規模豬場不同日齡仔豬O型和A型口蹄疫母源抗體消長規律及免疫效果監測

王 慧，楊 俊，杜麗飛，邱美珍，周望平，劉伯承，彭苗苗2，

（1.湖南美神育種有限公司，湖南 株洲 412000；2.湖南鑫廣安農牧股份有限公司，湖南 長沙 410129；3.湖南省畜牧獸醫研究所，湖南 長沙 410131）

口蹄疫（Foot-and-mouth Disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄動物，被國際獸醫局（OIE）列為A類傳染病[1]，我國也將該病列為一類傳染病。它具有很強的傳染性，可以通過空氣等多種媒介進行傳播，易感動物也可以通過消化道、呼吸道、人工授精、外傷接觸等多種方式感染病毒，發病率高達100%。目前，豬口蹄疫的流行毒株主要有O型、A型和亞洲Ⅰ型，而湖南省以O型和A型為主。因為口蹄疫各血清型間交叉保護性差，為減少免疫次數，降低勞動強度，采用O型和A型口蹄疫二聯苗進行免疫逐漸成為大多豬場的首選和趨勢。為合理安排口蹄疫二聯苗的免疫，本試驗于2017年3—12月選擇一家規模豬場，對仔豬O型和A型口蹄疫母源抗體進行跟蹤檢測，了解其消長規律的同時，還開展首免、二免及三次免疫后抗體水平評估，確定了最佳首免、二免和三免時間，按此免疫程序，能較好發揮口蹄疫二聯苗的免疫效果。該試驗結果，對于選擇O型和A型二聯苗作為口蹄疫免疫防控的豬場有很好的指導作用，為臨床使用提供了數據參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 口蹄疫O/A型二價滅活苗，生產廠家為某股份有限公司。

1.1.2 診斷試劑 口蹄疫病毒O型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒，口蹄疫病毒A型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒，生產廠家為倫巴第及艾米利亞-羅馬涅大區的動物疾病預防實驗室，批號為170404B。

1.1.3 試驗豬 選擇抗體水平合格并整齊度好的母豬所產仔豬，均為杜長大三元雜種豬，該場仔豬基本在21日齡斷奶。

1.2 方法

1.2.1 豬場免疫方案 仔豬：35日齡左右首免，60日齡左右二免，110日齡左右三免；經產公母豬：每年3、9、10、12月的每月下旬普免1次，劑量均為2毫升/頭。

1.2.2 血清采集 未免疫：選擇抗體水平合格的母豬所產仔豬，且仔豬未進行口蹄疫免疫，采集其0、7～9、14～16、21～23、28～30、35～37、42～44、49～51、56～58日齡仔豬全血；免疫后：隨機采集首免后30天（58～70日齡）、二免后 30天（90～100日齡）、二免后60天（120～130日齡）、三免后60天（150～160日齡）全血，分離血清置于-20℃冰箱保存備用。

1.2.3 抗體檢測方法 按照抗體檢測試劑盒步驟進行操作分析。

1.2.4 試劑盒原理 ELISA微孔板預先包被有口蹄疫病毒O（A）型抗原，該抗原可被同源的特異性單抗（MAb）所捕獲，將適當稀釋的待檢血清與被捕獲的抗原進行孵育，存在于樣品中的特異性抗體最終與抗原結合，再加入辣根過氧化物酶標記的口蹄疫病毒O型（A型）MAb，其與同源抗原的反應將被預先結合到該抗原的陽性血清抗體所阻斷，而如果樣品為陰性的話，酶標單克隆抗體將可與口蹄疫病毒抗原結合。然后加TMB進行顯色反應后再加入終止液，測其OD值。

1.2.5 ELISA判定標準 豬口蹄疫病毒O型VPI合成肽ELISA抗體檢測試劑盒：1）試驗成立條件：陽性對照孔OD450值應介于0.9～2.5之間，陰性對照孔OD450值均應≤0.15；2）臨界值=陽性對照孔 OD450均值×0.17；3）待檢血清測定OD450值≥臨界值者判定為陽性；待檢血清測定OD450值＜臨界值者判定為陰性。

口蹄疫病毒O型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒結果計算：阻斷率%=100-（血清OD/陰性對照平均OD值）×100；檢測有效性：陰性對照OD值必須≥1；陽性對照血清的阻斷率在1/10稀釋時應≥90%，在1/30稀釋時應＞50%；結果判定：阻斷率≥50%時為陽性，阻斷率＜50%時為陰性，陽性為免疫合格。

2 結果與分析

2.1 未免疫仔豬母源抗體水平

表1的檢測結果顯示，剛出生的仔豬沒有獲得母源抗體，口蹄疫O型抗體陽性率為0，吮吸母乳后開始獲得母源抗體，在7～9日齡時抗體陽性率達到77.8%，14～16日齡陽性率為94.4%，在3周齡期間抗體達到最高水平，陽性率為100%，后母源抗體開始逐漸降低，但直到35～37日齡抗體陽性率還有83.3%，42～44日齡抗體陽性率為72.2%，51日齡后抗體陽性率下降到50%以下，未達到農業部規定的免疫合格率≥70%，處于受感染風險狀態。

