大飛揚草的三維熒光光譜研究

白 燕，林玉婷，孫宏元，黎 明，左文健

（1.海南熱帶海洋學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，海南三亞 572022；2.海南熱帶海洋學(xué)院理學(xué)院，海南三亞 572022；3.海南熱帶海洋學(xué)院水產(chǎn)與生命學(xué)院，海南三亞 572022；4.東海中學(xué)，福建泉州 362000）

中藥品質(zhì)控制一直是中藥研究的一個熱點，指紋圖譜基于中藥物質(zhì)群整體作用的認(rèn)識[1]，從而實現(xiàn)中藥的鑒別和評價，進(jìn)而實現(xiàn)品質(zhì)控制。三維熒光光譜可以全面反映復(fù)雜中藥體系的熒光特征[2]，便于區(qū)分中藥成分的熒光峰和各種散射峰，近年來也得到人們的關(guān)注。

大飛揚草是典型的南藥資源，具有清熱解毒、利濕止癢、通乳的作用[3]，已收錄到《中國藥典》中。飛揚草的成分[4]主要有黃酮類、丹寧類、三萜類、二萜類、糖苷類及其他。武毅等人[5]對大飛揚草地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其化學(xué)成分有東莨菪亭、濱蒿內(nèi)酯、異東莨菪亭、槲皮素、異鼠李素、喬松素、山奈酚、木犀草素和沒食子酸。王莉等人[6]研究了飛揚草地上部分70%丙酮提取物的化學(xué)成分。黃勇紅等人[7]研究了廣東12批飛揚草的HPLC色譜指紋圖譜，確定有9個共有色譜峰。

利用熒光分光光度計測定了不同采集時間的大飛揚草的整株、葉、莖、根的三維熒光光譜，并結(jié)合文獻(xiàn)對各熒光峰的歸屬進(jìn)行了分析。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

RF-5301PC型熒光分光光度計，1 cm石英比色皿。大飛揚草在海南熱帶海洋學(xué)院校園內(nèi)采集（時間為11月26日到12月17日，每隔1周采集1次）。試驗中所有用水均為超純水。

1.2 試驗方法

準(zhǔn)確稱取0.100 0 g大飛揚草置于燒杯中，加水煮沸10 min，冷卻至室溫，過濾2次，轉(zhuǎn)移到100 mL容量瓶中定容。將其稀釋到10 mg/dm3備用。熒光光譜發(fā)射波長（EM）掃描范圍為220～650 nm，激發(fā)波長（EX） 掃描范圍為220～580 nm，間隔5 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 大飛揚草三維熒光光譜圖

第2周采集的大飛揚草三維熒光光譜見圖1。

圖1 大飛揚草的三維熒光圖譜

所有圖中都有明顯的瑞利散射峰，見圖1（a）中e箭頭所示粗黑線，部分圖中可以看到二級瑞利散射峰，見圖1（a） 中f箭頭所示。瑞利散射和拉曼散射與溶劑分子有關(guān)，由于不是研究的重點，后面將不再贅述。圖中類似指紋的等高線圖是大飛揚草的熒光成分的熒光圖譜[2]。

2.2 峰位置分析

大飛揚草熒光峰位置分布見圖2。

圖2 大飛揚草熒光峰位置分布

采集時間對大飛揚草的三維熒光光譜有影響，采集時間不同，出現(xiàn)的熒光峰的數(shù)目和位置不同。共有峰體現(xiàn)了研究體系的特點，可以用于鑒別。整株有2個共有峰，分別位于λEX/λEM=382 nm/476 nm附近和λEX/λEM=310 nm/433 nm附近；葉有2個共有峰，分別位于λEX/λEM=391 nm/469 nm附近和λEX/λEM=305 nm/435 nm附近；莖無共有峰；根有3個共有峰，分別位于 λEX/λEM=309 nm/380 nm附近，λEX/λEM=250 nm/449 nm附近和λEX/λEM=229 nm/317 nm附近。莖沒有共有峰可能是因為莖連接葉和根，既能表現(xiàn)出葉的特征，也能表現(xiàn)出根的特征，因此本身的熒光峰峰位置較分散。

圖2中a位置峰位于λEX/λEM=385 nm/466 nm附近。Wang L[8]和王麗等人[9]測得獨活和綿頭雪蓮的主要成分東莨菪亭的熒光光譜，與其對比，可以得出a位置峰應(yīng)該是東莨菪亭的熒光峰。從圖2中看到，整株、葉和莖在a位置有熒光峰，說明大飛揚草整株中的東莨菪亭來源于葉子和莖，在根中沒有出現(xiàn)此熒光峰，可能在根中沒有東莨菪亭。

圖2中b位置的熒光峰位于λEX/λEM=309nm/429nm，c位置莖的熒光峰位于λEX/λEM=239 nm/435 nm附近，與文獻(xiàn)[10]中報道的濱蒿內(nèi)酯的熒光峰較為接近，可能在莖、葉、根中都存在濱蒿內(nèi)酯。

圖2中g(shù)位置峰位于λEX/λEM=229 nm/311 nm附近，f位置峰位于λEX/λEM=280 nm/319 nm，可能是酚酸類化合物，與文獻(xiàn)中[11]報道的丁香酚的峰位置λEX/λEM=235 nm/315 nm和 λEX/λEM=280 nm/315 nm較為接近，推測在大飛揚草的莖和根中可能含有丁香酚。

根據(jù)文獻(xiàn)報道，槲皮素[12]、山奈酚[13]和沒食子酸[13]本身沒有熒光。未找到異鼠李素、喬松素、木犀草素本身的熒光光譜的報道，但是這幾種都有作為熒光猝滅劑的報道[14-15]。圖2中葉、莖、根在c位置的熒光峰還未找到歸屬，莖、根在d位置的熒光峰，莖在e位置的熒光峰也未找到歸屬，還需要進(jìn)一步的研究。

從圖2可以很方便地判斷各個熒光組分存在的部位，是在葉中、在莖中，還是在根中，一目了然。因此推薦建設(shè)中藥的三維熒光光譜數(shù)據(jù)庫時，不但應(yīng)該給出三維熒光光譜圖，同時給出各個藥品的熒光峰位置分布圖，從而可以更好地利用數(shù)據(jù)。另外，大部分中藥并不是整株入藥，因此在研究中就忽視了未入藥的部分，而未入藥的部分也可能包含重要的信息，各個部位信息的相互印證，可能會使結(jié)果更加準(zhǔn)確。

3 結(jié)論

大飛揚草的整株、葉、根的三維熒光譜圖共有峰明顯，可用于鑒別，莖的三維熒光譜圖無共有峰。大飛揚草的三維熒光峰位置分布圖可以直觀地給出各個熒光物質(zhì)存在的部位。未能給出歸屬的熒光峰有可能是還未被發(fā)現(xiàn)的新物質(zhì)，從而指導(dǎo)化學(xué)成分的分析研究。