MMP-9和PTEN蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)特點(diǎn)及意義

褚榮濤 邵國(guó)平 惠衛(wèi)寧 龔銘杰（通訊作者）

（常熟市第二人民醫(yī)院＜揚(yáng)州大學(xué)第5臨床醫(yī)學(xué)院＞神經(jīng)外科 江蘇 常熟 215500）

膠質(zhì)瘤（glioma）是顱內(nèi)腫瘤的一種，占顱腦腫瘤的40%～50%，是最常見(jiàn)的顱內(nèi)惡性腫瘤。年發(fā)病率為3～8人/10萬(wàn)人口。如同其他腫瘤一樣，膠質(zhì)瘤也是由于先天的遺傳高危因素和環(huán)境的致癌因素相互作用所導(dǎo)致。由于其本身具有侵襲性生長(zhǎng)特性，導(dǎo)致該腫瘤較難被治愈。MMP-9是金屬蛋白酶中具有代表性意義的一種酶，通過(guò)金屬蛋白酶降解細(xì)胞外基質(zhì)來(lái)突破組織屏障從而發(fā)生轉(zhuǎn)移；PTEN蛋白是抑癌基因，多數(shù)腫瘤俊輝在該蛋白中發(fā)生突變[1]。本文主要研究MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)特點(diǎn)和相關(guān)性，分析MMP-9和PTEN蛋白對(duì)于膠質(zhì)瘤的意義，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2012年1月—2017年12月膠質(zhì)瘤患者57例，將其作為觀察組。選取同期正常人群33例，將其作為對(duì)照組。其中，對(duì)照組男女?dāng)?shù)量比例為21/12，年齡51～66歲，平均年齡（58.7±4.2）歲；觀察組男女?dāng)?shù)量比例為34/23，年齡50～69歲，平均年齡（58.9±4.4）歲，兩組患者在基礎(chǔ)信息上無(wú)差異（P＞0.05），可進(jìn)行對(duì)比。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片制備 對(duì)腫瘤標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)固定、包埋、切片和染色，通過(guò)光學(xué)顯微鏡，尋找目標(biāo)區(qū)域組織，在組織切片上做好標(biāo)記。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 采用EnVision法。使用MMP-9和PTEN多克隆抗體及PV6001、DAB顯色試劑盒（中衫生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。讓組織芯片進(jìn)行脫蠟、水化，在室溫條件下3%H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，5min后在100℃高溫、pH6.0條件下修復(fù)15min，加入試劑進(jìn)行顯色，復(fù)染后脫水、透明、封片。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)人腦組織中MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)，分析MMP-9與PTEN表達(dá)相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，并用百分比表示，計(jì)量資料采用（±s）表示，并用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)結(jié)果

制作研究對(duì)象膠質(zhì)瘤組織芯片，免疫組織化學(xué)陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒，并在包漿中發(fā)現(xiàn)MMP-9和PTEN蛋白。

2.2 正常腦組織和不同WHO級(jí)別膠質(zhì)瘤PTEN表達(dá)情況

在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率100.00%；在57例膠質(zhì)瘤患者中，29例呈現(xiàn)PTEN蛋白陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率為50.88%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著WHO分級(jí)提升，膠質(zhì)瘤PTEN蛋白表達(dá)下降，見(jiàn)表1。

表1 正常人群與不同WHO級(jí)別膠質(zhì)瘤中PTEN蛋白表達(dá)（n）

2.3 正常腦組織和不同WHO級(jí)別膠質(zhì)瘤MMP-9表達(dá)情況

在33例正常人群中，27例MMP-9呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率81.82%；在57例膠質(zhì)瘤患者中，48例呈現(xiàn)MMP-9陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率為84.21%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。隨著WHO分級(jí)提升，膠質(zhì)瘤MMP-9表達(dá)增強(qiáng)，見(jiàn)表2。

表2 正常人群與不同WHO級(jí)別膠質(zhì)瘤中MMP-9表達(dá)（n）

2.4 膠質(zhì)瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)相關(guān)性

膠質(zhì)瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)無(wú)相關(guān)性，見(jiàn)表3。

