miR-155與類風濕關節炎相關性Meta分析

楊國梅 寧耀貴，2 錢紅燕 陳世菊

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以慢性、進行性、多發性、侵襲性，以關節滑膜炎和關節外病變為主要臨床表現的自身免疫性疾病，嚴重時導致患者功能障礙[1]。微小RNA（miRNA）是一種內源性、長度約22個核苷酸小型非編碼單鏈RNA，通過抑制信使RNA的翻譯起到轉錄后調節功能，參與機體重要的生理病理過程[2]。miR-155異常表達影響先天和適應性免疫反應，從而導致免疫性疾病的發展。本文針對類風濕關節炎人群中miR-155進行Meta分析，分析miR-155與RA發生風險。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索

以 類 風 濕 關 節 炎、Rheumatoid Arthritis、microRNA155、microRNA-155、miRNA-155、miR-155、hsa-mir-155及 miR-155-5p為檢索詞，在Pubmed、Embase、CNKI、萬方、維普數據庫、中國學位論文全文數據庫和中國重要會議論文全文數據庫檢索。檢索時間從建庫至2018年1月。同時手工搜索檢索文獻的參考文獻。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準 同時符合以下條件的發表于英文期刊或者中文期刊的研究被納入。（1）研究對象：①患者滿足1987年American College of Rheumatology（ACR） 或 者 2010年 American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism（ACR/EULAR）類風濕關節炎分類標準；②對照組為健康人群。兩組不論患者年齡、性別等。（2）研究類型：①病例對照試驗；②評價miR-155與RA的相關性。

1.2.2 排除標準 （1）研究對象非RA人群；（2）對照組非健康人群；（3）數據重復文獻；（4）綜述類文章；（5）統計方法不恰當；（6）數據不全。

1.3 數據提取

由2名評價者獨立提取，資料提取表格內容主要包括：第一作者姓名、出版年份、病例組及對照組年齡、性別、檢測樣本類型、種族、RA診斷標準、miR-155檢測方法及擴增參照物。兩位評估者檢查提取的數據，并對所有數據達成了一致意見。2名評價者獨立提取資料，并進行交叉核對，遇不同意見與第3名評價者討論解決。

1.4 數據處理

采用Cochrane系統評價軟件RevMan5.3進行Meta分析。本文對數據使用標準平均差（standardized mean difference，SMD）及其95%置信區間（confidence interval，CI）效應量表示。采用Z檢驗，P＜ 0.05為差異有統計學意義。采用I2統計檢驗確定各研究之間的統計異質性。當研究具有明顯異質性（I2＞50%）時，采用隨機效應模型進行Meta分析[3]。通過敏感性分析評價各研究對結果穩定性的影響。繪制漏斗圖來判斷發表偏倚，同時采用Egger檢驗評價報告偏倚。

2 結果

2.1 文獻基本情況

初檢共獲得文獻194篇，其中PubMed（n=29），Embase（n=138），萬方數據庫（n=6），維普數據庫（n=12），和CNKI數據庫（n=9）。文獻檢索過程見圖1。排除87篇重復文獻后剩余107篇，進一步排除15篇無關研究，43篇綜述、摘要類文獻，以及14 篇動物實驗，最后35篇文獻查找全文進一步篩查。排除27 篇文獻，其中26篇無法提取數據或數據不足，1篇研究的對照組為非健康人群，最后Meta分析共納入8篇文獻[4-11]，包括2篇英文文獻及5篇中文文獻，共計273例RA患者和183例對照人群。7項研究數據來自中國，包括1個維吾爾族和6個漢族，只有1項研究是來自高加索人群。有2項研究同時檢測了外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）和血漿樣本中miR-155表達[6-7]。納入文獻基本特征見表1。

2.2 Meta分析結果

MiR-155與RA相關性的Meta分析結果見圖2～4。不同的研究檢測miR-155水平時使用了不同的檢測標本，包括外周血PBMC、WBC、血清和血漿。其中有2個研究[6-7]文中提到使用的外周血單核細胞，文中細胞提取方法提取的應為外周血WBC，因此Meta分析時上述兩個研究樣本類型認為是WBC。基于檢測樣本的不同，進行亞組分析。

