淺析面癱動(dòng)物模型的制備與比較*

李小娟 趙中亭 曹朝霞 魏玉婷 嚴(yán)興科

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)， 蘭州 730000)

面癱是針灸臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病，是針灸治療的優(yōu)勢(shì)病種。面癱的誘發(fā)原因目前尚未確定，且存在各種假說(shuō)[1-7]包括血管痙攣學(xué)說(shuō)、病毒感染學(xué)說(shuō)、免疫學(xué)說(shuō)、神經(jīng)源性學(xué)說(shuō)、遺傳學(xué)說(shuō)、妊娠學(xué)說(shuō)等，但都缺乏高質(zhì)量的證據(jù)支持，給臨床研究帶來(lái)了很大的困難，尤其是對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的機(jī)制探討出了難題。在動(dòng)物模型的選擇上，如何選擇最真實(shí)模擬現(xiàn)實(shí)面癱發(fā)病情況的造模方法成為研究成敗的關(guān)鍵。目前面癱模型較多使用的動(dòng)物有：大鼠、小鼠、日本大耳白兔等。造模方法[8-12]有面神經(jīng)切斷、壓榨、牽拉、結(jié)扎、撞擊、爆破沖擊、激光照射、冷熱刺激、接種病毒等，這些造模方法各有特點(diǎn)。如何恰當(dāng)?shù)剡x擇不同類型面癱動(dòng)物模型，對(duì)探討針灸治療不同類型面癱的作用機(jī)制尤為重要，本文對(duì)各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及造模方法進(jìn)行歸納總結(jié)，現(xiàn)綜述如下：

1 造模動(dòng)物

在實(shí)驗(yàn)中多選用嚙齒類動(dòng)物為造模動(dòng)物，其中大鼠、小鼠、兔在面癱研究中最常使用。

1.1 大鼠

大鼠來(lái)源十分廣泛，價(jià)格相對(duì)便宜，易于調(diào)教和捕捉，再生能力和抗感染能力都很強(qiáng)，其面神經(jīng)主干較淺且粗大，與人類較為相似，故大鼠較多地用于神經(jīng)損傷性面癱的造模。Jang 等[13]選取大鼠暴露左側(cè)面神經(jīng)主干，用微血管鉗鉗夾一分鐘，最后建立左側(cè)面部面神經(jīng)麻痹模型。虞彬艷等[14]用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后，參考王杰等[15]制備缺血性面癱大鼠模型的方法，于右頸側(cè)切口，暴露頸外動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈，以制備缺血性面癱大鼠模型。蘇莉莎等[16]用烏拉坦腹腔注射麻醉大鼠，暴露右側(cè)頸乳孔外的面神經(jīng)主干，并將其于遠(yuǎn)側(cè)神經(jīng)干處切斷，切除5 mm防止其再生，止血、縫合傷口，術(shù)后可見(jiàn)術(shù)側(cè)觸須即刻失去拂動(dòng)能力，并向尾側(cè)垂下，瞬目反射表現(xiàn)較遲鈍，閉眼幅度變?nèi)跎踔敛荒苷T發(fā)，周圍性面癱模型復(fù)制成功。

1.2 小鼠

小鼠體型小，性情溫順，不主動(dòng)咬人，易于飼養(yǎng)管理，較多地用于病毒性面癱造模。Hato等[17]在研究HSV-1感染導(dǎo)致貝爾麻痹發(fā)病機(jī)制實(shí)驗(yàn)中，采用于小鼠耳后接種HSV-1病毒液建立貝爾氏麻痹模型。古林濤等[18]腹腔注射10%水合氯醛麻醉小鼠，搔刮小鼠左側(cè)近耳根部耳廓皮膚，取25 μL HSV-1病毒液接種于小鼠耳廓?jiǎng)?chuàng)面，接種病毒后第三天，通過(guò)觀察小鼠瞬目反射及胡須運(yùn)動(dòng)是否減弱、鼻尖是否偏向?qū)?cè)，以判斷面癱造模是否成功。

