加味蘇子降氣湯對哮喘模型大鼠細胞因子功能紊亂的調節

方寧 劉娟花

(1咸陽職業技術學院，陜西 咸陽 712046；2陜西中醫藥大學第一附屬醫院)

哮喘是由多種細胞(以肥大細胞、嗜酸粒細胞浸潤為主)和細胞組分參與的慢性氣道炎癥性疾病，以氣道高反應及慢性氣道炎性反應為主要特征。加味蘇子降氣湯對哮喘患者在緩解癥狀、降低副作用等方面均有較好的療效。本實驗通過觀察加味蘇子降氣湯對哮喘大鼠體內細胞因子水平的影響及對免疫網絡的調節，進一步探討加味蘇子降氣湯治療腎陽虛證哮喘的免疫機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 清潔級SD大鼠,雄性,40只，體重(160±20)g，月齡6～9個月，由西安交大實驗動物中心提供，實驗前于實驗室正常飼養1 w，分籠飼養，自由進食進水，飼料由西安交大實驗動物中心統一提供，為標準顆粒飼料。飼養實驗室采光、通風良好，室溫約25℃。

1.2藥物及試劑 加味蘇子降氣湯由紫蘇子、半夏、當歸、前胡、厚樸、肉桂、甘草等中藥組成，購于陜西中醫藥大學校醫院。采用自動煎藥機煎藥，密封包裝，每包100 ml，每毫升含生藥 1 g。哮喘模型致敏劑卵清白蛋白(OVA)，Sigma公司產品(分裝)；氫氧化鋁，購于天津市博迪化工有限公司；滅活百日咳桿菌疫苗來自上海生物制品研究所；靈芝孢子粉，購自陜西大至醫藥有限公司。白細胞介素(IL)-4、干擾素(IFN)-γ檢測所用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購于武漢博士德公司。

1.3主要器材 FAl004N電子天平，上海精密科學儀器公司；CC2170A超聲霧化器，成都維信電子科大新技術有限公司；SHHW21-600電熱恒溫水箱，天津市泰斯特有限公司；RT-2100C酶標分析儀，深圳雷杜電子有限公司。

1.4動物分組及哮喘模型制造 大鼠隨機分為正常對照組、哮喘模型組、加味蘇子降氣湯組和地塞米松組，每組10只。除正常對照組外，其余3組參照文獻〔1〕制造哮喘模型。首先進行致敏，分別于第1、7天經腹腔及四肢末端注射致敏液1 ml(含OVA 0.1 g，氫氧化鋁0.1 g，百日咳桿菌原液5×109個/ml)；于第14天開始，將模型大鼠置于密閉容器內，霧化吸入1% OVA溶液，1次/d，20 min/次，持續霧化吸入5 d，隨后減為隔日1次霧化，執行至第28天。哮喘模型激發成功的標志：每次霧化時，大鼠出現抖毛、咳嗽、腹式呼吸、煩躁，甚至跌倒、抽搐等表現。正常對照組給予生理鹽水代替致敏液進行致敏，致敏方式和方法同其余3組。

1.5用藥 地塞米松組、加味蘇子降氣湯組于激發第1天開始給藥。劑量：地塞米松組給予地塞米松 0.25 mg·kg-1·d-1，加味蘇子降氣湯組給予加味蘇子降氣湯2 ml·kg-1·d-1；正常對照組、哮喘模型組給予生理鹽水2 ml·kg-1·d-1。給藥方式均為灌胃。

1.6標本采集與檢測 將實驗大鼠按1.5 g/kg腹腔注射20%烏拉坦溶液，麻醉。肺泡灌洗法參照文獻〔2〕，將大鼠固定在手術板上，常規消毒，剪開頸部皮膚，鈍性分離，暴露氣管，用手術線結扎左肺，在頸部暴露氣管做一橫切口，將圓頭7號針頭進針約1.0 cm,以“0”號手術線結扎固定，對右肺用生理鹽水(37℃)3 ml進行支氣管肺泡灌洗，每次保留30 s后抽出，如此反復3次,動作宜輕柔，肺泡灌洗液回收總量約8 ml，3 000 r/min離心15 min，取上清液放入Eppendof管中待測。采用ELISA檢測肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ水平操作參照試劑盒說明書進行。

1.7統計學方法 應用SPSS17.0 軟件行t檢驗。

2 結 果

哮喘模型組肺泡灌洗液中IL-4含量明顯高于正常對照組，IFN-γ含量明顯低于正常對照組，差異有顯著統計學意義(P<0.01)；與哮喘模型組相比，加味蘇子降氣湯組、地塞米松組肺泡灌洗液中IL-4水平明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)，IFN-γ水平明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。加味蘇子降氣湯組與地塞米松組IL-4、IFN-γ水平比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ 水平比較

與正常對照組比較：1)P<0.01；與哮喘模型組比較：2)P<0.05

3 討 論

哮喘是與免疫功能紊亂相關的氣道慢性炎癥性疾病〔3,4〕。此外，分子免疫學深入研究發現，輔助性T細胞(Th)亞群Th1和Th2之間存在著交互調節的關系，Th1/Th2失衡是哮喘發病的重要免疫學機制〔5〕，Th2分泌的細胞因子IL-4可誘發哮喘患者體內免疫球蛋白(Ig)E的生成。哮喘患者體內IL-4異常增高，Th2型免疫反應過高；哮喘患者體內Th1降低，IFN-γ生成低下，使IgE生成增加。Th1和Th2相互拮抗調節機體正常的免疫應答。Th1分泌的細胞因子IFN-γ能抑制哮喘發作〔6〕。

哮喘大多自幼發病，先天不足是其根本，其中又有部分在中年以后，因腎中陽氣漸虧而哮喘宿疾復發。腎陽虧虛是哮喘宿根形成之本〔7〕。蔣朱秀等〔8〕用相同方法致敏的哮喘模型實驗中，哮喘模型組大鼠血清中T 降低，證實哮喘模型大鼠有腎陽虛證及相關癥候。蘇子降氣湯源自《太平惠民和劑局方》，是中醫學治療“上實下虛”型哮喘的名方；加味蘇子降氣湯在此基礎上，加大了溫補腎陽的功效〔9〕。方中紫蘇子、半夏、當歸、前胡、厚樸、肉桂、甘草等諸藥合用可有效鎮咳、祛痰、平喘，作用大且分散,水溶性強，起效快，鎮咳作用可直達咳嗽中樞，鎮咳成分為生物堿〔10〕。最終方劑通過下調IL-4、上調IFN-γ水平達到調節Th1/Th2細胞因子平衡的目的。Th1/Th2模式與中醫學的陰陽學說、虛實證候、臟象學說等均有密切關系，細胞因子網絡可能是中醫證候的重要物質基礎。故研究Th1/Th2失衡和IgE分泌是防治哮喘的新途徑〔11,12〕。本實驗結果顯示加味蘇子降氣湯能明顯降低哮喘大鼠IL-4含量，升高IFN-γ水平，改善Th1/Th2失衡，從而達到防治哮喘的作用。