氣相色譜法測定貝類中撲草凈殘留方法建立

李如茵，王洪艷，應錦玲，劉 佳

（1. 青島工學院，山東 青島 266003；2. 青島新希望琴牌乳業有限公司，山東 青島 266003）

0 引言

撲草凈，又稱撲草凈胺，別名捕草凈、割草佳、撲蔓盡，為均三氮苯類選擇性除草劑，化學名稱為4,6 -雙異丙胺基- 2 -甲硫基- 1,3,5 -三嗪，分子式為C10H19N5S[1]，難溶于水，易溶于有機溶劑，在中性、微酸性或微堿性介質中穩定，遇強堿和強酸易分解。撲草凈作為除草劑不僅在農業生產中被廣泛使用，在水產養殖中由于能夠清除魚、蝦、蟹、貝、海參等養殖水體中的絲狀藻類（青苔）、大型草類及有害藻類[2]，也被廣泛應用。導致養殖水體中有撲草凈殘留，近年來我國出口水產品中撲草凈含量較高，海參、貝類、海帶等產品中都有撲草凈殘留超標的報道，嚴重影響出口貿易和消費者健康。日本已對貝類及其產品中撲草凈的含量進行監測，限量要求為10 μg/kg。目前撲草凈的檢測多采用高效液相色譜串聯質譜法和氣相色譜質譜法，但是質譜價格昂貴、檢測成本高。一般實驗室會根據實驗室的條件和分析要求選擇合適的分析方法。根據撲草凈分子中含有硫元素，可用火焰光度（FPD） 檢測器檢測，另外撲草凈屬于高溫易揮發化合物，所以試驗欲建立氣相色譜-FPD 檢測器檢測貝類中撲草凈的檢測方法，為貝類中撲草凈的去除方法研究提供檢測方法，為水產品安全控制做出貢獻。

1 材料與方法

1.1 材料

市售蛤蜊、牡蠣、貽貝；娃哈哈純凈水；乙腈（色譜級）；撲草凈標準品，國家標物中心提供；正己烷，色譜純；二氯甲烷，分析純；無水硫酸鈉，分析純。

GC2010-plus 型島津氣相色譜儀；FPD 檢測器（S 濾光片）；FA25 型均質機；RE-52A 型旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠產品；SHZ-D（Ⅲ） 型循環水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責任公司產品；湘儀L530 型離心機，長沙高新技術產業開發區湘儀離心機儀器有限公司產品；2300TH 型超聲波清洗器；空氣壓縮機；氫氣發生器，濟南浩偉實驗儀器有限公司產品；分析天平。

1.2 方法

1.2.1 標準溶液配制

（1） 標準貯備液的配制。準確稱取50 mg 撲草凈標準品至50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得1.0 mg/mL 的標準貯備液。

（2） 標準使用溶液的配制。從1 mg/mL 的標準貯備液中分別吸取1 mL 加入到10 mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度得100 μg/mL 的標準溶液，

1.2.2 氣相色譜條件

進樣口溫度250 ℃；色譜柱為石英毛細管柱，Rtx-5，30 m，0.25 mm ID，0.25 μm；柱溫100 ℃保持1 min，以15 ℃/min 升溫至280 ℃，保持5 min；FPD 檢測器（硫濾光片） 溫度280 ℃；不分流進樣方式，進樣量1 μL；氣體流量：氫氣4 mL/min，空氣6 mL/min。

1.2.3 樣品處理

元素個人顏色與統一顏色之間相關關系布爾矩陣F(a)×F(A)可用式(28)表示，每一列表示對應統一顏色與哪些個人顏色有關，如第1列[1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0]T表示操作工人統一顏色與起始完工時間顏色、執行人顏色、工裝設備顏色、超差零件顏色、易損傷零件顏色、工時定額顏色和關鍵工序顏色有關。

取樣品2 g 于離心管中，加入15 mL 乙腈，均質1 min，另取離心管，其中倒入15 mL 乙腈，清洗均質機刀頭。將均質后的樣品置于離心機中，以轉速4 000 r/im 離心5 min，用吸管將上層提取液轉移到另一支離心管中，再將剛清洗均質機的15 mL 乙腈倒入裝有樣品的離心管中，超聲振蕩2 min，再放入離心機中，以轉速4 000 r/min 離心5 min，合并提取液。向裝有乙腈提取液的離心管中加入10 mL 正己烷，振蕩脫脂，取下層乙腈，通過帶有無水硫酸鈉的漏斗過濾到蒸餾燒瓶中，再用10 mL 乙腈清洗無水硫酸鈉和濾紙，以盡可能地回收撲草凈。將裝有乙腈提取液的蒸餾燒瓶放在旋轉蒸發儀上40 ℃蒸餾至近干，向蒸餾燒瓶中加入2 mL 正己烷，超聲處理1 min 后，過濾后分析。

