復方紅景天滴丸的制備工藝研究*

鄭路靜 ，劉慶煥 ，陶遵威

（1.天津中醫藥大學，天津 301617；2.天津市醫藥科學研究所，天津 300020）

缺血性腦損傷可導致腦細胞壞死或凋亡，其高致殘率、高致死率，給現代家庭與社會帶來了沉重的負擔[1-2]。隨著人們對腦缺血認識的逐漸加深，大量科研數據為改善該病癥提供了新的方法與思路。天津市醫藥科學研究所以“行氣活血、化瘀通絡”為原則，聚焦缺血性腦損傷“氣虛血滯、脈絡瘀阻”的病機，組方紅景天、延胡索、川芎以及冰片為復方，成為第一個使用該方治療腦缺血損傷的機構。藥理學實驗表明紅景天復方可減緩海馬組織神經細胞凋亡，對腦缺血損傷起到保護作用[3]。本研究對該方的提取及制劑工藝做進一步探究，運用高效液相色譜法（HPLC）技術，以君藥中紅景天苷的含量及干膏率為綜合評價指標，采用正交實驗優選復方紅景天的醇提工藝，并考察了滴丸的成型工藝，以期為工業化生產提供理論依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC-20AT，日本島津公司），PDA檢測器（日本島津公司），ME203E電子天平（METTLER TOLEDO上海有限公司）。

1.2 材料 紅景天、延胡索等藥材均購自天津市中藥飲片廠有限公司，紅景天苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110818-201005），PEG4000、PEG6000（天津市瑞金特化學品有限公司），二甲基硅油（天津市化學試劑供銷公司），甲醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 提取方法 按處方比例精密稱定各藥材，放置圓底燒瓶中，在85℃條件下水浴加熱，進行回流提取，收集濾液，測定相關理化指標。

2.2 評價指標的測定

2.2.1 干膏率的測定 按處方配比稱量各藥材9份，根據L9（34）正交實驗設計表加乙醇回流，過濾，合并濾液，精密吸取20.0 mL提取液至已干燥恒重的蒸發皿中，蒸干至恒質量，干燥器內冷卻，稱定干膏質量，計算。

2.2.2 紅景天苷含量測定 紅景天苷檢測波長的確定：通過查閱資料，紅景天苷（Salidroside）在波長為223、275nm時均存有較強吸收峰[4-5]。實驗前期將5 mg紅景天苷標準品分別在223、275nm波長下進行檢測，結果顯示223 nm波長下，紅景天苷的峰面積高于275 nm，且雜質干擾少，故本實驗在223 nm波長下進行檢測。

色譜條件：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相∶甲醇-水（85∶15）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：223 nm；柱溫：室溫。

對照品溶液的制備：精密稱定13.45 mg紅景天苷標準品，置于100 mL量瓶，加70%甲醇溶解，配置成濃度為0.134 5 mg/mL溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 精密吸取10 mL提取液，轉移至蒸發皿，蒸干，加70%甲醇溶解，定容至10mL，留取續濾液過0.45μm濾膜，進樣，計算含量。

2.2.3 方法學考察 線性關系考察：配置系列濃度對照品溶液，進樣到液相色譜儀，在上述色譜條件下分析，橫坐標為對照品進樣量，縱坐標為峰面積積分值，繪制標準曲線，得回歸方程Y=1×106X-10 118（r=0.999 7），進樣量線性范圍 0.134～2.69 μg。

精密度實驗：取對照品溶液，連續進樣6次，得紅景天苷峰面積值RSD為0.67%，精密度良好。

穩定性實驗：取“2.2.2”項下同一供試品，室溫條件下，分別于 0、2、4、8、12 和 24 h 進行色譜測定。結果顯示，紅景天苷含量的RSD為1.90%，表明樣品在24 h穩定。

重復性實驗：相同條件下，按供試品儲備液制備方法平行提取6份，進樣測定，記錄HPLC圖，RSD1.28%，本方法重復性良好。

加樣回收率：取6份已知含量的提取液各5 mL，精密量取，分別精密加入配制濃度為215.2 μg/mL的對照品溶液，各5 mL，折合成紅景天苷的含量為1.076 mg。按“2.2.2”項下操作方法制備，進行色譜測定，計算平均回收率為100.27%，RSD 1.99%。

2.3 提取工藝設計 結合藥材性質和參考文獻[6-7]，確定采用乙醇回流提取，選定影響提取的幾個主要因素。實驗前期采用單因素實驗，對時間、次數、濃度和倍數進行考察。其提取工藝因素與水平設計，見表1。

表1 因素水平

2.4 正交實驗設計優選提取方法 參照文獻[8-9]。醇提部分以君藥中紅景天苷的提出量和干膏率作為考察指標。選用綜合加權評分法優選提取工藝，權重系數分別為0.7，0.3，綜合評分=（0.7×紅景天苷含量/最大紅景天苷含量）×100+（0.3×干膏率/干膏收率最大值）×100。參考單因素的結果，選定影響提取工藝的3個水平（表1），按照L9（34）表設計安排實驗。采用正交實驗助手IIV3.1進行正交設計分析，結果見表2。

表2 正交實驗結果

2.4.1 正交實驗結果分析 比較各因素的直觀分析（見表2）可知，各影響因素對醇提效果的影響大小為A＞B＞D＞C。方差分析結果，A、B、D 因素對提取結果有顯著影響，綜合極差分析、提取效率、提取成本等考慮，最優工藝確定為A2B1C2D2，即濃度為60%乙醇、10倍量、提取2次，每次1.5 h。

