鹽度和漂白粉對東方新糠蝦的急性脅迫影響

張濤，史會來，平洪領，余方平，盧斌

（浙江省海洋水產研究所，浙江省海水增養殖重點實驗室，浙江 舟山 316021）

東方新糠蝦（Neomysis orientalis）隸屬于糠蝦目（Mysidacea），糠蝦科（Mysidae），新糠蝦屬（Neomysis）。廣泛分布于我國沿海，特別是沿海咸淡水海域尤為常見。東方新糠蝦具有廣溫、廣鹽性；屬雜食性類型，既可濾食單細胞藻類和有機碎屑，也可攝食輪蟲、鹵蟲、橈足類、枝角類和箭蟲等，是自然海區中許多魚蝦的天然餌料[1]，同時也是多種經濟海產魚類（大黃魚、石斑魚、大菱鲆、牙鲆、東方鲀、真鯛等）育苗的活餌料[3-6]。

浙江省海洋水產研究所試驗場每年利用養殖三疣梭子蟹的土池進行東方新糠蝦規模化培養，效果顯著。但是，采用室外土池培育東方新糠蝦的方法易受外界條件的影響，尤其是降雨后鹽度的改變和消毒海水后漂白粉的殘留是重要的影響因素。現有的研究報道中，雖已有學者就部分環境因子針對糠蝦種類進行了研究，如鄭嚴等[7-8]報道了季節和水溫條件下黑褐新糠蝦的種群和生殖特點及生活史等生物學特性研究；顏天等[9]研究了三苯基氯化錫（TPTC）的急性毒性效應及其對糠蝦繁殖、生殖周期和種群的慢性毒性影響；Fockedey等[10]研究了普通新糠蝦（Neomysis integer）的存活和孵化率與鹽度條件的相關性；王金鋒等[11-12]研究了水體中組織胺對黑褐新糠蝦和日本新糠蝦的生長、發育的影響；楊海萍等[13-14]研究了溫度和鹽度對黑褐新糠蝦（Neomysis awatschensis）成活的影響；但尚未見有關鹽度和漂白粉對東方新糠蝦影響的研究報道。因此，該研究以東方新糠蝦為試驗對象，探討了不同鹽度和不同漂白粉濃度對東方新糠蝦的急性毒性作用，旨在探究兩者與東方新糠蝦存活率的關系，為制定東方新糠蝦土池規模化培養技術方案提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗在浙江省海洋水產研究所西閃試驗場完成。東方新糠蝦取自試驗場三疣梭子蟹和糠蝦混養池塘，系人為接種后自行繁殖苗種。采集時海水溫度26℃，用80目網兜將東方新糠蝦撈至室內7 m3的水泥池中暫養，每天投喂少量濃縮藻及豐年蟲，每天吸污1次并換部分新水。暫養3 d后，隨機挑選個體健康、大小相近的糠蝦作為試驗個體。經測量試驗糠蝦的體長為（0.66±0.07）cm。

1.2 試驗設計

鹽度試驗：試驗在2 000 mL的塑料杯中進行，以經暗沉淀和沙濾后的自然海水為基礎，加入自來水或者海水精配置成不同鹽度（S），該試驗共設置9個鹽度梯度，分別為 0、5、10、15、20、25、30、35、40，其中0為純淡水組，25為對照組，將S＜25稱為低鹽度組，S＞25稱為高鹽度組。每組設置3個平行組，每個平行組中東方新糠蝦的數量為20尾。

漂白粉試驗：試驗在2 000 mL的塑料杯中進行，使用經暗沉淀和沙濾后的自然海水，利用常用水體消毒劑漂白粉配置6個濃度梯度（經預試驗后選定），分別為 0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L，其中 0為自然海水組。每組設置3個平行組，每個平行組中東方新糠蝦的數量為20尾。

2個試驗均在開始后12 h內每隔2 h觀察一次糠蝦的死亡情況，12 h后每隔12 h觀察一次糠蝦的死亡情況，采用肉眼觀察以及用解剖針輕輕觸碰觀察的方法，以糠蝦個體的逃避反應表示活力，挑出死亡個體，做好記錄。試驗水溫為26～27℃，無充氣。

1.3 相關系數及計算方法

1.3.1 成活率μ 成活率μ計算參照公式：μ=N1/N。式中，N為試驗開始時東方新糠蝦存活尾數，N1為試驗結束時東方新糠蝦存活尾數。

1.3.2 半致死濃度（LC50）和安全濃度（SC） 根據不同漂白粉濃度下東方新糠蝦的累積病死率，利用寇式法[15]計算漂白粉溶液對東方新糠蝦的半致死濃度LC50和安全濃度SC。

式中：LC50及各漂白粉濃度均以mg/L來表示；XK為最高濃度的對數；∑P為各濃度組死亡東方新糠蝦百分比之和；d為相鄰兩組濃度的對數之差。

1.4 數據統計與分析

所得試驗數據均采用Excel 2010和SPSS 17.0軟件進行數據處理和統計分析，組間差異采用Duncan's多重比較，描述性統計值均采用平均值±標準差的形式表示，顯著性水平設在P=0.05。

2 結果與分析

2.1 鹽度對東方新糠蝦成活率的影響

試驗過程中，東方新糠蝦在純淡水中2 h內即已死亡過半，通體發白，側臥，觸碰無反應。其余糠蝦也已表現出明顯的死亡癥狀，體色變淡，觸碰雖可輕微活動，但活力較弱，遂即在3 h左右全部死亡。東方新糠蝦在鹽度高于5的低鹽范圍內表現出較強的耐受性，但對外界刺激較為敏感，試驗進行3 d后，成活率均在80%以上。而高鹽度組糠蝦則表現不佳，絕大多數個體已死亡，其余大部分個體也聚集在燒杯底部，活力明顯減弱（表1）。