表1 免疫前仔豬O型口蹄疫母源抗體檢測情況

表2的檢測結果顯示，剛出生的仔豬口蹄疫A型抗體陽性率為0，吮乳后開始獲得母源抗體，但較O型口蹄疫抗體水平上升得慢一些，在7～9日齡時抗體陽性率才55.6%，14～16日齡陽性率為83.3%，在21日齡期間抗體達到最高水平，陽性率為88.9%，一直持續到30日齡，后母源抗體開始逐漸降低，35～37日齡抗體陽性率已經下降到66.7%，42～44日齡抗體陽性率為50%，50日齡后抗體水平下降到了38.9%，56～59日齡時母源抗體水平已經非常低了，抗體陽性率只有27.8%。

表2 免疫前仔豬A型口蹄疫母源抗體檢測情況

2.2 首免和二免后抗體水平

從表3和表4可以看出，本場選擇在35日齡左右進行首次免疫，免疫后30天即58～70日齡豬口蹄疫O型抗體陽性率才66.7%，離散度也較高，為36%；但豬口蹄疫A型抗體陽性率達到了94.4%，整齊度也較好。在二免后30天即90～100日齡檢測血清，豬口蹄疫O型抗體陽性率達到了100%，離散度只有8%；同時豬口蹄疫A型抗體陽性率仍處于高水平為94.4%，且離散度相較于第1次檢測有所降低。120～130日齡再次檢測時，兩種抗體水平均有所下降，但O型抗體水平仍處于很高的狀態，陽性率為94.4%，A型抗體水平下降到了77.8%。可能是由于二次免疫后時間間隔稍長，而三次免疫后產生的抗體不到高峰值。最后在110日齡左右進行3次免疫，150～160日齡時兩種抗體陽性率均達到了100%，且阻斷率平均值均大于80%。確保斷奶肥育豬對豬口蹄疫O型和A型野毒的抵抗力。

表3 免疫后O型口蹄疫抗體水平情況

表4 免疫后A型口蹄疫抗體水平情況

3 討論

規模養豬場均是以群體免疫的理念進行疫苗免疫，在進行抗體監測時，抽樣要根據豬場具體生產模式、檢測目的等設計合理的采樣方案，因此獲得的檢測數據也是代表一個群體的免疫狀態。本次采樣豬場嚴格執行全進全出和分區飼養。豬群轉入下一個生產區時按同一欄或同一棟豬群同時轉入相應的欄舍飼養，豬的疫苗免疫也是按欄或棟為單位進行免疫。本研究采樣方案是按豬場實際生產流程進行，采集的每個日齡階段樣品為免疫時間是同一天的同一批豬，所以初生日齡有相應的跨度，按此采樣方式檢測的數據相應代表了該批次豬群整體抗體水平。因此得到的檢測結果更符合規模化豬場生產流程和免疫接種操作方案，對免疫程序的制定有更現實的指導意義[2]。

由于豬胎盤是上皮絨毛膜類型，豬在胎兒時期不能從母體獲得母源抗體，新生仔豬通過吮吸初乳經消化道吸收獲得母源抗體[3]。母源抗體保護初生仔豬免受病原侵襲，在提高仔豬抗病力和成活率方面發揮重要作用。但它的存在對仔豬也有兩面性，既可以保護仔豬免受病原感染，同時較高的母源抗體又會降低疫苗免疫效果。從表1和表2可以看出，仔豬在出生吮乳后均獲得了較高的母源抗體，直到21日齡到30日齡時達到持續高峰，但相比較而言，仔豬獲得口蹄疫O型母源抗體較高，持續時間較長，50日齡左右抗體陽性率還有50%，而口蹄疫A型母源抗體在43日齡左右就降到了50%，由于免疫的是口蹄疫O/A二價滅活苗，為了避開口蹄疫O型母源抗體的干擾，又要考慮確保能得到有效抵抗A型口蹄疫野毒感染的能力，避免免疫空白，確定在45日齡左右進行首次免疫比較合理，同時將二免、三免時間相應推后。再結合表3和表4的檢測結果來看，58～70日齡口蹄疫O型抗體陽性率只有66.7%，而A型抗體陽性率達到了94.4，很大原因是O型高母源抗體水平干擾了疫苗免疫效果，同時印證了本場在35日齡首次免疫是不合理的。

此次檢測發現，該場經過3次免疫后肥育豬群口蹄疫O型和A型抗體水平都達到了很高的水平，在150日齡左右抗體陽性率均達到了100%，整齊度好，阻斷率平均值高，都在80%以上（表3和表4），說明采取3次免疫已經是相對安全的免疫次數了，足夠保護各個階段的肥育豬群抵抗外來病原的入侵。

根據相關報道[2，4-5]，不同豬場豬O型口蹄疫的首次免疫時間各有不同，從25日齡到60日齡不等。因此確定首免時間應根據自身豬場的免疫狀況及監測數據而定，同時避開與其他疫苗的免疫時段，制定切合實際生產的免疫程序。