LC－MS／MS法測定雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留

張 昕，屈俊成，王 丹，左英芳，張慧利

（焦作市畜產品質量安全監測中心，河南 焦作 454003）

1 實驗材料

1.1 儀器設備

液相色譜-串聯質譜儀（美國Waters公司Waters Acquity UPLC-Xevo TQ-S）；離心機；電子天平（感量0.01g）；分析天平（感量0.00001g）；渦旋混合器；固相萃取裝置；HLB固相萃取柱（60mg，3mL）。

1.2 試劑

（鹽酸）環丙沙星、甲磺酸達氟沙星、恩諾沙星、（鹽酸）沙拉沙星、甲磺酸培氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星對照品；氫氧化鈉；磷酸；三乙胺；磷酸二氫鉀；甲醇（色譜純）；乙腈（色譜純）；超純水。

1.3 標準溶液

1.3.1 標準儲備溶液（1 mg/ml）

分別稱取鹽酸環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、甲磺酸培氟沙星對照品各約25 mg（按單體計）于25ml容量瓶中，用0.03 mol/L氫氧化鈉溶液溶解定容至刻度。有效期3個月。

1.3.2 標準中間工作溶液（200 ng/ml）

量取1 mg/ml的標準儲備溶液適量，用0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）稀釋至200 ng/ml。

1.3.3 基質標準工作溶液（2 ng/ml）的制作

量取200 ng/ml的標準中間工作溶液0.1 ml，加0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）0.9 ml；量取上述溶液0.1 ml，加空白樣品提取凈化液0.9 ml。

2 檢驗方法

2.1 樣品前處理過程

取2 g試料置于50 ml離心管中，加入磷酸鹽緩沖液9.0ml，渦旋混合，中速振蕩10 min，14000r/min離心10 min，傾取上清液于另一離心管中，殘渣用磷酸鹽緩沖液9.0 ml重復提取一次。合并兩次上清液，混勻。在合并的提取液中加正己烷15 ml，渦旋混合5 min，14000 r/min離心10 min，取下層清液5 ml備用。若下層不澄清則再脫脂1次。

HLB固相萃取柱依次用甲醇、磷酸鹽緩沖液各2 ml預洗。取上清液5.0 ml過柱，水2 ml淋洗，擠干。0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（75+25）2.0 ml洗脫，擠干。過0.22μm微孔濾膜過濾后供測定。

2.2 添加回收樣的制作

稱取空白樣品2.00g（±0.02g）于50ml離心管中，準確吸取200 ng/ml標準工作溶液80 μl添加到空白樣中，制成添加量為8 μg/kg的樣品。然后按2.1方法進行前處理。

2.3 儀器參數與測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLCTMBEH C18柱（2.1×100mm，1.7μm）；柱溫：35℃；進樣量：2μl；流速：0.3mL/min；流動相：A相乙腈，B相0.1%甲酸溶液梯度洗脫。

2.3.2 質譜條件

離子源：電噴霧ESI；掃描方式：正離子掃描；采集模式：多反應監測MRM；毛細管電壓：0.5kV；錐孔電壓：50V；源溫：150℃；脫溶劑氣溫度：500℃；錐孔氣流速：150L/h；霧化氣流速：1000 L/h；準確質量數在每次實驗前進行調諧確認。

2.3.3 定量方法

用空白樣品提取凈化液稀釋混合標準工作液，配制成基質對照品，采用單點校正，按外標法以峰面積比計算。

3 結果與討論

3.1 樣品前處理過程的優化

雞蛋樣品中脂防和蛋白質含量高，對藥物殘留測定結果影響較大、選擇并優化樣品前處理方法對結果準確性尤為重要。本方法中雞蛋樣品加入磷酸鹽緩沖液振蕩提取、最后經高速離心將蛋白質和其他顆粒物沉淀，能有效的減少樣品中蛋白質等雜志的干擾，利用正已烷對脂肪進行二次抽提，減少了脂防對樣品檢測過程的影響，利用樣品前處理過程的液體稀釋倍數關系折合樣品前處理的損失，對整個實驗的回收率有明顯的提升效果。

3.2 加標回收率及精密度

空白樣品經測定，不含氟喹諾酮類，在其中添加不同濃度的混合標準溶液（添加濃度5～50μg/kg）的回收率為60%～110%，批內相對標準偏差≤15%，表明該方法回收率和精密度滿足獸藥殘留檢測需要。

3.3 檢驗過程注意事項

合并提取液后，需混合均勻，再取出部分凈化，若提取液渾濁，需再次離心；不同廠家固相萃取柱含碳量不同，應選擇含碳量≥17%的固相萃取柱；采用3mL固相萃取柱凈化，有效減少堵塞現象；定量時，需用同種基質的樣品做基質對照溶液來校正，以消除基質效應。

3.4 結論

本方法建立了雞蛋樣品中7種氟喹諾類藥物殘留的液質聯用檢測方法，方法靈敏度高，準確率高，適用于雞蛋中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測分析。