紫蘇葉-黃芩藥對(duì)抑制神經(jīng)氨酸酶活性的最佳配比研究*

汪靜宜 魯銀均 吳巧鳳#

1 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

2 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 浙江 杭州 310006

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，紫蘇葉可行氣和胃，解表散寒；黃芩擅清熱燥濕，瀉火解毒。臨床上，兩藥常以不同比例配伍出現(xiàn)在治療流感的方劑中。神經(jīng)氨酸酶（NA）是流感病毒表面的一種包膜糖蛋白，在流感病毒的傳播過程中發(fā)揮重要作用。本文以藥對(duì)對(duì)NA活性的抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用輻射設(shè)計(jì)法確定紫蘇葉-黃芩藥對(duì)的不同配比，通過響應(yīng)曲面法評(píng)價(jià)不同配比的藥對(duì)與抑制NA活性的關(guān)系，以確定紫蘇葉-黃芩藥對(duì)的最佳配比。

1 材料

1.1 藥材：紫蘇葉（批號(hào)：171001；產(chǎn)地：浙江）和黃芩（批號(hào)：170701；產(chǎn)地：內(nèi)蒙古）均購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠，并經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源教研室俞冰副教授鑒定，分別為唇形科植物紫蘇Perilla frutescens（L.）Britt.的葉和唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。

1.2 試劑：神經(jīng)氨酸酶抑制劑篩選試劑盒P0309[包含1ml神經(jīng)氨酸酶熒光底物2′-（4-methylumbelliferyl）-D-N-acetylneuraminic acid（MUNANA）、50μl神經(jīng)氨酸酶、10ml神經(jīng)氨酸酶檢測(cè)緩沖液和1.20ml Milli-Q水，碧云天生物技術(shù)研究所]；生理鹽水（批號(hào)：B16010402，浙江國境藥業(yè)有限公司）；奧司他韋膠囊（批號(hào)：M1025，瑞士巴塞爾豪夫邁·羅氏有限公司）；其他試劑均為分析純。

1.3 儀器：熒光酶標(biāo)檢測(cè)儀（FLUOstar OPTIMA，德國BMG公司）；熒光酶標(biāo)板（96孔，美國COSTAR公司）；電子分析天平（AB135-S，梅特勒-托利多儀器有限公司）；超速離心機(jī)（Centrifuge 5810R，德國Eppendorf公司）；超聲波清洗器（KQ5200，昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥對(duì)的配伍設(shè)計(jì)與制備：實(shí)驗(yàn)采用輻射設(shè)計(jì)，將二維坐標(biāo)分為8個(gè)等分[1]，得到9種不同的配伍比例（1:0、5:1、5:2、3:2、1:1、2:3、2:5、1:5、0:1），具體見圖1（紫蘇葉:黃芩以蘇-芩表示）。……