共刺激分子CD40與白細(xì)胞介素4在嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒中的表達(dá)及臨床意義

唐瑩瑩 梅 紅

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院消化內(nèi)科一病區(qū)，湖北省武漢市 430015，電子郵箱：723618448@qq.com)

嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎為臨床少見的胃腸道疾病，以胃腸道局限性或者彌散性嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為特征，伴程度不一的上腹部痙攣性疼痛、發(fā)熱、惡心嘔吐表現(xiàn)，大部分患者外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)上升[1-2]。既往嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎多見于成年人，近年來有研究表明，其也可于兒童階段發(fā)病，但無特異表現(xiàn)，臨床容易出現(xiàn)漏診及誤診[3]。胃腸道是機(jī)體最大的免疫器官，因此有學(xué)者認(rèn)為，免疫炎癥反應(yīng)可能與嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎發(fā)病有關(guān)[4]。免疫活性細(xì)胞活化為機(jī)體免疫應(yīng)答的重要環(huán)節(jié)。共刺激分子可調(diào)節(jié)細(xì)胞間的相互作用，并放大細(xì)胞內(nèi)生物信號(hào)，其中共刺激分子CD40通過結(jié)合CD40配體，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[5]。白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-4作為一種免疫炎性因子，在炎癥性腸病、自身免疫性等疾病中起到重要作用[6]。本研究旨在分析共刺激分子CD40、IL-4在嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒中的表達(dá)及其臨床意義，為診治疾病提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2008年6月至2018年1月收治的80例嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒(嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，即進(jìn)食特殊食物后可見胃腸道體征及癥狀，且外周血中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)上升，組織學(xué)證實(shí)胃腸道嗜酸性粒細(xì)胞浸潤或者增加；(2)年齡3～14歲；(3)心肝腎等器官無異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：胃腸道以外器官伴嗜酸性粒細(xì)胞浸潤；炎癥性腸病、自身免疫性疾病等所致嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)上升。80例患兒中女性36例，男性44例，年齡3～14(8.21±1.70)歲。結(jié)合臨床癥狀[7]將患兒分為急性期44例及緩解期36例。急性期患兒中，女性20例，男性24例，年齡3～14(8.17±1.75)歲；緩解期患兒中，女性16例，男性20例，年齡3～14(8.26±1.64)歲。同期選擇92例健康體檢兒童作為對照組，入選兒童均無濕疹、哮喘及其他過敏表現(xiàn)，其中女性43例、男性49例，年齡3～13(8.02±1.85)歲。嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎組和對照組之間、急性期和緩解期患兒之間的性別、年齡等基礎(chǔ)資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 CD40、IL-4的檢測方法 收集研究對象外周空腹靜脈血2 mL，給予乙二胺四乙酸鉀鹽抗凝，其中嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒均于治療前進(jìn)行標(biāo)本采集。采用血液分離機(jī)按3 000 r/min離心10 min，取上清液于-20℃低溫箱中保存待檢。采用BD FACSCalibur型流式細(xì)胞儀(美國Becton Dickinson公司)測定CD40水平，酶聯(lián)免疫法檢測IL-4水平，試劑盒購自北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司(批號(hào)：20080316)；使用YYZ-HF-3600全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀[西化儀(北京)科技有限公司]進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組CD40、IL-4水平及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎組CD40、IL-4水平及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于對照組(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組CD40、IL-4及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(x±s)

2.2 不同病情程度嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒間CD40、IL-4水平及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 急性期嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒的CD40、IL-4水平及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)高于緩解期患兒(均P<0.05)，見表2。

表2 不同病情程度嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒CD40、IL-4及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(x±s)

2.3 嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒CD40與IL-4水平的相關(guān)性 嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒的血清CD40水平與IL-4水平呈正相關(guān)(r=0.827，P<0.05)。

圖1 CD40、IL-4診斷嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的ROC曲線

2.4 CD40、IL-4對嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的診斷效能 CD40、IL-4、CD40聯(lián)合IL-4對嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎具有一定的診斷效能，CD40聯(lián)合IL-4的曲線下面積高于IL-4(均P<0.05)，CD40聯(lián)合IL-4診斷的敏感度最高，三者的特異度相似，見圖1及表3～4。