1.3 兔

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔體形大，性情溫和，面神經(jīng)粗大，面肌功能相對(duì)強(qiáng)大，便于觀察，且與人類解剖及生理接近，頭面部較大，易于取穴治療。衛(wèi)彥和寇吉友[19]選用日本大耳白兔，3%戊巴比妥鈉靜脈麻醉,取耳屏前至下頜角下緣“S”形切口，鈍性剝離皮膚、皮下組織,在腮腺筋膜表面向前剝開(kāi)皮瓣，用小號(hào)持針器鉗夾面神經(jīng)，造模成功標(biāo)準(zhǔn)為兔的胡須由直立變?yōu)槠蚝蠓剑|須運(yùn)動(dòng)消失，面運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢。王宇娟等[20]選用新西蘭兔，用戊巴比妥鈉耳緣靜脈推注麻醉，暴露面神經(jīng)顳外段，在進(jìn)入頸乳孔前1 cm面神經(jīng)總干處切斷神經(jīng)，術(shù)后第七天肌電圖檢查發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)兔患側(cè)肌出現(xiàn)失神經(jīng)肌電圖表現(xiàn)，即單側(cè)周圍性面癱兔模型成功。

2 造模方法

在實(shí)驗(yàn)中面癱造模多選用面神經(jīng)切斷法、面神經(jīng)壓榨法、面神經(jīng)牽拉法、寒冷刺激法、阻斷血管法、接種病毒法，研究者根據(jù)面癱模型的適用范圍選用相應(yīng)的面癱造模方法。

2.1 面神經(jīng)切斷法

面神經(jīng)切斷法即將暴露的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的神經(jīng)上頰支切除其中的一段，任其回縮，造成神經(jīng)缺損的動(dòng)物模型造模法。面神經(jīng)切斷法是直接切斷面神經(jīng)來(lái)模擬面癱發(fā)生時(shí)面神經(jīng)的癱瘓狀態(tài)。朱鴷[21]、孫健等[22]采用面神經(jīng)切斷法，將面神經(jīng)切斷，模型成功體現(xiàn)了面癱時(shí)神經(jīng)功能缺損的特點(diǎn)，符合外傷造成面神經(jīng)癱瘓的特點(diǎn)。

2.2 壓榨法

壓榨法即將麻醉后的動(dòng)物解剖并暴露實(shí)驗(yàn)側(cè)面神經(jīng)出顱后的面神經(jīng)總干，并用絲線在緊靠莖乳孔處緊密牢固地結(jié)扎面神經(jīng)總干的面神經(jīng)癱瘓的造模方法。目前在針刺治療面神經(jīng)麻痹的實(shí)驗(yàn)研究中最常用的動(dòng)物模型是壓榨損傷性動(dòng)物模型[23]。王愷等[24]用壓榨法進(jìn)行造模，成功后觀察病理改變，電鏡下髓鞘形態(tài)、軸索形態(tài)出現(xiàn)病變，模型成功模擬了因各種原因造成的神經(jīng)被壓迫導(dǎo)致的面癱，此模型重點(diǎn)側(cè)重面癱時(shí)神經(jīng)本身的改變，符合血管痙攣導(dǎo)致的神經(jīng)缺血的學(xué)說(shuō)。

2.3 牽拉法

牽拉法即神經(jīng)延長(zhǎng)法，是外科領(lǐng)域如肢體牽引、下頜骨延長(zhǎng)、組織擴(kuò)張及創(chuàng)傷等所出現(xiàn)的一種現(xiàn)象，根據(jù)這種神經(jīng)延長(zhǎng)的現(xiàn)象發(fā)明的一種面癱模型的造模方法，具體方法是將延長(zhǎng)器置于神經(jīng)所在的平面上，通過(guò)旋轉(zhuǎn)螺帽使?fàn)恳喤c支撐輪處于同一高度，將已解剖游離的神經(jīng)套入支撐輪及牽引輪的槽溝中，進(jìn)行勻速牽拉，最終造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物面神經(jīng)缺血的造模方法。牙祖蒙等[25]以弦式加載的方式對(duì)面神經(jīng)進(jìn)行延長(zhǎng)，觀察延長(zhǎng)前后面神經(jīng)的病理形態(tài)學(xué)及電生理變化，此模型良好地體現(xiàn)了神經(jīng)缺損后神經(jīng)的損傷與修復(fù)，但應(yīng)用范圍局限性較大。

2.4 寒冷刺激法

寒冷刺激法即通過(guò)冷空氣刺激的方式造成面癱模型的方法。Zealear等[26]通過(guò)冷空氣刺激動(dòng)物鼓膜造成面癱的方法，觀察面神經(jīng)的傳導(dǎo)，復(fù)合動(dòng)作電位，神經(jīng)內(nèi)膜、軸索、髓鞘和軸索的改變研究面癱的機(jī)制。此模型良好地模擬了自然環(huán)境下面癱的誘發(fā)，符合血管痙攣說(shuō)，但此模型造模成功率差，受個(gè)體健康因素影響嚴(yán)重，實(shí)際操作難度很大。

