馬鈴薯糖苷生物堿對化療性靜脈炎模型中bFGF及TNF-α表達水平的影響分析

王楠

（浙江中醫藥大學附屬江南醫院手外科 浙江 杭州 311201）

靜脈輸注化療藥物極易導致化療性靜脈炎的發生，早期的護理措施及藥物干預效果顯著。新鮮馬鈴薯外敷作為一種傳統的方式防治靜脈炎被基層廣泛應用，其主要藥理成分馬鈴薯糖苷生物堿具有良好的消炎鎮痛作用。發生靜脈炎的血管在創傷及修復的過程中伴隨著各類細胞因子的釋放[1]，用于檢測靜脈炎癥反應的指標主要分為兩類，一類是促血管生成因子，如bFGF；一類是炎癥因子，如TNF-α。課題組化療性靜脈炎造模后，檢測穿刺點周圍血清中bFGF和TNF-α的水平，探討馬鈴薯糖苷生物堿防治化療性靜脈炎的效果。

1.資料與方法

1.1 動物及試劑

32只新西蘭大白兔，體重2.2kg，雌雄各半。α-茄堿，α-卡茄堿，硫酸長春新堿，500g/L硫酸鎂，兔抗bFGF、TNF-α的ELISA檢測試劑盒，全自動酶標儀等。

1.2 藥膏制備

精確稱取α-茄堿3mg和6mg，分別稱取30g凡士林，將α-茄堿分別倒入均勻混合。4℃冰箱保存備用。α-卡茄堿配置方法同上。

1.3 實驗分組

A組：0.5g空白霜膏兔耳靜脈涂抹。

B組：500g/L硫酸鎂濕敷于兔耳靜脈，30min，保持濕潤。

C組：新鮮馬鈴薯洗凈去皮搗泥，沿兔耳靜脈外敷，透明膜覆蓋固定，共1 h。

D1、D2組：0.5g 100mg/kg及200mg/kgα-茄堿霜膏兔耳靜脈涂抹均勻。

E1、E2組：0.5g 100mg/kg及200mg/kgα-卡茄堿霜膏兔耳靜脈涂抹均勻。

F組：無外敷處理。

各組給藥至48 h。其中A、D1、D2、E1、E2涂抹霜膏一天三次。B組每次濕敷30 min，一天三次。C組馬鈴薯泥外敷1h，一天三次。

1.4 靜脈炎造模

兔雙耳備皮，暴露耳緣靜脈。麻醉后，在兔耳緣靜脈距耳尖2cm處穿刺，先推注2mL生理鹽水，再推注長春新堿藥液，劑量為0.2mg/kg，雙側耳緣靜脈同時注射，兔耳緣靜脈注射速度控制在0.5mL/min，推注2mL生理鹽水沖洗。（F組將長春新堿置換為等量生理鹽水，其他操作相同）最后一次給藥后，分析靜脈炎的嚴重程度。

1.5 觀測指標

穿刺點處采集1mL血液，室溫放置20min，2000～3000r/min離心20min，分離血清，置于-20℃冰箱內保存。采用ELISA法測定各組標本中bFGF和TNF-α表達含量。

1.6 統計學處理

組間分析單因素方差分析，兩兩比較時，選用最小顯著差異法LSD進行檢測。結果用平均值±標準差（Mean±SD）表示。P＜0.05視為具有顯著差異，P＜0.01視為具有極其顯著差異（*，P＜0.05；**，P＜0.010）。

2.實驗結果

表1和圖1為各組血清bFGF表達水平，表2和圖2為各組血清TNF-α表達水平。結果可見，與F組相比，A組兔子血清bFGF、TNF-α表達水平均顯著增加。與A組相比，藥物外敷后，B、C、D1、D2、E1、E2組兔子血清bFGF、TNF-α表達水平均有不同程度的降低。200mg/kg α-茄堿霜膏效果優于100mg/kg α-茄堿霜膏；200mg/kg α-卡茄堿霜膏優于100mg/kg α-卡茄堿霜膏。

