0.01)，采用麝香保心丸干預后，血清MCP-1含量有所下降(P<0.01)。詳見表2。

3.4 大鼠胸主動脈組織MCP-1受體表達的變化 與正常組相比，MS組主動脈組織MCP-1受體表達明顯上調，用麝香保心丸干預后，主動脈組織MCP-1受體表達有所下調。見圖2。

組別n血清MCP-1含量/μmol/L正常對照組866.55±4.35MS組 884.75±4.55a MS+麝香保心丸組871.22±4.35b

注：與正常對照組比較，aP<0.01；與MS組比較，bP<0.01。

4 討論

隨著近年來國民生活條件改善和生活方式的改變，肥胖人群越來越多，導致MS的患病率明顯增加，包括高血壓及糖脂代謝異常等多種心血管危險因素，這些危險因素均可導致血管損傷，最終導致血管重構的發生。實驗研究發現MS大鼠模型可出現血管重構，表現在血管內膜及中膜不均一增厚，結構紊亂，平滑肌細胞增殖明顯，涉及的可能分子機制包括炎癥因子、一些血管活性因子及脂肪細胞因子等生物效應相關[4-5]。因此，探索參與血管重構的機制，為其防治提供新的策略，具有重要的間接臨床意義。

本實驗采用高果糖飼料喂養后，血清血糖、甘油三酯水平及尾動脈壓明顯高于對照組，提示大鼠MS模型建立成功。同時發現MS大鼠主動脈大量膠原沉積，血管細胞排列紊亂，提示主動脈重構，與國內外學者研究一致。同時血清MCP-1水平明顯高于正常組，同時主動脈組織MCP-1受體的表達亦同步下調，而MCP-1是體內重要的促炎癥因子，可誘導炎癥細胞聚集，產生并加重局部組織的炎癥反應，而炎癥貫穿于血管重構始終，是導致血管功能及解剖結構異常重要分子機制之一，加劇動脈粥樣硬化的發生發展，也促進血管重構的發生與發展。

麝香保心丸在臨床上作為一種常用治療冠心病的有效藥物，對緩解心絞痛、改善心肌缺血等有顯著的作用。本實驗用麝香保心丸干預后，MS大鼠主動脈膠原沉積有所減輕，血清MCP-1水平明顯下降，主動脈組織MCP-1受體表達同步下調，這提示麝香保心丸有明顯的抑制炎癥反應的作用，并可改善血管重構，可能是改善血管重構的重要分子機制之一。

實驗發現麝香保心丸可改善MS大鼠誘導的血管重構并抑制MCP-1及其受體的表達，這將為血管重構的機制研究及防治提供新的思路和作用靶點，具體的分子作用機制和細胞內信號轉導通路尚需進一步研究證實。由于植物提取物成分和有效成分作用靶點的復雜性，中藥成分對保護血管內皮功能的藥理學作用尚需進一步研究。