2 結果與分析

2.1 儀器分析條件確定

最初采用水產行業標準SCT 9412—2014[3]水產養殖環境中撲草凈的測定方法中的條件，進樣口溫度230 ℃，柱溫100 ℃，保持1 min，以15 ℃/min 升溫至240 ℃，保持20 min，檢測器溫度240 ℃。結果表明，撲草凈標品不出峰?？紤]到進樣口和檢測器溫度溫度偏低，可能是導致不出峰的原因。將進樣口溫度提高到250 ℃，檢測器溫度升高到280 ℃，結果撲草凈出峰，撲草凈的保留時間為10.45 min。出峰較晚。為了提高分析速度，將撲草凈出峰時間提前，將柱溫最終的240 ℃升高到280 ℃，與檢測器溫度一致。撲草凈保留時間前移至7.5 min，保留時間縮短了3 min，提高了分析效率，另外色譜柱最終溫度與檢測器溫度一致，也有利于雜質揮發，有利于凈化色譜柱和檢測器。

升溫前撲草凈色譜圖見圖1，升溫后撲草凈色譜圖見圖2。

圖1 升溫前撲草凈色譜圖

圖2 升溫后撲草凈色譜圖

2.2 氣體流量的選擇

撲草凈的分子式為C10H19N5S，分子中含有硫原子，選用適合于分析含磷和硫的火焰光度檢測器（FPD） 并加裝硫濾光片，由于燃燒的氫氣和空氣的流量和比例對撲草凈信號強度影響較大，所以對空氣和氫氣的流速進行優化，根據撲草凈的信號強度選擇流速，最終確定氫氣和空氣的流速分別為氫氣4 mL/min，空氣6 mL/min。

2.3 樣品前處理條件改進

2.3.1 樣品提取液的選擇

取3 份貝類樣品，加入撲草凈標準溶液，添加量為0.1mg/kg。依據文獻方法[3-5]，分別選擇二氯甲烷、乙腈-水（1∶4，體積比）、乙腈3 種試劑作為提取液，提取貝類樣品中添加的撲草凈，依據回收率的高低選擇合適的提取液。二氯甲烷提取液提取撲草凈，回收率為41.1%，回收率低，不能滿足要求，改用乙腈-水（1/4） 提取，回收率提高到64.2%，但是仍然低于70%。借鑒蔬菜水果中農藥提取方法，改用乙腈提取，結果回收率提高到89.6%，滿足要求。

不同提取液提取蛤蜊中撲草凈的回收率見表1。

表1 不同提取液提取蛤蜊中撲草凈的回收率

2.3.2 除水脫脂步驟的優化

2.4 方法學評價

2.4.1 線性范圍與檢出限

從100 μg/mL 的撲草凈標準溶液中分別吸取不同體積，配制成0.05，0.10，0.20，0.50 μg/mL 標準溶液，每個質量濃度取1 μL 注入氣相色譜儀進行分析。在試驗條件下，以峰面積Y 為橫坐標、質量濃度C（μg/mL） 為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程，以基線噪聲3 倍峰面積對應的質量濃度為儀器的檢出限（RSN=3）。

撲草凈的線性回歸方程、相關系數、線性范圍和檢出限見表2。

表2 撲草凈的線性回歸方程、相關系數、線性范圍和檢出限

由表2 可知，撲草凈在0.05～0.5 μg/mL 內線性關系良好，相關系數都大于0.99，即在此范圍定量準確。

2.4.2 回收率與精密度

回收率和精密度是衡量方法準確度的有效指標，為了測試方法的回收率和精密度，分別在蛤蜊、貽貝、牡蠣中進行了添加回收試驗。

貝類中撲草凈的回收率和精密度測定結果見表3。

表3 貝類中撲草凈的回收率和精密度測定結果

GB/T 27404—2008[6]實驗室質量控制規范中規定被測組分含量在0.1～10.0 mg/kg，添加回收率應該在70%～120%，試驗中幾種貝類樣品中撲草凈回收率都在標準規定范圍之間，相對標準偏差RSD 均小于10%，說明該方法的回收率和精密度都滿足要求，可以用于貝類中撲草凈的測定。

2.5 方法應用

在膠州市東店子村市場、水寨市場、湖州路市場抽取蛤蜊、貽貝、牡蠣3 種貝類樣品各3 份，應用文中方法檢測，其中只有水寨市場購買的蛤蜊中有0.14 mg/kg 撲草凈檢出，其他樣品均未檢出撲草凈殘留。

3 結論

通過對氣相色譜條件和樣品前處理條件進行優化，建立了氣相色譜火焰光度檢測器檢測貝類中撲草凈的檢測方法，得出最低檢出質量濃度為0.05 mg/kg，撲草凈在0.05～0.50 μg/mL 內線性關系良好，相關系數均大于0.99。該方法可以用于貝類中撲草凈的殘留檢測。蛤蜊、貽貝、牡蠣中回收率在80%～110%，滿足要求，方法標準偏差低于10%，精密度較高。

在膠州市東店子村市場、水寨市場、湖州路市場抽取蛤蜊、貽貝、牡蠣3 種貝類樣品各3 份，應用文中方法檢測，其中只有水寨市場購買的蛤蜊中有0.14 mg/kg 撲草凈檢出，其他樣品均未檢出撲草凈殘留。