2.5 阻斷血管法

面神經(jīng)血管痙攣、面神經(jīng)缺血是面癱學(xué)說(shuō)之一，因此選擇性切斷面神經(jīng)供血，建立面神經(jīng)麻痹的動(dòng)物模型，此方法主要阻斷小腦前下動(dòng)脈、耳后動(dòng)脈的分支莖乳動(dòng)脈、腦膜中動(dòng)脈的巖淺支等面神經(jīng)的血管，此方法主要用于面神經(jīng)病因?qū)W的研究。Kumoi 等[27]通過(guò)栓塞貓的頜內(nèi)動(dòng)脈、耳后動(dòng)脈和頜外動(dòng)脈，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都出現(xiàn)面癱癥狀。王杰等[28]扎閉大鼠的面動(dòng)脈、舌動(dòng)脈、顳淺動(dòng)脈和近端頸外動(dòng)脈，并注入栓塞劑后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物立即出現(xiàn)同側(cè)面癱，此模型良好地模擬了神經(jīng)缺血的情況，符合面癱的血管痙攣缺血學(xué)說(shuō)。

2.6 接種病毒法

最近的研究顯示，單純皰疹病毒1型是貝爾氏麻痹的一個(gè)主要病因因素[29]。Jiang等[30]使用由26號(hào)針頭將雙邊耳廓表面劃傷并進(jìn)行HSV-1滴度，結(jié)果面部神經(jīng)麻痹的發(fā)病率為50%。Wang等[31]對(duì) BALB/c小鼠四周進(jìn)行雙邊耳廓表面劃傷并進(jìn)行HSV-1滴度，結(jié)果接種小鼠之間出現(xiàn)不同程度的面癱。相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)物理及缺血模型與臨床上面神經(jīng)麻痹的病理生理過(guò)程不盡相同，并不能完全反應(yīng)機(jī)體的病理變化，采用病毒感染造模的研究能更貼近面神經(jīng)麻痹發(fā)生的病理生理改變，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床更具有現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。

3 討論與展望

綜上所述，面癱動(dòng)物模型已經(jīng)成為面癱研究中使用廣泛且重要的手段之一。面癱造模的動(dòng)物種類繁多，造模方法各具特色，神經(jīng)損傷性面癱模型最為常用，其應(yīng)用范圍也最為廣泛，適用于研究面神經(jīng)損傷后的恢復(fù)情況、病理生理變化、失神經(jīng)支配后肌肉的運(yùn)動(dòng)、面神經(jīng)核和神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)、功能的變化以及面神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與神經(jīng)損傷關(guān)系等。缺血性面癱模型適用于血管痙攣缺血所致的面神經(jīng)麻痹的研究，該模型的建立主要用于面神經(jīng)病因?qū)W的研究，為進(jìn)一步研究面癱的病位提供了科學(xué)依據(jù)。病毒性面癱模型不僅說(shuō)明了 HSV-1感染能夠?qū)е旅姘c，也為進(jìn)一步深入研究貝爾麻痹的發(fā)病機(jī)理和治療提供依據(jù)。然而目前仍有許多待解決的問(wèn)題，動(dòng)物模型的制備未能完全貼近人面癱的實(shí)際發(fā)病情況，其發(fā)病機(jī)制還未能完全闡釋清楚，動(dòng)物模型只能間接反映人類疾病。造模時(shí)對(duì)動(dòng)物年齡、面神經(jīng)卡壓時(shí)間、神經(jīng)切斷長(zhǎng)度等缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，不能較為精準(zhǔn)地模擬動(dòng)物面癱實(shí)際情況。中醫(yī)認(rèn)為急性周圍性面癱有風(fēng)、寒、熱、外傷等病因，病機(jī)方面多因脈絡(luò)空虛，風(fēng)寒、風(fēng)熱之邪乘虛侵襲面部筋絡(luò)導(dǎo)致氣血阻滯、經(jīng)絡(luò)不通而發(fā)病，但目前未能緊扣中醫(yī)辨證辨病，未能客觀模擬中醫(yī)不同證型的面癱。在未來(lái)的研究中如何解決諸如此類的問(wèn)題，有待于廣大臨床及科研工作者進(jìn)一步廣泛深入地研究，在今后的研究中我們應(yīng)重點(diǎn)將中醫(yī)理論與現(xiàn)代臨床研究相結(jié)合。