圖1 各組血清bFGF表達水平（n=8）

表1 各組血清bFGF表達水平濃度

表2 各組血清TNF-α表達水平濃度

圖2 各組血清TNF-α表達水平（n=8）

3.討論

3.1 馬鈴薯糖苷生物堿在防治化療性靜脈炎中的研究

新鮮馬鈴薯外敷是一種防治輸液性靜脈炎的常見手段，操作簡單、經濟實用、療效良好。其特有的馬鈴薯糖苷生物堿，有效緩解局部無菌性炎癥，緩解痙攣、減少滲出[2]。石喜妹[3]應用不同的外敷方法防治靜脈炎，觀察發現新鮮馬鈴薯片持續外敷可有效預防靜脈炎的發生，優于硫酸鎂外敷。然而，新鮮馬鈴薯應用不便，有效物質不明確，質量標準可控性差，不能長期保存，缺乏直接的實驗依據。

α-茄堿和α-卡茄堿是馬鈴薯糖苷生物堿的主要形式，具有廣泛的藥理學活性：①抗病原微生物。能夠抑制病原微生物生長，抗病毒、抗真菌、抗癌細胞等[4]；②增強機體免疫力。作為新型的免疫佐劑，增強細胞的免疫反應；③抗炎鎮痛作用。對局部水腫情況產生明顯的抑制作用，對透明質酸酶活性起抑制作用，提高機體的抗過敏、抗組胺作用等。

3.2 化療性靜脈炎模型兔血清中bFGF及TNF-α表達水平的意義

化療性靜脈炎的血管伴隨著各類細胞因子的釋放。化學刺激會引起靜脈管壁的通透性增加，激活炎癥介質對血管內皮造成損害，引起血管內皮細胞凋亡，炎性細胞的浸潤。檢測靜脈炎發展情況的細胞因子主要分為兩類，一類是血管生成因子，bFGF、VEGF等；一類是炎癥因子，TNF-α、IL-6等。正常血管中存在少量的bFGF和VEGF，當血管受損時，表達會有不同程度增高。黃山[5]等通過檢測炎癥因子TNF-α來分析冠狀動脈血管狹窄及阻塞情況，判斷其是否存在功能性的改變。本課題組選擇檢測血清中bFGF及TNF-α表達水平，來反應局部靜脈的炎癥程度。

3.3 血清中bFGF和TNF-α表達水平的差異分析

A組作為造模組，局部血清中bFGF和TNF-α表達濃度分別為45.876±2.316pg/ml和67.958±8.887pg/ml遠高于F組。兩者表達濃度的升高直接反應局部靜脈炎的程度。B組硫酸鎂濕敷、C組新鮮馬鈴薯外敷、D組α-茄堿霜膏外涂、E組α-卡茄堿霜膏外涂后，兔耳緣靜脈穿刺血清中bFGF和TNF-α表達水平顯著低于A組。選用的不同藥物外敷，均能在一定程度上控制化療性靜脈炎的局部炎癥反應。D組和E組各采用100 mg/kg和200 mg/kg兩種不同濃度的糖苷生物堿霜膏外敷，bFGF和TNF-α表達水平顯示，高濃度組表達水平低于低濃度組，說明高濃度的馬鈴薯糖苷生物堿，更有利于控制局部靜脈炎的癥狀。

綜上所述，馬鈴薯糖苷生物堿（α-茄堿和α-卡茄堿）外敷能明顯改善兔耳緣靜脈化療性靜脈炎的局部癥狀，有效改善組織發紅、腫脹、疼痛、血管硬化等癥狀，有效控制血清中bFGF和TNF-α的表達水平。相比于新鮮馬鈴薯外敷，有效物質明確，質量標準可控，能長期保存，對臨床防治化療性靜脈炎外敷制劑的開發應用提供新思路。讓病人有較好的血管條件去接受化療計劃，保證所制定的化療方案順利實施。