表3 膠質(zhì)瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)關(guān)系（n）

3.討論

膠質(zhì)瘤源自于人體神經(jīng)外胚層，其特征明顯，不僅會(huì)呈現(xiàn)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，而且還會(huì)存在復(fù)發(fā)現(xiàn)象[2]。由于該惡性腫瘤此種特性，導(dǎo)致治療無(wú)從進(jìn)展，直到現(xiàn)在，仍然是神經(jīng)外科惡性腫瘤治療過(guò)程中的一個(gè)重難點(diǎn)課題。但在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)[3]，膠質(zhì)瘤在浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中牽涉多個(gè)環(huán)節(jié)，如腫瘤細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、基質(zhì)降解等，其中，細(xì)胞外基質(zhì)在腫瘤的浸潤(rùn)和侵襲過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。而且膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞能夠分泌蛋白水解酶，并使其降解，破壞細(xì)胞間質(zhì)構(gòu)成的細(xì)胞外基質(zhì)，來(lái)促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。

MMP-9屬于蛋白水解酶的一種，而且在其中具有較大作用。在目前研究中[4]，基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）涉及惡性腫瘤發(fā)展多個(gè)過(guò)程，不僅包括惡性腫瘤浸潤(rùn)、侵襲，還有轉(zhuǎn)移、血管生成、腫瘤增殖。其中，MMP-9由巨噬細(xì)胞、結(jié)締組織和某些腫瘤細(xì)胞進(jìn)行合成和分泌。還有研究提出佐證[5]，在膠質(zhì)瘤中，MMP-9陽(yáng)性表達(dá)率較高，明顯超出正常人群。通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢查，MMP-9會(huì)在膠質(zhì)瘤中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，表達(dá)水平也會(huì)相應(yīng)增加，表明膠質(zhì)瘤的侵襲性與MMP-9表達(dá)存在一定聯(lián)系[6]。

PTEN本身具有磷酸酶活性，具有抑制腫瘤的作用。在研究中表明[7]，人類(lèi)出現(xiàn)腫瘤時(shí)，多數(shù)患者均出現(xiàn)PTEN蛋白基因突變。而且PTEN定位于胞漿，N端是其主要功能區(qū)，也是酶的催化中心。脂質(zhì)磷酸酶活性是PTEN蛋白能夠抑制腫瘤的主要原因，通過(guò)該功能，能夠影響細(xì)胞增殖、黏附以及細(xì)胞遷移。隨后有研究發(fā)現(xiàn)[8]，PTEN在很多腫瘤中均存在表達(dá)缺陷，而且惡性腫瘤患者PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常人群，表明PTEN蛋白突變、丟失、滅活等在膠質(zhì)瘤的發(fā)展過(guò)程中具有重要作用。而且隨著腫瘤逐漸惡化，患者PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)率會(huì)進(jìn)一步降低也表明PTEN蛋白基因異常與膠質(zhì)瘤惡化有直接關(guān)聯(lián)。

本文研究表明：在33例正常人群中，PTEN蛋白全部呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率100.00%；在57例膠質(zhì)瘤患者中，29例呈現(xiàn)PTEN蛋白陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性率為50.88%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。隨著WHO分級(jí)提升，膠質(zhì)瘤PTEN蛋白表達(dá)下降。膠質(zhì)瘤中MMP-9和PTEN蛋白表達(dá)無(wú)相關(guān)性。

膠質(zhì)瘤是一種特殊顱內(nèi)腫瘤，屬于多基因突變疾病，致病原因較多，包括癌基因激活、過(guò)度表達(dá)、抑癌基因突變等，因此在研究過(guò)程中，要結(jié)合多基因因素進(jìn)行考慮。PTEN蛋白會(huì)調(diào)節(jié)多種酶和蛋白，使血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子活性發(fā)生改變，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲，使細(xì)胞局部黏附和運(yùn)動(dòng)遷移能力發(fā)生變化。但是在本次實(shí)驗(yàn)中，無(wú)法證明PTEN蛋白對(duì)MMP-9有根本性影響，想要進(jìn)一步驗(yàn)證二者之間的聯(lián)系，需要進(jìn)一步擴(kuò)大研究對(duì)象數(shù)量，展開(kāi)深入研究。

綜上所述，在膠質(zhì)瘤中，PTEN蛋白和MMP-9表達(dá)無(wú)相關(guān)性，但MMP-9表達(dá)升高和PTEN表達(dá)下降表明膠質(zhì)瘤侵襲性升高。