中藥材中常見真菌毒素污染狀況及分析方法研究進展

雷 燕

（浙江省麗水市農業農村局，浙江麗水 323000）

0 引言

中藥材的安全性在國內外引起了越來越多的關注。作為湯劑和中成藥的基本原料，其質量直接影響臨床用藥的安全性和療效，加強其質量控制具有重要意義。中草藥在種植、收獲、運輸、貯存過程中，由于方法不當，容易引起大量真菌生長和毒素積累，直接影響中草藥的質量和療效。目前，糧食、食品中真菌及其毒素的污染已引起廣泛關注，并提出了防治措施、法規和限量標準。然而，對中藥材真菌污染的系統研究還不夠深入。

1 中藥材中常見真菌毒素種類及污染狀況

1.1 黃曲霉毒素

黃曲霉、寄生曲霉、生曲霉和擬酒石酸曲霉可產生黃曲霉毒素。是一類化學結構相似的二呋香豆素衍生物。目前已分離鑒定出12種化合物，包括AFB1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、GM、B2A和有毒醇。4種主要的毒素包括AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，可以直接污染食品、飼料和中藥材。1993年，AF被世界衛生組織的癌癥研究機構（IARC）劃定為Ⅰ類致癌物，屬于劇毒物質。在天然污染的食品中以AFB1最為多見，其毒性和致癌性也最強。研究表明，中藥材中真菌毒素污染較為普遍，尤其是AF檢出率很高。對當歸、黨參、黃芪等30多種中藥進行了檢測。在杏仁、龍膽、生煎曲、生麥芽和柴胡中均發現黃曲霉毒素。大量調查結果表明，國產中藥AFB1的污染率為82%-100%，污染水平為0.12～202.00 μg·kg-1。其中，桔皮、麥冬、當歸、椰殼、肥海、神曲污染報道較多。國外檢測到19種中藥，其中3種含有黃曲霉毒素，有的甚至高達28μg·kg-1。對意大利市場上的103份香料、香料、藥用茶和藥用植物樣品進行了測試。發現7個含有黃曲霉毒素的樣本。

1.2 單端抱霉烯族類毒素

單端丙烯醛毒素是鐮刀菌真菌產生的一類化合物。根據其化學結構可分為T-2毒素和脫氧雪腐鐮刀菌醇（DON）。T-2毒素是由禾谷鐮刀菌、三絲鐮刀菌和馬鐮刀菌產生的一種真菌毒素。主要影響血液、肝臟、腎臟、胰腺肌肉和淋巴細胞的功能。唐，又稱嘔吐毒素，主要由禾谷鐮刀菌和黃鐮刀菌產生。它能在人體內產生食物中毒性白細胞減少癥。

2 中藥材中真菌毒素分析方法概況

2.1 提取凈化

提取即采用合適的提取液和提取方式，將目標成分如真菌毒素從樣品中充分地轉移到溶劑中并均質化的過程，為以后的凈化和定量檢測的前提。為了獲得更高的選擇性和靈敏度，通常需要進一步純化提取物。凈化是指在檢測前去除提取物中的脂肪、蛋白質和色素等雜質，以避免干擾真菌毒素的檢測。有些學者為減少基質效應和凈化過程對目標成分造成損失，采取直接稀釋法，樣品用84%乙腈提取后，用甲醇溶解上清液，稀釋4次，用LC-MS/MS直接測定，高、中、低濃度時赭曲霉素A的絕對回收率為89.6%～95.2%。在中藥及其相關產品中多種真菌毒素同步檢測研究中，將樣品經甲醇-水-甲酸（79∶20∶1，v/v/v）提取后，上清液氮吹復溶，直接上LC-MS/MS檢測，8種真菌毒素的回收率在71.0%～106.0%之間，線性相關系數（R2）為0.9977～0.9999。

2.2 檢測方法

近年來針對真菌毒素的化學檢測方法不斷趨于完善，檢測方法主要分為兩類：快速篩選法和確認法。目前較為普遍使用的真菌毒素快速篩選法主要是酶聯免疫法（ELISA）和膠體金標記技術。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）適用于大量樣品的快速篩選，但存在假陽性的缺點，不能準確定量。比較了酶聯免疫吸附法和高效液相色譜法測定20種藥材中AFB1的結果。酶聯免疫吸附試驗假陽性率為70%。陽性樣品中AFB1的含量也與高效液相色譜法有顯著差異。膠體金標記技術是一種新型的固相免疫標記技術，與ELISA法同屬于免疫學方法，具有操作簡單、快速、穩定性好、單個現場檢測成本低等特點，為目前研究應用比較廣泛的一種方法。等將己確定污染值的玉米、小麥樣品制備為不同毒素含量的驗證樣品，對膠體金免疫層析法的準確性、誤差范圍等項目進行了驗證實驗，其檢測結果與ELISA法基本一致。另外，基于免疫反應的生物感應技術和蛋白芯片技術也是近年來新興的真菌毒素快速檢測技術。

3 結語

中藥是我國優秀文化遺產的一部分，在疾病預防、治療及保健等方面做出了卓越的貢獻。隨著人們對中藥的廣泛應用，其安全問題也引起人們高度重視，真菌污染導致的中藥霉變是影響中藥質量與使用安全的主要問題之一。