表3 ROC曲線分析結(jié)果

表4 CD40、IL-4診斷嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒的ROC曲線下面積比較

3 討 論

嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎可于各年齡段發(fā)病，其發(fā)病高峰為30～50歲[8]。最新研究表明，小兒的嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的發(fā)病率有所上升[9]。其最常累及胃和小腸，由于病變浸潤部位及深度的不同，癥狀表現(xiàn)多樣，臨床診斷有一定難度。胃腸內(nèi)鏡及鋇餐造影是其診斷的重要方法，但僅通過此種檢查方法仍無法診斷此病。嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的發(fā)病機(jī)制及病因?qū)W尚未明確。相關(guān)研究表明，大部分患者伴外周血嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)增加，患者胃腸道組織中可見大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，說明其發(fā)病可能和免疫炎癥反應(yīng)相關(guān)[10]。本研究結(jié)果也顯示，嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒的嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)高于健康兒童(P<0.05)。Lemale等[11]報(bào)告，多種免疫炎性介質(zhì)能夠激活嗜酸性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)其聚集，并進(jìn)一步合成和釋放血管活性物質(zhì)，導(dǎo)致胃腸道黏膜充血水腫，引發(fā)慢性炎癥，使胃腸道及腸道外組織受累。

抗原提呈細(xì)胞表面的共刺激分子與T細(xì)胞表層的相應(yīng)受體分子結(jié)合后，能夠傳導(dǎo)抗原的刺激信息，參與細(xì)胞免疫活化反應(yīng)，在機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[12]。共刺激分子包含腫瘤壞死因子受體家族及B7家族，其中CD40為腫瘤壞死因子受體家族，可于B淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等細(xì)胞表層表達(dá)，其可誘導(dǎo)B細(xì)胞的分化、增殖及成熟，促進(jìn)T細(xì)胞繼發(fā)及定向分化，從而啟動(dòng)、調(diào)節(jié)特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)，參與機(jī)體的生理病理改變[13]。CD40與其受體結(jié)合后能夠激活外周血及胃腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞，促進(jìn)多種促炎細(xì)胞因子的生成，導(dǎo)致白細(xì)胞血管外浸潤，引起組織損傷及功能障礙[14]。有關(guān)研究表明，機(jī)體在健康狀態(tài)下CD40水平較低，但在狼瘡腎炎、胃腸病等患者中水平異常上升[15]。本研究結(jié)果顯示，嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎組CD40水平高于對照組，且急性期患兒的CD40水平高于緩解期患兒(P<0.05)，說明嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎伴一定程度的免疫炎癥改變，其機(jī)制可能為機(jī)體接觸感染原或者過敏原后引起細(xì)胞免疫反應(yīng)異常，從而刺激外周血CD40異常上升，促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞大量生成，導(dǎo)致胃腸黏膜充血水腫、炎癥等。因此，通過測定外周血CD40水平或能夠輔助診斷此類疾病，并評估疾病轉(zhuǎn)歸[16]。

IL-4為趨化因子家族的細(xì)胞因子，主要來自CD4+細(xì)胞輔助性T細(xì)胞2(helper T cell 2，Th2)亞群，可刺激Ⅰ、Ⅱ型受體，誘導(dǎo)Th2分化，激活免疫細(xì)胞，介導(dǎo)B、T細(xì)胞活化及增殖[17]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[18]，IL-4可在正常小鼠腸道內(nèi)起到獨(dú)立性前炎癥因子作用，引起免疫炎癥反應(yīng)。Wong等[19]發(fā)現(xiàn)，嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患者外周血中IL-4表達(dá)明顯上調(diào)。本研究中，嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎組IL-4水平高于對照組，且隨著病情的緩解其水平相應(yīng)下降(P<0.05)，說明其或可作為嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎診斷及病情評估的有效標(biāo)志物。CD40在CD4+T細(xì)胞增殖、活化中起到重要作用，而CD4+T細(xì)胞可分泌大量IL-4，形成正反饋，因此CD40與IL-4有一定的關(guān)聯(lián)。本研究的相關(guān)性分析結(jié)果也顯示，嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎患兒外周血的CD40與IL-4水平呈正相關(guān)(P<0.05)。

本研究ROC曲線分析顯示，CD40、IL-4、CD40聯(lián)合IL-4診斷嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的曲線下面積分別為0.843、0.795、0.882，且三者的特異度、靈敏度相差不大，提示三者對嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的診斷有一定價(jià)值。

總之，共刺激分子CD40、IL-4可能參與嗜酸性粒細(xì)胞性胃腸炎的發(fā)生、發(fā)展，測定CD40、IL-4水平或能夠輔助診斷此類疾病，并評估疾病活動(dòng)情況，為臨床治療提供參考依據(jù)。但由于此類疾病的發(fā)病率較低，本研究納入樣本量較少，其結(jié)果有待更多研究進(jìn)一步循證。