表1 不同鹽度條件下東方新糠蝦存活數（尾）

鹽度 編號 2 h 6 h 12 h 24 h 36 h 48 h 72 h 存活率/% 平均存活率/%30 3 20 20 19 17 15 14 12 60 63.33 1 11 7 0 0 0 0 0 0 352 12 6 0 0 0 0 0 0 3 10 7 0 0 0 0 0 0 0 1 6 2 0 0 0 0 0 0 402 4 2 0 0 0 0 0 0 3 4 0 0 0 0 0 0 0 0

不同鹽度試驗條件下，東方新糠蝦存活率隨時間變化趨勢見圖1所示。結果顯示，隨著試驗的進行，東方新糠蝦死亡數量逐漸增加，存活率隨時間變化呈現不同程度的下降趨勢。比較各鹽度組存活率變化趨勢可以看出，鹽度15～25各組存活率均很高，72 h存活率均在95%以上，3條變化趨勢線幾乎重合（P＞0.05）；35、40兩組糠蝦個體均在 12 h內全部死亡，存活率與其余鹽度組差異均極具統計學意義（P＜0.01）；5、10兩組存活率顯著低于 15～25各組（P＜0.05），并顯著高于 30～40 各組；而鹽度為 0的純淡水組，糠蝦個體實際在3 h左右即已全部死亡。試驗結果表明，鹽度因子對東方新糠蝦的存活有著顯著影響，東方新糠蝦對低鹽的耐受能力要顯著強于對高鹽的耐受能力。

2.2 漂白粉對東方新糠蝦病死率的影響

圖1 不同鹽度條件下東方新糠蝦存活率隨時間變化趨勢

根據預試驗結果，設定5種不同漂白粉濃度（0.5、1、2、4、8 mg/L）對東方新糠蝦進行急性毒性試驗，試驗結果見表2，濃度0 mg/L為自然海水對照組。

試驗結果顯示，東方新糠蝦對漂白粉的急性毒性非常敏感。在不同漂白粉濃度下，漂白粉濃度越大，對東方新糠蝦產生的毒性影響也越大，東方新糠蝦半數致死的時間也越短。而漂白粉濃度為0.5時，72 h時東方新糠蝦病死率為28.33%，雖有部分東方新糠蝦個體出現體色變淡、側臥現象，但輕輕觸碰后仍可快速躲開。漂白粉濃度為8時，2 h內東方新糠蝦病死率即達到12%，更是在12 h時全部死亡，通體發白，觸碰無任何反應。經計算，漂白粉對東方新糠蝦24、48、72 h的半致死濃度分別為2.639、1.149、0.812 mg/L，安全濃度為 0.065 mg/L（表3）。

表2 不同濃度漂白粉對東方新糠蝦死亡數的影響 尾

表3 漂白粉對東方新糠蝦的半致死濃度和安全濃度

3 討論

3.1 鹽度對東方新糠蝦的急性毒性影響

鹽度是水生生物生存的重要環境因子，鹽度對不同水生動物的影響不同，對糠蝦的影響也依不同品種而有差異。陳迪虎等[16]在鹽度變化對糠蝦成活率的影響研究中，表明鹽度25為安全濃度，鹽度30則會對糠蝦成活率有著顯著的負面影響，鹽度逐步淡化到0.1會顯著提高成活率；而楊海萍等[14]在鹽度對黑褐新糠蝦成活的影響研究中表明，黑褐新糠蝦的病死率和鹽度呈正相關關系，鹽度5～30時病死率較低，鹽度35以上病死率較高，45以上黑褐新糠蝦基本全部死亡，整體表現對低鹽具有較好的耐受性。該試驗中，在鹽度高于35的高鹽度環境下，東方新糠蝦在6 h內病死率即可達100%，而楊海萍等[14]的報道黑褐新糠蝦在鹽度35時48 h仍保持70%左右的成活率，鹽度45時才會全部死亡，兩者結果存在明顯不同，表明東方新糠蝦對高鹽的耐受能力要顯著弱于黑褐新糠蝦。該試驗結果表明東方新糠蝦對低鹽具有較好的耐受性，這一結果也與陳迪虎等[16]、楊海萍等[14]的報道結果相似。

3.2 漂白粉對東方新糠蝦的急性毒性影響

漂白粉作為一種最常用的水體消毒劑，其對于殺滅水體中有害生物、病原菌等有著極其有效的作用。漂白粉在水中形成的次氯酸能夠透過細胞膜，破壞病原菌包內蛋白質的活性，殺菌效率高，殺菌譜廣。濃度使用不當，不僅可以殺滅病原菌等有害生物，對水體內的養殖生物亦會造成不同程度的影響[17-19]，生產上推薦使用的質量濃度一般為1 mg/L[17]。東方新糠蝦的高密度培養是在三疣梭子蟹和日本對蝦混養土池的基礎上進行，主養品種梭子蟹和日本對蝦一旦發生纖毛蟲或者其他等病害，往往采用一定濃度的漂白粉進行消毒殺菌。當需要潑灑漂白粉來進行水體消毒時，該試驗結果可以作為一定的參考，來指導潑灑漂白粉的濃度，配合著適當增換新水，做到既能殺滅病原菌的作用，又不至于對東方新糠蝦產生毀滅性的毒害，進而影響高密度培養的效果。

該試驗結果表明，東方新糠蝦對低鹽度具有較好的耐受性，這與其廣泛分布于河口、岸邊等咸淡水海域的生活習性相吻合，進一步證明其是一種河口性糠蝦品種。該試驗研究結果對于制定東方新糠蝦土池規模化培養技術方案具有一定的指導意義。