2.2.1 PBMC中miR-155與RA相關性 5個研究采用外周血PBMC細胞檢測miR-155表達水平[4，6-9]，共有179例RA患者及127例正常對照。異質性檢驗提示研究間存在統計學異質性（I2=93%，P＜0.000 01），采用隨機效應模型進行合并效應量估計。Meta分析結果顯示RA患者PBMC中miR-155水平高于正常人群[MD = 1.10，95%CI（0.15，2.06）]，差異具有統計學意義（P=0.02）（圖2）。

2.2.2 WBC細胞中miR-155與RA相關性 有2個研究采用WBC細胞檢測miR-155表達水平[9-10]，共有60例RA患者及40例正常對照。異質性檢驗提示研究間有統計學異質性（I2=80%，P=0.03），采用隨機效應模型分析。Meta分析結果提示WBC中miR-155表達水平不增加RA的發生風險[MD = 0.34，95%CI（-0.65，1.34）]，差異沒有統計學意義（P=0.50）（圖3）。

2.2.3 血漿miR-155與RA相關性 有2個研究同時檢測了血漿中miR-155[6-7]；共有77例RA患者及45例正常對照。異質性檢驗提示研究間有統計學異質性（I2=87%，P=0.006），采用隨機效應模型分析。結果顯示血漿miR-155表達水平不增加RA的發生風險[MD = 0.24，95%CI（-0.83，1.31）]，差異沒有統計學意義（P=0.66）（圖4）。僅有一篇文獻檢測血清中miR-155表達水平。

2.2.4 敏感性和發表偏倚分析 通過敏感性分析評價各研究對SMD和95% CI的影響，相應的SMD無顯著性變化。通過Begg漏斗圖（P=0.858）或Egger回歸（P＞0.1）沒有發現miR-155與RA易感性之間的相關性存在發表偏倚（圖5）。

表1 納入文獻基本特征

表1 續表

圖1 文獻篩選流程圖

圖2 PBMC中miR-155與RA風險Meta分析森林圖

圖3 WBC中miR-155與RA風險Meta分析森林圖

圖4 血漿miR-155與類風濕性關節炎風險Meta分析森林圖

圖5 miR-155與RA相關性漏斗圖

3 討論

miRNA參與炎癥疾病致病機制，miR-155無疑是其中研究最為熱門的miRNA之一，對疾病的診斷和預測具有巨大的潛在價值[12]。功能分析顯示過表達miR-155或miR-155敲低都會導致自身抗體和促炎細胞因子產生異常[13]，與關節炎的發病機制相關。因此薈萃分析不同標本來源的miR-155與RA的相關性有助于探討何種形式的miR-155是RA的風險因素，以及建議其作為一種診斷性生物標志物的合適檢測標本。

本文Meta分析273例RA病例和183例健康對照組中miR-155與RA的關系。根據檢測樣本不同，我們分別進行PBMC、WBC和血漿亞組分析，僅PBMC 中miR-155與RA風險相關，提示其是RA的危險因素。WBC、血漿標本結果提示二者均沒有相關。miR-155異常表達于RA患者外周血多種樣本中，Meta結果提示檢測PBMC中的miR-155結果可能更為穩定，外周血PBMC中miR-155可作為合適的檢測標本。細胞外血漿容易受到凝血過程影響，從而影響血漿miRANs譜[12]，這可能部分解釋了血漿miR-155與RA之間的陰性關系。此外不同研究采用miR-155表達方式和內參計算方法存在差異，也可能改變miRNA-155與RA相關性。本文納入研究樣本量少可能是另一個更為重要原因，今后需要更多的樣本來進一步驗證本文結論。

本人納入文獻研究對象主要是中國人群，包括漢族和維吾爾族，只有一項研究為高加索人。西方國家RA研究表明，miR-155在全血、血清、血漿、PBMC和Tregs表達均增高。有研究表明不同種族miRNA表達譜與循環miRNA濃度有關，這意味著miRNA譜特征在不同種族之間存在差異。

本文Meta分析存在一定局限性。首先納入研究數量偏少，樣本量也較小。亞組分析時血漿和WBC文獻少，僅一項研究檢測血清miR-155，無法得出相應結論，理解WBC和血漿的陰性結論也需謹慎。其次，本文納入的研究以中文文獻為主，因此結論外推到其他種族時需謹慎理解。總之本文Meta分析結果提示外周血PBMC中miR-155是RA的危險因素，今后需樣本量更大、種族更多的研究來進一步驗證二者風險關系。