表3 方差分析

2.5 驗證實驗 根據正交實驗結果，為驗證上述最佳工藝的穩定性，按處方稱取紅景天等藥材，分別按優選工藝進行實驗。測定兩個考察指標，得出紅景天苷平均含量為1.73%，RSD=1.2%；測得干膏收率平均值24.82%，RSD=1.6%（n=3）。驗證結果顯示，依據該實驗方法確定的紅景天復方醇提工藝合理，且穩定、可行。

2.6 滴丸的制備

2.6.1 冷凝劑的選擇 分別以二甲基硅氧烷的聚合物（二甲基硅油）、液體石蠟為冷卻液，考察冷凝效果。結果表明液體石蠟為冷凝劑，下降快，易粘連，外形不圓整。而二甲基硅油中，滴丸間不粘連，下降速度適中，外形良好、圓整，因此本實驗選取的冷凝劑為二甲基硅油。

表4 三批驗證實驗結果

2.6.2 基質的選擇與配比 根據藥物性質和基質所特有的內聚力、分散力等理化特點，選用水溶性PEG6000和PEG4000作為制備滴丸所需基質。實驗顯示，以PEG4000作為滴丸唯一基質時，硬度欠佳，因此加入PEG6000調整，實驗以硬度、是否圓整、脫尾情況、滴制的難易、是否漂浮為考察指標，綜合考慮，選取PEG40000與PEG6000比例為2∶1作為滴丸基質，表5。

表5 不同基質配比對滴丸成型的影響

2.6.3 藥物與基質比例 滴丸質量的優劣與載藥量密切相關。選取PEG4000與PEG000比例為2∶1，其他條件均固定，以軟硬程度、是否拖尾、外觀圓整度、以及有無氣泡為評價標準，考察藥基配比對滴丸成型性影響。結果顯示，藥物與基質選擇1∶2.5～1∶5時滴丸成型性較好。見表6。

表6 藥物與基質配比對滴丸成型的影響

2.6.4 滴丸的制備條件 滴丸為近幾年中藥制劑的新劑型，利用固體分散技術，使藥物以分子、微晶或膠體狀態分散于基質中，從而更有利于藥物的溶解和吸收[10]。而滴丸的制備工藝比較復雜，除受上述冷凝劑、基質配比和載藥量影響外，其質量和成型還與多種因素有關，因此想要制成滴丸，很難用單個指標衡量其可行性。本實驗后期考察了熔融溫度、滴距等因素通過影響滴丸粘連程度、圓整度、拖尾、硬度，結合量化指標丸重差異系數，綜合評定制備工藝，并對溶散時限進行了考察。本研究最終選定的制備條件為二甲基硅油，PEG4000與PEG6000的最佳比例為 2∶1，藥基比例 1∶2.5，滴速 30 d/min，滴距4 cm，藥液溫度80℃。

2.6.5 溶散時限檢查 按照上述操作方法制備滴丸，并根據《中國藥典》2015年版（四部），通則0108丸劑的規定進行實驗。取3批紅景天滴丸供試品，每批6丸，于升降式崩解儀內，不加擋板按崩解時限檢查法進行測定，應在30 min內全部溶散。實驗過程中3批滴丸溶散時間均小于30 min，表明本實驗方法制備的復方紅景天滴丸符合檢測規定。結果見表7。

表7 溶散時限檢測結果

3 討論

復方紅景天組方考究，君藥紅景天（Rhodiola crenulata）在《本草綱目》中被稱為“經中上品”，味甘性寒，主治胸悶、體虛、周身乏力、惡心等癥[11-12]。現代科學研究發現，紅景天具有延緩衰老、抗腫瘤、抗缺氧及調節人體免疫的功能，并且能夠保護腦缺血再灌注損傷[13-14]。川芎能活血、化瘀，止痛、行氣。且其行氣、活血、止痛的功能與抗腦缺血的作用機制緊密相關。其有效成分川芎嗪能夠輕易地透過血腦屏障，從而對腦缺血起到保護作用[15]。冰片與川芎，兩者配伍可以增強川芎的藥效作用[16]。延胡索具有活血行氣，鎮痛的作用，治療血瘀氣滯等證，隨著現代藥理學的深入探究，發現其具有良好的抗腦缺血、抗心肌缺血等作用，其主要成分為延胡索乙素[17-18]。紅景天、延胡索、川芎和冰片四味中藥合用，探討其改善腦缺血的作用。

方中君藥為紅景天，對病癥起主要治療作用，2015年版《中國藥典》規定該藥材質量的控制指標為紅景天苷（Salidroside），因此選取Salidroside為本實驗的含量指標性成分。干膏得率對工藝提取具有指標性意義，又是后期制劑成型的重要保障，對劑型的選擇、制劑工藝的確定以及給藥方案的確定具有重要意義。本實驗研究了不同條件下復方紅景天的提取效果，并采用正交實驗法對提取工藝進行優化選擇，并加以驗證，所得最佳工藝為：10倍量濃度為60%的乙醇，回流提2次，每次1.5 h。

本實驗藥方的組建用于改善治療腦缺血病癥，探索其滴丸的制備將有助于各有效成分更加快速的達到血藥濃度峰值，發揮其治療作用。充分體現滴丸快速釋藥、生物利用度優良等優勢，具有一定的臨床意義[19]。提高基質與藥物比例，可改善滴制溶液粘稠度，使滴丸圓整、不拖尾，增加PEG4000含量可增大藥物在基質中的溶解度，減少氣泡。基質所含比例高，易于滴出、圓整，成型性優良，考慮到基質與藥物比例應盡可能小，增加載藥量，確定藥物與基質配比為1：2.5。本實驗對滴丸進行了初步的探究，可為該組方的進一步開發提供研究基礎。